一种金钗石斛眼用温敏凝胶及其制备方法

1.本发明涉及眼用用品技术领域，具体为一种金钗石斛眼用温敏凝胶及其制备方法。


背景技术：

2.金钗石斛是我国名贵中药，《神农本草经》、《中国药学大辞典》等记载金钗石斛具有健脑明目、滋阴润肺、益胃补肾、补五脏虚劳等功效，常用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热、目暗不明、萎缩性胃炎、浅表性胃炎、慢性结肠炎等疾病的治疗。现代研究还表明，金钗石斛有延年益寿、抗肿瘤、抗衰老、促进肌体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集等药理作用。金钗石斛功效众多、应用广泛，其中，对白内障、青光眼、视疲劳、干眼症等眼部疾病具有突出的治疗效果。因此，如何提高金钗石斛在临床眼科领域的利用价值一直是研究者关注的热点。
3.近几十年来，我国市场上相继推出了以石斛为主的“石斛夜光丸”、“石斛明目丸”、“清睛粉”、“石斛爽目颗粒”等产品，但这些产品均以口服给药为主，需通过机体吸收进入全身循环系统才能到达治疗部位，而对于眼部疾病而言，存在口服给药的靶向性不强，无法实现快速有效治疗的问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于克服上述背景技术困难，提供了一种增强金钗石斛在眼部的靶向治疗效果，使其直接与眼部接触，延长作用时间，进而提高其疗效的一种金钗石斛眼用温敏凝胶及其制备方法。
5.为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种金钗石斛眼用温敏凝胶制备方法，所述眼用温敏凝胶由基质、金钗石斛中药提取物、辅料和水组成，所述基质采用泊洛沙姆188和泊洛沙姆407，所述辅料包括调节剂、防腐剂和渗透促进剂，制备方法包括以下步骤：（1）称取0.4g的调节剂溶于50 ml的蒸馏水中制得调节剂溶液，并从中取出22ml的调节剂溶液备用；（2）按0.1:0.8-2.0的重量比称取泊洛沙姆188和泊洛沙姆407后配制基质，并均匀撒布于步骤（1）取出的22ml调节剂溶液中，制得混合液ⅰ备用；（3）将步骤（2）制得的混合液ⅰ置于4℃的冰箱过夜，体系变得澄清透明，即得空白温敏凝胶；（4）向步骤（3）制得的空白温敏凝胶中加入0.003g的防腐剂，并搅拌溶解，制得混合液ⅱ备用；（5）取0.5ml的渗透促进剂，加入金钗石斛中药提取物0.20g，超声使其完全溶解，制得混合液ⅲ备用；（6）在不断搅拌条件下，将步骤（4）制得的混合液ⅱ以细流状缓慢加入步骤（5）制
得的混合液ⅲ中，使其充分混匀，即得含药温敏凝胶。
6.进一步，所述步骤（1）的调节剂采用edta
·
2na。
7.进一步，所述步骤（2）优选按0.1:1.25的重量比称取泊洛沙姆188和泊洛沙姆407后配制基质，即称取0.4g的泊洛沙姆188和5.0g的泊洛沙姆407进行配制。
8.进一步，所述步骤（3）中采用冷溶法使泊洛沙姆进行充分溶解。
9.进一步，所述步骤（4）中的防腐剂采用苯扎溴铵，所述防腐剂的浓度为0.014%。
10.进一步，所述步骤（5）中的渗透促进剂采用 labrasol。
11.进一步，所述步骤（5）中的金钗石斛中药提取物采用鲜品或干品金钗石斛经醇水混合溶剂浸泡65-97min后，加入1-3倍醇水混合溶剂的水进行头煎，煎煮20-25min制得头煎液，再加入1-2倍醇水混合溶剂的水进行尾煎，煎煮18-20min制得尾煎液，将头煎液和尾煎液按体积比为1:1.5-2的比列进行混合后，萃取制得金钗石斛中药提取物。
12.进一步，所述步骤（6）中为保证温敏凝胶体系拥有较好的流动性，控制环境温度不高于25℃。
13.本发明提供的一种金钗石斛眼用温敏凝胶及其制备方法，具备以下有益效果：本发明所选原料金钗石斛属于药食同源名贵药材，来源广泛，种植规范，安全性好，其有效成分所具有的明目功效及其作用机制明确；本发明将金钗石斛制备成眼用温敏凝胶制剂，通过直接与眼部接触，延长作用时间，进而提高其疗效；本发明制备工艺简单，制得的眼用温敏凝胶外观为浅棕色半透明状，在非生理条件下为溶液状态，当达到生理温度时则迅速变为凝胶状，产品的ph、黏度、胶凝温度、胶凝时间、溶蚀和释放等性质适宜，方便使用，安全无刺激，吸收快、消除快的特性，本发明为金钗石斛新产品的开发应用提供了依据，也为推动其种植产量、带动地方经济做出了贡献，从而提高了金钗石斛在临床眼科领域的利用价值，有效解决了金钗石斛口服给药的靶向性不强，无法实现快速有效治疗的问题。
附图说明
14.图1为本发明金钗石斛眼用温敏凝胶的累积溶蚀曲线及累积释放曲线的结构示意图。
15.图2为本发明金钗石斛眼用温敏凝胶经眼部给药后在兔眼房水中石斛碱浓度随时间变化的曲线图。
具体实施方式
16.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或同种要素。
17.显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
18.实施例1，本发明提供的一种金钗石斛眼用温敏凝胶及其制备方法，由基质、中药提取物、辅料和水组成，所述基质采用泊洛沙姆188和泊洛沙姆407，所述辅料包括调节剂、防腐剂和渗透促进剂，所述金钗石斛眼用温敏凝胶是采用包括下述步骤的方法制备：
（1）称取0.4g的edta
·
2na溶于50 ml的蒸馏水中制得edta
·
2na溶液，并从中取出22ml的edta
·
2na溶液；（2）分别称取0.4g的泊洛沙姆188和5.0g的泊洛沙姆407配制基质，并均匀撒布于步骤（1）取出的22 mledta
·
2na溶液中，制得混合液ⅰ备用；（3）将步骤（2）制得的混合液ⅰ置于4℃的冰箱过夜，体系变得澄清透明，即得空白温敏凝胶；（4）向步骤（3）制得的空白温敏凝胶中加入0.003g的苯扎溴铵，并搅拌溶解，制得混合液ⅱ备用；（5）取0.5ml的labrasol，加入金钗石斛提取物0.20g，超声使其完全溶解，制得混合液ⅲ备用；（6）在不断搅拌条件下，将步骤（4）制得的混合液ⅱ以细流状缓慢加入步骤（5）制得的混合液ⅲ中，使其充分混匀，即得含药温敏凝胶。
19.实施例2，与实施例1不同之处是0.30g的泊洛沙姆188。
20.实施例3，与实施例1不同之处是0.50g的泊洛沙姆188。
21.上述实施例中的泊洛沙姆188用量范围为0.30-0.50g，在该范围内胶凝温度会随泊洛沙姆188用量的增加而升高。若泊洛沙姆188的用量小于0.30g时，制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶经过检测胶凝温度t1小于24.5
±
0.1℃，当环境温度高于25℃时用眼用制剂容易胶凝，不便于使用；若泊洛沙姆188的用量大于0.50g时，制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶经过检测胶凝温度t2大于37.0
±
0.2℃，胶凝时间延长至160
±
1.2s，难以在眼部快速发生凝胶化。
22.实施例4，与实施例1不同之处是4.0g的泊洛沙姆407。
23.实施例5，与实施例1不同之处是6.0g的泊洛沙姆407。
24.胶凝温度随泊洛沙姆407用量的增加呈下降趋势，在制备过程中若泊洛沙姆407的用量小于4.0g，则制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶经过检测胶凝温度t1大于40℃，滴眼后无法胶凝，故而达不到延长药物在眼部的滞留时长的目的；若若泊洛沙姆407的用量大于6.0g，制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶经过检测胶凝温度t1、t2分别小于21.0
±
0.4℃和30.0
±
0.2℃，凝胶时间小于10.0
±
0.3s，同样造成不便于使用。理想的眼用温敏凝胶，其胶凝温度t1应高于室温（即t1宜大于25℃）,并且在经泪液稀释后仍能在低于体温条件下形成凝胶（即t2宜小于37℃），按照本技术配比制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶经过检测胶凝温度t1、t2分别为26.0
±
0.2℃和36.0
±
0.2℃，可同时满足给药方便和给药后在眼部快速形成凝胶的要求。
25.对照组1，与实施例1不同之处是采用透明质酸或透明质酸钠代替edta
·
2na溶液。
26.采用透明质酸或透明质酸钠代替edta
·
2na溶液，制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶取适量置于25 ml烧杯中，使用旋转黏度计的3号转子，转速调至45rpm测得其黏度为673
±
5.86mpa
·
s，所得温敏凝胶的黏度有所升高，当胶凝温度降低至24.1
±
0.3℃时，不便于使用。
27.对照组2，与实施例1不同之处是不采用冷溶法对泊洛沙姆进行充分溶解。
28.泊洛沙姆水溶性良好，在低温（4～10℃) 时为液体，当温度升高至室温或体温时形成水凝胶，温度降低时又转变成可流动液体状，故通常常用冷溶法制备泊洛沙姆溶液。若
采用常温或热熔法进行溶解，易使泊洛沙姆溶解速度减慢，溶解不充分，使制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶外观略浑浊，使用时对眼部存在刺激性，故采用常温或热熔法对泊洛沙姆进行溶解，无法满足金钗石斛温敏凝胶安全使用的要求，本技术中采用冷溶法对泊洛沙姆进行充分溶解，制备出的金钗石斛温敏凝胶具有原位凝胶及生物黏附剂的双重优势。
29.本技术现对实施例1所述操作方法制备出的金钗石斛眼用温敏凝胶进行体内外评价和安全性评价：（1）金钗石斛温敏凝胶的体外性质评价ph值的测定：取温敏凝胶适量于50ml烧杯中加水适量使溶解，用ph计测得其ph值为6.65
±
0.15，符合眼用制剂ph值6.0～8.0的要求。
30.黏度的测定：取温敏凝胶适量于25 ml烧杯中，使用旋转黏度计的3号转子，转速调至45rpm测得其黏度为230
±
1.74mpa
·
s，所得温敏凝胶的黏度适宜、方便使用。
31.胶凝温度、胶凝时间的测定：采用试管倒置法测得温敏凝胶加人工泪液前、后的胶凝温度分别为26
±
0.2℃和36
±
0.2℃，胶凝时间仅需24
±
1.5s，可满足给药后在眼部快速形成凝胶的要求。
32.体外溶蚀性及释药性能考察：采用无膜溶出法考察金钗石斛温敏凝胶体外溶蚀性及释药性，由图1可以看出在温敏凝胶中石斛碱的释放速度和程度几乎与凝胶的溶蚀过程同步，两者均遵循零级动力学方程。经拟合，累积溶蚀曲线的方程为y=0.1961t+7.7904（r=0.9926），累积释放曲线的方程为q=0.1896t+9.9328（r=0.9939）。
33.（2）金钗石斛温敏凝胶的房水药动学初步评价色谱条件：db-1毛细管柱（100%二甲基聚硅氧烷为固定相，柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm）。
34.程序升温：初始温度80℃，以10℃/min的速率升温至250℃，保持5min，进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，载气（n2）流速2ml/min，进样量1μl，分流比1:1。
35.动物实验：将24只雄性新西兰兔随机分成6组，每组4只兔子（8只眼睛）分别对应一个采样时间点，给药前禁食不禁水12h；固定兔子头部，用生理盐水冲洗双眼并用纱布蘸干后分别于双眼滴入100μl金钗石斛温敏凝胶，轻轻闭合双眼睑30s，再于给药后10、20、40min，1、2、3h用生理盐水冲洗结膜囊及角膜、纱布蘸干；取适量1%盐酸丁卡因溶液对兔眼进行表面麻醉，再以1ml注射器自角膜缘刺入前房缓慢抽取200μl房水，置于-20℃冻存备用。
36.临用前将房水样品从冰箱中取出恢复至室温，经前处理后装于进样瓶中进行气相色谱分析；通过标曲计算各个时间点房水样本中的药物浓度，绘制药-时曲线，采用药动学软件估算样品中药物的主要药动学参数。
37.结果表明，金钗石斛温敏凝胶经眼部给药后，石斛碱可迅速穿过角膜进入房水（t
max
=0.17
±
0.07h）、达到峰浓度（c
max
=24.53
±
6.42μg/ml），并在1h后药物浓度降至c
max
的2.22%，药动学过程整体表现出吸收快、消除快（t
1/2
=0.75
±
0.11h）的特点。
38.（3）安全性评价单次给药眼刺激试验：取健康新西兰兔8只，雌雄各半，左眼滴入金钗石斛温敏凝胶0.1ml，被动闭合10s，右眼滴入生理盐水作为对照；单次给药24h后用温水去除残留受试物，观察并记录去除受试物后l、24、48、72 h至1周眼睛刺激情况。
39.多次给药眼刺激试验：试验操作方法同单次给药，每天给药2次，持续7天，于每天末次给药后1h去除残留受试物并观察对眼睛的刺激情况；停止给药后，于第8-14天持续观察眼睛刺激的恢复情况。
40.经过单次和多次给药试验后，监测到在各时间点新西兰兔双眼未见异常分泌物，结膜无肿胀、充血，角膜无浑浊现象，巩膜也未见异常反应，刺激性评分总分为0，说明金钗石斛温敏凝胶制剂性质温和、无明显刺激性、安全性较好。
41.综上所述，本发明参照上述方法步骤生产出的金钗石斛眼用温敏凝胶外观为浅棕色半透明状，且所选原料金钗石斛属于药食同源名贵药材，来源广泛，种植规范，安全性好，本技术中的金钗石斛中药提取物采用鲜品或干品金钗石斛经醇水混合溶剂浸泡80min后，加入3倍醇水混合溶剂的水进行头煎，煎煮25min制得头煎液，再加入1倍醇水混合溶剂的水进行尾煎，煎煮18min制得尾煎液，将头煎液和尾煎液按体积比为1:1.5的比列进行混合后，萃取制得金钗石斛中药提取物；其有效成分所具有的明目功效及其作用机制明确并结合泊洛沙姆188和泊洛沙姆407作为基质，在辅料和水的作用下使本技术产品在非生理条件下为溶液状态，当达到生理温度时则迅速相变为凝胶状，经检测本技术产品的ph、黏度、胶凝温度、胶凝时间、溶蚀和释放等性质适宜，使用方便，安全无刺激；本发明制得的眼用温敏凝胶经动物体内实验验证，本发明生产的产品经兔子眼部给药具有吸收快、消除快的特性，本发明为金钗石斛新产品的开发应用提供了依据，也为推动其种植产量、带动地方经济做出了贡献，从而提高了金钗石斛在临床眼科领域的利用价值，有效解决了金钗石斛口服给药的靶向性不强，无法实现快速有效治疗的问题。
42.对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
43.此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
44.本发明的保护范围不仅限于上述公开的具体技术方案，以上所述仅为本实发明的较佳实施方式，并不能以此来限制本发明，凡是依据本发明的技术实质对以上具体技术方案所作的任何细微修改、等同替换和改进，均应包含在本发明技术方案的保护范围之内。