一种延缓衰老药物组合物的配方及其制作方式的制作方法

1.本技术涉及功能食品和保健食品领域，具体涉及一种延缓衰老药物组合物的配方及其制作方式。


背景技术：

2.衰老是一种自然的、不可避免的生命过程，以细胞衰老为基础，机体各组织器官、生理功能随年龄增长发生不可逆的退行性改变。伴随衰老进程，自由基不断积累对细胞和组织造成氧化损伤。但目前衰老没有具体的作用机制，carlos等人提出了衰老的九大特征：基因组不稳定、端粒的缩短、表观遗传学的改变、蛋白质动稳态失衡、营养感知失调、线粒体功能障碍、细胞衰老、干细胞耗竭以及细胞间通讯改变。这些九大衰老特征并不都是有害的，如严重的线粒体dna突变、端粒丢失会损伤机体；而轻微的线粒体功能障碍对机体的抵抗时有益的，由此可见，损伤程度不同所造成的损害也不同，衰老的发生也不是单一因素导致的，而是由多个复杂的因素共同作用而成。这些复杂的因素通过人为调控可以使之发生一定的改变，延缓衰老的发生就是调控其发生的目的。
3.秀丽隐杆线虫简称线虫，是一种多细胞真核生物，个体结构简单、寿命较短、遗传背景清楚、繁殖速度快且易培养，在基因及信号通路上和人类比较保守，与人类有60％～80％的基因相似，是研究衰老的经典模型生物。
4.将本发明作用于线虫中，可快速检验本发明的延缓衰老的作用与效果。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种延缓衰老药物组合物的配方及其制作方式。其具体配方为：β-葡聚糖、壳聚糖、辅酶q10、cbd、谷胱甘肽、硫辛酸、叶黄素、烟酰胺、维生素b2。该药物组合物配方科学合理，无配伍禁忌。经安全性毒理学试验，对雄、雌大鼠的各项观察指标未产生明显毒性作用。本发明制作简单、食用方便，既考虑了线粒体完整呼吸链的修复和复壮，还组合有超级抗氧化剂和自由基清除剂的虾青素，经秀丽隐杆线虫实验证实延寿效果显著；而且大样本人群使用，改善睡眠、改善肤质、改善排泄、美白肌肤等恢复青春方面的效果相当显著。
6.本发明通过下述技术方案实现的。
7.优选的药物组合物为：按重量份计，β-葡聚糖20-25份、壳聚糖10-15份、辅酶q10 4-5份、cbd 10-15份、谷胱甘肽2-3份、硫辛酸2-3份、叶黄素8-10份、烟酰胺20-30份、维生素b215-20份。
8.进一步优选的药物组合物为：按重量份计，β-葡聚糖22份、壳聚糖12份、辅酶q10 4份、cbd 12份、谷胱甘肽2份、硫辛酸2份、叶黄素8份、烟酰胺22份、维生素b216份。
9.本发明技术方案，具有如下优点：
10.β-葡聚糖：葡聚糖是一种天然的多糖类化合物。在真菌界以β-葡聚糖的形式大量存在,是一种无法人工合成的天然物质,许多药理实验及临床报告显示β-葡聚糖主要通过
调节肠道菌群稳定以维护人体健康。其主要功能有抗肿瘤、免疫调节、对心肌的保护作用、促进伤口愈合、抗凝血作用、抗病毒抗菌、抗氧化以及抗衰老。
11.壳聚糖：壳聚糖是自然界中惟一的碱性阳离子物质,具有多种特异的理化性质及生物学特性,且无毒、无刺激、可自然降解,具有极大的临床应用价值。壳聚糖有良好的生物相容性、安全无毒性,并且能通过调节肠道菌群维持肠道稳态以减少机体负担。其主要功能有免疫调节、抗肿瘤、治疗胃溃疡、降血脂血糖、免疫佐剂、药物载体以及抗疲劳等。
12.辅酶q10：辅酶q10是一种醌环类化合物,又称为泛醌10。不同来源的辅酶q10,侧链异戊烯单位数目是有差异的。人类和哺乳动物有10个异戊烯单位,因此称为辅酶q10。在人体的主要器官如心、肝、肾、胰腺中均有辅酶q10的存在。研究表明，辅酶q10能有效延缓细胞衰老并使衰老的细胞恢复活性。其主要功能有抗氧化和清除自由基、抗肿瘤、提高人体免疫力、抗炎、缓解疲劳和提高运动能力、防老抗衰以及保护心血管等。
13.谷胱甘肽：谷胱甘肽存在于所有动物细胞中,在人类的细胞中是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成,正常环境下以其硫醇还原型存在,是甘油醛磷酸脱氢酶的辅基，又是乙二醛酶及磷酸丙糖脱氢酶的辅酶,在许多生命活动中起着直接或间接的作用,参与体内三羧酸循环及糖代谢,使人体获得高能量,还能激活多种酶。其主要作用有抗氧化、解毒、抗惊厥、抗血栓、抗高血压、抗动脉粥样硬化、保护肾脏、保护肝脏、抗炎。
14.硫辛酸：硫辛酸是一种存在于线粒体的辅酶，类似维他命，能消除加速老化与致病的自由基(改善精子活力的基础)。硫辛酸在体内经肠道吸收后进入细胞,兼具脂溶性与水溶性的特性，因此可以在全身通行无阻，到达任何一个细胞部位，提供人体全面效能，是具脂溶性与水溶性的万能抗氧化剂，能将氧化的细胞中的活性氧有效去除使其恢复活性。
15.烟酰胺：烟酰胺是辅酶i和辅酶ii的组成部分，缺乏时可影响细胞的正常呼吸和代谢而引起糙皮病。烟酰胺胃肠道易吸收，吸收后分布到全身组织，经肝脏代谢，仅少量以原形自尿液排出。烟酰胺是美容皮肤科学领域公认的皮肤抗老化成份，在皮肤抗老化方面最重要的功效是减轻和预防皮肤在早期衰老过程中产生的肤色黯淡、发黄，也可以修复受损的角质层脂质屏障，提高皮肤抵抗力。其主要作用是抗心律失常、改善血管内皮功能、刺激β细胞再生以及抗炎抗氧化等。
16.叶黄素：叶黄素是脂溶性维生素的一种，补充叶黄素可以延缓其近视度数的增加。叶黄素具有抗氧化作用,能减少面部色素沉着,减少皱纹的产生。其次，叶黄素有清除自由基的作用,能帮助人体清除体内的有害物质。它还可以抗紫外线,抗辐射,所以对眼睛有一定的保护作用。另外，叶黄素还具有抗突变、防止肿瘤发生、抗癌等功效。
17.维生素b2：维生素b2是b族维生素，其是水溶性维生素。其参与机体的生物氧化及能量代谢，可以提高机体的蛋白利用率，促进生长发育，维护皮肤和细胞膜的完整性，具有保护皮肤、毛囊以及皮脂腺的功能。另外，其还具有调控参与细胞的生长代谢、抗氧化以及延缓细胞衰老的作用。
18.本发明中所使用的原料均通过购买所得，β-葡聚糖、壳聚糖、辅酶q10、cbd、谷胱甘肽、硫辛酸、叶黄素、烟酰胺、维生素b2，经科学配制，可以维持人体健康。谷胱甘肽、硫辛酸、叶黄素、烟酰胺、cbd和维生素b2均具有抗氧化的功能，有利于延缓细胞的衰老以及使老化细胞恢复活力的作用；β-葡聚糖和壳聚糖有利于肠道微生物菌群形成一个利于人体生存的稳态结构。将两个部分的组成将结合，可以在维持人体健康的情况下延缓细胞的衰老，有效
的延长寿命。
19.本发明药物组合物形态包括口服制剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。
20.以口服制剂为例，本发明的制作方法为：按照上述配方比例称取原料，混合均匀后用蒸馏水稀释药物，40℃水浴加热搅拌至混合均匀，100g药物稀释定容至1000ml即得本发明组方口服制剂。
21.更进一步，将本配方作用于线虫实验，用于测定本配方的抗衰老作用与效果。
附图说明
22.图1为实施例实验组对照组生存曲线图；
23.图2为本发明实施例对线虫健康寿命的柱状图；其中，a为咽泵运动试验图，b为身体运动试验图；
24.图3为本发明实施例对线虫抵抗热应激的生存柱状图(n2,35℃液体热应激实验)；
25.图4为实施例对线虫抗氧化应激的生存柱状图；其中，a为h2o2氧化应激生存曲线图，b为胡桃醌氧化应激生存柱状图。
具体实施方式
26.下面是本发明的具体实施方式，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。
27.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
28.实施例1
29.一种延缓衰老药物组合物的配方及其制作方式，其步骤如下：
30.药物组合物配方：按重量单位计，β-葡聚糖22份、壳聚糖12份、辅酶q104份、cbd 12份、谷胱甘肽2份、硫辛酸2份、叶黄素8份、烟酰胺22份、维生素b2 16份
31.制作方法为：以100g为例，按照上述组方称取β-葡聚糖22g及壳聚糖12g，40℃下搅拌均匀，得a液；再分别称取辅酶q10 4g、cbd 12g、谷胱甘肽2g、硫辛酸2g、叶黄素8g、烟酰胺22g以及维生素b2 16g，混合均匀后，在40℃水浴下边搅拌边缓慢加入a液中；缓慢加入500-600ml蒸馏水，搅拌均匀后定容至1000ml，即得本组方的口服制剂。
32.实施例2
33.一种延缓衰老药物组合物的配方及其制作方式，其步骤如下：
34.药物组合物配方：按重量单位计，β-葡聚糖20份、壳聚糖13份、辅酶q105份、cbd 11份、谷胱甘肽3份、硫辛酸2份、叶黄素9份、烟酰胺21份、维生素b2 16份
35.制作方法为：以100g为例，按照上述组方称取β-葡聚糖20g及壳聚糖13g，40℃下搅拌均匀，得a液；再分别称取辅酶q10 5g、cbd 11g、谷胱甘肽3g、硫辛酸2g、叶黄素9g、烟酰胺21g以及维生素b2 16g，混合均匀后，在40℃水浴下边搅拌边缓慢加入a液中；缓慢加入500-600ml蒸馏水，搅拌均匀后定容至1000ml，即得本组方的口服制剂。
36.实施例3
37.一种延缓衰老药物组合物的配方及其制作方式，其步骤如下：
38.药物组合物配方：按重量单位计，β-葡聚糖21份、壳聚糖12份、辅酶q105份、cbd 12份、谷胱甘肽2份、硫辛酸3份、叶黄素8份、烟酰胺22份、维生素b2 15份
39.制作方法为：以100g为例，按照上述组方称取β-葡聚糖21g及壳聚糖12g，40℃下搅拌均匀，得a液；再分别称取辅酶q10 5g、cbd 12g、谷胱甘肽2g、硫辛酸3g、叶黄素8g、烟酰胺22g以及维生素b2 15g，混合均匀后，在40℃水浴下边搅拌边缓慢加入a液中；缓慢加入500-600ml蒸馏水，搅拌均匀后定容至1000ml，即得本组方的口服制剂。
40.实验例通过线虫模型进一步证明配方具有抗衰老作用
41.1.试验材料
42.实验材料：实施例1、实施例2、实施例3
43.实验菌株和虫株：尿嘧啶缺陷型大肠杆菌(e.coli)op50；秀丽隐杆线虫野生型n2菌株。
44.试剂：五氟尿嘧啶脱氧核苷，胡桃醌，琼脂，氯化钠，酵母浸粉，胰蛋白胨，去离子水，kh2po4，k2hpo4，蛋白胨，mgso4，naoh，次氯酸，水和氯醛等。
45.仪器：20℃恒温培养箱，37℃恒温培养箱，37℃恒温摇床，电子天平，普通显微镜，荧光显微镜，超净台，振荡器，4℃冰箱，移液枪，微波炉。
46.2.实验方法
47.2.1实验分组与干预方法
48.以n2秀丽隐杆线虫进行试验，实验对象分为对照组(0μm exa)和实验组，实验组包含实施例1(120μm exa 1)、实施例2(120μm exa 2)以及实施例3(120μm exa 3)。对照组以e.coli op50为食，实验组则以加有上述不同实施例配方的e.coli op50为食(终浓度为40μm)。为了防止e.coli op50代谢配方中某些成分改变其生物化学性质，本研究均使用高温灭活的e.coli op50菌液涂至ngm 表面。
49.2.2培养基的配置
50.标准线虫ngm培养基：每升培养基含3g nacl，2.5g蛋白胨，17g琼脂，加水定容至1l灭菌后，加1ml 5mg/ml胆固醇溶液，1ml 1mol/l mgso4，25ml 1mol/l pk缓冲液(ph＝6)；
51.lb液体培养基：10g nacl，10g蛋白胨，5g酵母粉，加水定容至1l，121℃灭菌20min。
52.m9缓冲液(ph＝6)：119g kh2po4，21.5g k2hpo4，加水定容至1l，121℃灭菌20min。
53.s-complete培养液：977ml s-basal培养液，10ml 1m柠檬酸钾缓冲液，10ml tracemetals溶液，3ml 1m naoh，3ml 1mol/l mgso4；
54.bleach裂解液由4ml去离子水，1.5ml 5mol/l naoh，2ml naclo配制而成。
55.2.3菌株培养
56.挑取一个的op50单菌落放于100ml lb液体培养基中，在振荡培养箱37℃，200rpm的条件下震荡培养过夜，至od600达到0.4-0.6，储存于4℃冰箱内待用。
57.2.4线虫培养与同步化
58.(1)用标准线虫ngm培养基培养线虫。正常培养温度为20℃培养箱，培养湿度控制在40％-60％以内。不同线虫株系一般只挑取一条活动旺盛的dauer时期线虫放入滴200μl op50菌液过夜培养后且表面平整的培养基中进行扩大培养，繁殖至一定数目后，对秀丽线虫进行同步化处理2-3次之后，再进行实验。
59.(2)用bleach裂解法进行同步化。把产卵期的雌雄同体线虫从ngm培养基上用m9缓
冲液冲洗，放于15ml离心管中，1700rpm，21℃离心1-2min，弃去上清液。使用相同方法重复洗皿两次后，加入等体积bleach裂解液，快速震荡3-5min，直至在体式显微镜下观察到液体澄清且含大量的虫卵。加入一定体积的m9缓冲液终止其裂解过程，离心后，弃去上清液，留沉淀。加入2ml m9缓冲液清洗沉淀，重复操作两遍。将其置于20℃摇床上过夜培养使虫卵发育成l1期幼虫。
60.产卵法：将产卵量高峰期的成虫挑选至含有op50(6cm直径培养皿滴加300μl od600为0.6的菌液)的ngm培养基平板上，25℃生化培养箱中产卵5h后，将成虫挑除，继续在培养箱中培养，即可得到同一时期的线虫。
61.2.5寿命观察
62.转移50条同期化的l4期线虫到ngm培养基中，在20℃恒温恒湿培养箱中培养，每2d统计一次线虫的死亡、存活和剔除的数目(为了保证线虫食物充足，需要2d更换一次ngm培养基)。线虫死亡判断标准：无移动及吞咽动作，轻触后仍无任何反应。剔除标准：逃离至平皿壁或盖上而干死；虫卵在体内孵化而成袋样虫；钻入琼脂中；生存期定义为：线虫从l4幼虫期(age＝0)至其被计数为死亡的时间，重复三次。
63.2.6数据统计
64.所有统计分析均采用spss 20.0软件，使用prism 8绘图。
65.3.结果分析
66.3.1实施例对n2线虫平均寿命的影响
67.实施例干预后n2线虫的寿命变化见表1。与对照组0μm exa相比，实施干预后线虫的生存曲线与平均寿命显著延长(图1与表1)，表明实施例干预能够延长n2线虫的寿命。
68.表1各组线虫寿命的统计分析
[0069][0070]
注：*，与n2+0μm exa相比，p《0.05；**，与n2+0μm exa相比，p《0.01
[0071]
3.2实施例对n2线虫健康寿命的影响
[0072]
在n2线虫中老年期(成虫后第8天、10天、12天)，记录每条线虫在1min内的咽泵吞咽次数。同理，在n2线虫中老年期，记录每条线虫在1min内的身体摆动次数。实验组和对照组每组咽泵运动速率实验和身体摆动实验均三个平行，每个平行10条线虫。
[0073]
通过n2线虫咽泵运动速率试验发现，通过实施例给药干预8天后，对照组线虫平均咽泵运动速率为81次/min，实施例平均速率为113.69次/min(p《0.001)。干预10天时，对照组线虫平均咽泵运动速率为42.15次/min，实施例平均速率为75.35次/min(p《0.001)。干预12天时，对照组线虫平均咽泵运动速率为12.59次/min，实施例平均速率为27.25次/min(p《0.05)(图2a)。实施例干预后的线虫咽泵运动能力显著高于对照组，即实施例干预显著改善
了线虫中老年期的咽泵运动功能。
[0074]
通过n2线虫身体摆动速率试验发现，通过实施例给药干预8天后，对照组线虫平均身体摆动速率为50.25次/min，实施例平均速率为81.36次/min(p《0.01)。干预10天时，对照组线虫平均身体摆动速率为22.33次/min，实施例平均速率为43.58次/min(p《0.01)。干预12天时，对照组线虫平均身体摆动率为13.36次/min，实施例平均速率为27.69次/min(p《0.05)(图2b)。实施例干预后的线虫身体摆动能力显著高于对照组，即实施例干预显著改善了线虫中老年期的身体摆动功能。
[0075]
3.3实施例对n2线虫抗热应激的影响
[0076]
35℃液体热应激实验：同步化后培养至l4末期或成虫初期的线虫转移至实验组和对照组的ngm上培养5天后，将12孔板的每个孔中加入1ml新鲜配置的s-complete培养液(含实验组和对照组)，在每个孔中放入10条虫，每隔2小时记录线虫死亡数和存活数。每组三个平行，每个平行40条虫。
[0077]
35℃液体热应激实验结果显示，干预8小时后对照组线虫的平均存活率为38.25％，实施例1给药组为58.23％(p《0.05)，实施例2给药组为57.69％(p《0.05)，实施例3给药组为62.03％(p《0.05)。在液体热应激条件下，实施例实验组组延长了野生型n2线虫的寿命(图3)。综上可以得出，实施例均显著增强了线虫对液体热应激的抵抗性。
[0078]
3.4实施例对n2线虫抗氧化应激的影响
[0079]
h2o2氧化应激：实施例干预n2线虫至第6天，将不同组别培养基上的线虫转移到ngm培养基中，将12孔板的每个孔中加入1ml新鲜配置的质量浓度为0.003％h2o2的s-complete培养液，在每个孔中放入10条线虫，每隔2小时记录线虫的死亡数和存活数。每组3板，每板50条。
[0080]
胡桃醌氧化应激：实施例干预n2线虫至第6天，将不同组别培养基上的线虫转移到ngm培养基中，取一个12孔板，每个孔中加入1ml新鲜配置的含有240μm浓度胡桃醌的s basal缓冲液，在每个孔中放入10条虫，每隔2小时记录线虫的死亡数和存活数，每组3板，每板50条。
[0081]
h2o2氧化应激结果显示(图4a)，对照组线虫的中位寿命为18小时，最大寿命为30小时。实施例1线虫的最大寿命为35小时；实施例2线虫的最大寿命为34小时；实施例3线虫的最大寿命为35小时；表明在0.003％h2o2引起的氧化应激下，实施例对n2线虫的最大寿命有一定程度的影响。
[0082]
胡桃醌氧化应激结果显示(图4b)，对照组线虫在干预6小时后的平均存活率为26.58％，实施例1线虫在干预6小时后的平均存活率为29.63％，实施例2线虫在干预6小时后的平均存活率为38.26％(p《0.05)，实施例3线虫在干预6小时后的平均存活率为39.65％(p《0.05)。表明在240μm胡桃醌引起的氧化应激下实施例对野生型n2线虫6小时内的总体寿命有一定程度的影响，但与对照组相比，实施例1影响不显著。
[0083]
综上所述，实施例1-3能够在一定程度上抵抗0.003％h2o2、240μm胡桃醌引起的氧化应激。
[0084]
本发明所述的药物组合物配方(包括实施例的组合物)，可以单独使用，用以延缓衰老，延长寿命。
[0085]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，故
凡未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化。