一种甘草粗提物的制备方法与流程

1.本发明涉及中药提取领域，特别是涉及一种甘草粗提物的制备方法。


背景技术：

2.甘草，是常用的中草药之一，有肾上腺皮质激素作用，抗炎、抗溃疡、抗过敏反应，抗癌，抗菌，抗病毒，促进胰液分泌，对离体肠有抑制，调节免疫功能，镇咳祛痰，抗突变，解毒，抗氧化，保护耳前庭功能、利尿，保肝、防止动脉硬化，抗脑缺血，预防糖尿病并发症等作用。
3.甘草提取物，是从甘草中提取的有药用价值的成份。甘草提取物一般包含：甘草甜素、甘草酸，甘草甙、甘草类黄酮、后幕比檀素、刺芒柄花素、槲皮素等。为黄色至棕黄色粉末。有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的功效。用于治疗脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛等病症。
4.目前，常用的甘草提取物的提取方法主要有水煮醇沉法、微波提取法、碱浸提法、酶法提取法、超滤法、超声提取法等。但是，现有技术中这些提取方法在提取过程中存在的提取率低、纯度低、成本高、性质不稳定等缺陷，不能适应现代活性成分提取技术的发展趋势。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种甘草粗提物的制备方法，以解决上述现有技术存在的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
7.本发明提供一种甘草粗提物的制备方法，包括以下步骤：
8.(1)将甘草经低温液氮粉碎、过筛后得甘草粉末；
9.(2)向所述步骤(1)的甘草粉末中加水并搅拌均匀浸泡，加入生物酶、非离子活性剂酶解；
10.(3)将所述步骤(2)酶解后的溶液进行灭酶、浸提、过滤、浓缩得浓缩液；
11.(4)将所述步骤(3)的浓缩液洗脱，收集洗脱液，干燥即得。
12.进一步的，所述步骤(1)中低温液氮粉碎过程中氮气进料量为1～3ml/s，甘草进料量为2～4g/s；粉碎温度为-10～0℃；
13.优选的，粉碎后过100～120目筛。
14.进一步的，所述步骤(2)中甘草粉末、水、生物酶、非离子表面活性剂的质量比为1:3～5:0.08～0.1:0.1。
15.进一步的，所述步骤(2)中生物酶为纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、α-淀粉酶中的一种或多种；
16.优选的，非离子表面活性剂为聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪醇醚类中的一种或多种。
17.进一步的，所述步骤(2)中酶解是在温度为50～60℃，ph值4～6的条件下酶解0.5～1.5h。
18.进一步的，所述步骤(3)中灭酶是在温度为80～100℃下灭酶5～15min。
19.进一步的，所述步骤(3)中浸提是在温度为80～100℃下提取60～90min；
20.优选的，所述步骤(3)中浓缩为真空浓缩，具体为减压低温浓缩酶解液至原体积的1/3～1/5。
21.进一步的，所述步骤(4)中洗脱是将浓缩液吸附于大孔树脂上，依次用蒸馏水、70％～90％的乙醇进行洗脱。
22.更进一步的，所述蒸馏水的用量为柱体积的3～5倍，洗脱至无色为止；
23.优选的，乙醇的用量为柱体积的20～40倍。
24.进一步的，所述步骤(4)中干燥为在-50～30℃的真空条件下干燥2～5h。
25.本发明与现有技术相比，具有以下技术效果：
26.本发明采用低温液氮粉碎结合非离子表面活性剂辅助酶法提取甘草粗提物，原料易得，工艺简单，便于操作，适用于大规模产业化生产。而且本发明所述方法一方面减少了提取次数，提高了甘草粗提物的得率和纯度，降低了生产成本，另一方面维持了甘草粗提物的结构和性质稳定，大大提高了其营养性、安全性和可接受性。非离子表面活性剂对纤维素酶和果胶酶在水解过程中的促进作用。缩短了预处理及提取时间，降低了时间成本，提高了经济效益。
27.本发明的方法能最大限度保留甘草的有效成分，制备方法简单，提取效率高，甘草粗提物纯度高收率高，真正到达活性物质的提取，药用活性成分与杂质成分的高效分离，能最大程度保留甘草粗提物的活性。
具体实施方式
28.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
29.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
30.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
31.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本技术说明书和实施例仅是示例性的。
32.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即
意指包含但不限于。
33.实施例1
34.一种黄芪粗提物的制备方法，包括以下步骤：
35.(1)将干燥洁净的甘草根经低温液氮粉碎；过150目筛后得甘草粉末；其中低温液氮粉碎过程中氮气进料量为2ml/s，甘草进料量为3g/s；粉碎温度为-5℃；
36.(2)将黄芪粉末1份，水4份，聚山梨酯0.1份，纤维素酶0.04份，果胶酶0.02份、蛋白酶0.02份、α-淀粉酶0.02份在55℃、ph值为5.0的条件下酶解处理1h；
37.(3)将酶解液在90℃灭酶10min；然后在90℃提取75min；过滤；真空减压低温浓缩酶解液浓缩原体积的1/4得到浓缩液；
38.(4)将浓缩液吸附于大孔树脂吸附柱上，先用柱体积4倍的蒸馏水洗脱至无色，再用柱体积30倍80％的乙醇洗脱，最后在-10℃的真空条件下干燥3h即得。
39.实施例2
40.一种黄芪粗提物的制备方法，包括以下步骤：
41.(1)将干燥洁净的甘草根经低温液氮粉碎；过100目筛后得甘草粉末；其中低温液氮粉碎过程中氮气进料量为1ml/s，甘草进料量为2g/s；粉碎温度为-10℃；
42.(2)将黄芪粉末1份，水4份，聚氧乙烯脂肪酸酯类活性剂0.1份，纤维素酶0.04份，果胶酶0.02份、蛋白酶0.01份、α-淀粉酶0.01份在50℃、ph值为4.0的条件下酶解处理0.5h；
43.(3)将酶解液在80℃灭酶5min；然后在80℃提取60min；过滤；真空减压低温浓缩酶解液浓缩原体积的1/3得到浓缩液；
44.(4)将浓缩液吸附于大孔树脂吸附柱上，先用柱体积3倍的蒸馏水洗脱至无色，再用柱体积20倍70％的乙醇洗脱，最后在-50℃的真空条件下干燥2h即得。
45.实施例3
46.一种黄芪粗提物的制备方法，包括以下步骤：
47.(1)将干燥洁净的甘草根经低温液氮粉碎；过200目筛后得甘草粉末；其中低温液氮粉碎过程中氮气进料量为3ml/s，甘草进料量为4g/s；粉碎温度为0℃；
48.(2)将黄芪粉末1份，水4份，聚氧乙烯脂肪醇醚类活性剂0.1份，纤维素酶0.04份，果胶酶0.02份、蛋白酶0.01份、α-淀粉酶0.02份在60℃、ph值为6.0的条件下酶解处理1.5h；
49.(3)将酶解液在100℃灭酶15min；然后在100℃提取90min；过滤；真空减压低温浓缩酶解液浓缩原体积的1/5得到浓缩液；
50.(4)将浓缩液吸附于大孔树脂吸附柱上，先用柱体积5倍的蒸馏水洗脱至无色，再用柱体积40倍90％的乙醇洗脱，最后在30℃的真空条件下干燥5h即得。
51.实施例4,
52.与实施例1的区别在于，步骤(1)中低温液氮粉碎过程中氮气进料量为1ml/s，甘草进料量为2g/s；粉碎温度为-10℃。
53.实施例5
54.与实施例1的区别在于，步骤(2)中不含有蛋白酶。
55.实施例6
56.与实施例1的区别在于，步骤(2)中不含α-淀粉酶中。
57.实施例6
58.与实施例1区别在于，步骤(2)中酶解是在温度为60℃，ph值4.8的条件下酶解1h。
59.实施例7
60.与实施例1的区别在于，步骤(3)中灭酶是在温度为100℃下灭酶9min。
61.实施例8
62.与实施例1的区别在于，步骤(3)中浸提是在温度为80℃下提取80min。
63.实施例9
64.与实施例1的区别在于，步骤(3)中浓缩为真空减压低温浓缩酶解液浓缩原体积的4/15。
65.实施例10
66.与实施例1的区别在于，步骤(4)中洗脱用乙醇为柱体积30倍的90％的乙醇溶液。
67.实施例11
68.与实施例1的区别在于，步骤(4)中干燥为在-30℃的真空条件下干燥2h。
69.对比例1
70.按照传统提取方法进行提取。
71.对比试验
72.测定实施例1～3及对比例1中甘草粗提物的的总黄酮含量，结果见表1。
73.表1不同制备方法对应甘草粗提物的总黄酮含量对比结果表
[0074][0075][0076]
结果：由表1可知，本发明制备方法生产的甘草提取物，总黄酮含量为2.9％以上，均高于对比例生产提取物总黄酮的含量，进一步验证本发明工艺改进的可行性和可靠性。
[0077]
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。