一种高后生元含量的制剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种高后生元含量的制剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.后生元是指灭活的益生菌细胞以及它们的相关代谢副产品，有能力为宿主的健康提供益处，已被广泛接受的定义为：后生元是对宿主健康有益的无生命的微生物和/或其成分(包括代谢物、细胞组分或无细胞混合物)；包括许多不同的成分，如短链脂肪酸、微生物细胞组分、胞外多糖、细胞裂解物、磷壁酸、肽聚糖、活性脂质和有机酸等。与活的益生菌相比，后生元具有清晰的化学结构，安全的剂量参数以及更长的货架期与良好的吸收、代谢、分布和排泄能力，同时还克服了益生菌在使用过程中存在的潜在风险，如腹胀和肠胃气胀，益生菌相关的菌血症和真菌病，以及可能的抗生素抗性基因漂移等风险。因此，后生元的开发具有广阔的市场前景。
3.目前，对于后生元制剂的开发主要集中在改善肠道健康、减肥降脂方面，如公开号为cn111494607a的中国专利申请公开了一种提高仔猪生长性能及改善肠道健康富硒后生元发酵中药微生物制剂，包括如下组分以及重量份：白头翁5～10份、黄芪10～20份、苦参5～10份、山药10～20份、当归10～20份、山楂10～20份、抗菌肽素6～8份、富硒后生元8～10份、酵母菌6～10份、乳酸杆菌6～10份、豆粕1000～1200份、玉米粉500～700份。公开号为cn113854461a的中国专利申请公开了一种复合后生元固体饮料，该固体饮料由莱菔硫烷、丁酸钠、后生元固体粉末、粘合剂、甜味剂和酸味剂成分组成；该后生元固体饮料，尤其适用于高血脂、脂肪肝、减肥人群等具有特殊需求人群。
4.目前市面上的含有后生元的制剂存在制剂中后生元的含量较低，具有抗免疫衰老效果的后生元的制剂甚少，因此，开发出一种后生元含量高，且具有优异的抗免疫衰老效果的后生元的制剂迫在眉睫。


技术实现要素：

5.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种高后生元含量的制剂及其制备方法和应用。本发明提供的制剂后生元含量高，且具有优异的抗免疫衰老效果。另外，本发明提供的高后生元含量的制剂的制备方法简单，易于产业化实施，有利于其大规模推广应用。
6.本发明的技术方案是：
7.一种高后生元含量的制剂，包括以下组分及其质量份数：
8.后生元60-70份，聚乙烯醇0.5-1份，吸收促进剂2-5份，稳定剂0.1-0.3份；所述吸收促进剂包括山梨醇和l-岩藻糖；所述稳定剂包括聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精。
9.进一步地，所述的高后生元含量的制剂，包括以下组分及其质量份数：
10.后生元64份，聚乙烯醇0.7份，吸收促进剂3份，稳定剂0.2份。
11.进一步地，所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比4-6：1组成。
12.进一步地，所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比5：1组成。
13.进一步地，所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比2-4：10-13组成。
14.进一步地，所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比3：10组成。
15.进一步地，所述后生元的制备方法为：
16.(1)取发酵物料，加水，水的加入量为发酵物料质量的10-20倍，搅拌，搅拌速度为600-900r/min，搅拌时间为20-40min，得混合物料；
17.(2)向步骤(1)所得混合物料中加入发酵菌，发酵菌的加入量为混合物料质量的1-3％，发酵，发酵温度调节为27-33℃，发酵时间为4-7h，发酵结束后调节发酵温度为34-36℃，进行再次发酵，发酵时间为5-10h，得发酵物料；
18.(3)将步骤(2)所得发酵物料过滤，将滤液杀菌、离心，离心速度为2000-3000r/min，离心时间为10-20min，收集上清液，即得。
19.进一步地，所述后生元的制备方法步骤(1)中所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
20.葡萄糖20-30份，蛋白胨6-12份，银耳多糖0.2-0.5份，菊芋粉8-12份，磷酸氢二钾1-3份，硫酸镁0.4-0.8份。
21.进一步地，所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
22.葡萄糖26份，蛋白胨9份，银耳多糖0.3份，菊芋粉10份，磷酸氢二钾2份，硫酸镁0.6份。
23.进一步地，所述后生元的制备方法步骤(2)中所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种组成。
24.进一步地，所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种按质量比10-15：6-8：2-3组成。
25.进一步地，所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种按质量比12：7：3组成。
26.本发明中，银耳多糖的cas号：9075-53-0。
27.所述的高后生元含量的制剂的制备方法，包括以下步骤：
28.取后生元，在300-500r/min的搅拌速度下，加入聚乙烯醇，搅拌25-40min后加入吸收促进剂，继续搅拌30-50min，加入稳定剂，继续搅拌1-2h，即得。
29.本发明的另一目的在于提供上述的高后生元含量的制剂在制备抗免疫衰老的药物中的应用。
30.本发明提供的高后生元含量的制剂通过对后生元、聚乙烯醇、吸收促进剂、稳定剂各组分及其含量的合理设置，可以使各组分之间产生协同作用，有利于所得制剂中后生元有效成分发挥更佳的效果，而且可以使所得制剂具有优异的稳定性，有利于制剂的稳定储存。本发明中由山梨醇和l-岩藻糖按特定比例组成的吸收促进剂不仅可以促进后生元有效成分的吸收，还能够与后生元有效成分产生协同作用，发挥更加优异的抗免疫衰老效果。
31.本发明中的后生元通过先向发酵物料中加水，搅拌，得混合物料，加入发酵菌，进行发酵等步骤制备得到，采用本发明的方法制得的后生元中有效成分含量高，提高了制剂
的使用效果。本发明中加入的由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种按一定质量比组成的发酵菌，各菌共同作用，不仅可以提高发酵速度，缩短发酵时间，而且有利于脂磷壁酸等后生元有效成分的获得。本发明发酵物料中加入的银耳多糖有利于菌体的培养，能够产生更多的脂磷壁酸等后生元有效成分。本发明通过先在一定温度下发酵一定时间，再调节发酵温度再次发酵一定时间，有利于菌种效果的发挥，更有利于后生元的大量获得。本发明中上述操作共同作用，最终达到提高后生元含量的目的。
32.与现有技术相比，本发明具有以下优势：
33.(1)本发明提供的由后生元、聚乙烯醇、吸收促进剂和稳定剂制成的制剂后生元含量高，且具有优异的抗免疫衰老效果。
34.(2)本发明提供的高后生元含量的制剂的制备方法简单，易于产业化实施，有利于其大规模推广应用。
35.(3)本发明提供的高后生元含量的制剂具有优异的稳定性，有利于制剂的稳定储存，保质期更长，易于储存和运输。
具体实施方式
36.以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
37.本发明中所用原料如无特殊说明，均为市售。如干酪乳杆菌可购自广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：gdmcc 1.204，植物乳杆菌菌种保藏编号：gdmcc 1.191，长双歧杆菌婴儿亚种，菌种保藏编号：gdmcc 1.207。
38.实施例1、一种高后生元含量的制剂
39.所述高后生元含量的制剂，包括以下组分及其质量份数：
40.后生元60份，聚乙烯醇0.5份，吸收促进剂2份，稳定剂0.1份；所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比4：1组成；所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比2：13组成。
41.所述后生元的制备方法为：
42.(1)取发酵物料，加水，水的加入量为发酵物料质量的10倍，搅拌，搅拌速度为600r/min，搅拌时间为20min，得混合物料；
43.(2)向步骤(1)所得混合物料中加入发酵菌，所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种按质量比10：8：3组成，发酵菌的加入量为混合物料质量的1％，发酵，发酵温度调节为27℃，发酵时间为4h，发酵结束后调节发酵温度为34℃，进行再次发酵，发酵时间为5h，得发酵物料；
44.(3)将步骤(2)所得发酵物料过滤，将滤液杀菌、离心，离心速度为2000r/min，离心时间为10min，收集上清液，即得。
45.所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
46.葡萄糖20份，蛋白胨6份，银耳多糖0.2份，菊芋粉8份，磷酸氢二钾1份，硫酸镁0.4份。
47.所述的高后生元含量的制剂的制备方法，包括以下步骤：
48.取后生元，在300r/min的搅拌速度下，加入聚乙烯醇，搅拌25min后加入吸收促进剂，继续搅拌30min，加入稳定剂，继续搅拌1h，即得。
49.实施例2、一种高后生元含量的制剂
50.所述高后生元含量的制剂，包括以下组分及其质量份数：
51.后生元70份，聚乙烯醇1份，吸收促进剂5份，稳定剂0.3份；所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比6：1组成；所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比4：10组成。
52.所述后生元的制备方法为：
53.(1)取发酵物料，加水，水的加入量为发酵物料质量20倍，搅拌，搅拌速度为900r/min，搅拌时间为40min，得混合物料；
54.(2)向步骤(1)所得混合物料中加入发酵菌，所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种按质量比15：6：2组成，发酵菌的加入量为混合物料质量的3％，发酵，发酵温度调节为33℃，发酵时间为7h，发酵结束后调节发酵温度为36℃，进行再次发酵，发酵时间为10h，得发酵物料；
55.(3)将步骤(2)所得发酵物料过滤，将滤液杀菌、离心，离心速度为3000r/min，离心时间为20min，收集上清液，即得。
56.所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
57.葡萄糖30份，蛋白胨12份，银耳多糖0.5份，菊芋粉12份，磷酸氢二钾3份，硫酸镁0.8份。
58.所述的高后生元含量的制剂的制备方法，包括以下步骤：
59.取后生元，在500r/min的搅拌速度下，加入聚乙烯醇，搅拌40min后加入吸收促进剂，继续搅拌50min，加入稳定剂，继续搅拌2h，即得。
60.实施例3、一种高后生元含量的制剂
61.所述高后生元含量的制剂，包括以下组分及其质量份数：
62.后生元64份，聚乙烯醇0.7份，吸收促进剂3份，稳定剂0.2份；所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比5：1组成；所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比3：10组成。
63.所述后生元的制备方法为：
64.(1)取发酵物料，加水，水的加入量为发酵物料质量的14倍，搅拌，搅拌速度为800r/min，搅拌时间为25min，得混合物料；
65.(2)向步骤(1)所得混合物料中加入发酵菌，所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种按质量比12：7：3组成，发酵菌的加入量为混合物料质量的1.5％，发酵，发酵温度调节为30℃，发酵时间为5h，发酵结束后调节发酵温度为35℃，进行再次发酵，发酵时间为8h，得发酵物料；
66.(3)将步骤(2)所得发酵物料过滤，将滤液杀菌、离心，离心速度为2800r/min，离心时间为18min，收集上清液，即得。
67.所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
68.葡萄糖26份，蛋白胨9份，银耳多糖0.3份，菊芋粉10份，磷酸氢二钾2份，硫酸镁0.6份。
69.所述的高后生元含量的制剂的制备方法，包括以下步骤：
70.取后生元，在400r/min的搅拌速度下，加入聚乙烯醇，搅拌35min后加入吸收促进剂，继续搅拌40min，加入稳定剂，继续搅拌1.5h，即得。
71.对比例1、一种含后生元的制剂
72.所述含后生元的制剂，包括以下组分及其质量份数：
73.后生元64份，聚乙烯醇0.7份，吸收促进剂3份，稳定剂0.2份；所述吸收促进剂由山梨醇和海藻糖按质量比5：1组成；所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比3：10组成。
74.所述后生元、含后生元的制剂制备方法与实施例3类似。
75.与实施例3的区别在于，将l-岩藻糖替换为海藻糖。
76.对比例2、一种含后生元的制剂
77.所述含后生元的制剂，包括以下组分及其质量份数：
78.后生元64份，聚乙烯醇0.7份，吸收促进剂3份，稳定剂0.2份；所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比5：1组成；所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比3：10组成。
79.所述后生元的制备方法为：
80.(1)取发酵物料，加水，水的加入量为发酵物料质量的14倍，搅拌，搅拌速度为800r/min，搅拌时间为25min，得混合物料；
81.(2)向步骤(1)所得混合物料中加入发酵菌，所述发酵菌由干酪乳杆菌和植物乳杆菌按质量比12：7组成，发酵菌的加入量为混合物料质量的1.5％，发酵，发酵温度调节为30℃，发酵时间为5h，发酵结束后调节发酵温度为35℃，进行再次发酵，发酵时间为8h，得发酵物料；
82.(3)将步骤(2)所得发酵物料过滤，将滤液杀菌、离心，离心速度为2800r/min，离心时间为18min，收集上清液，即得。
83.所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
84.葡萄糖26份，蛋白胨9份，银耳多糖0.3份，菊芋粉10份，磷酸氢二钾2份，硫酸镁0.6份。
85.所述的含后生元的制剂的制备方法与实施例3类似。
86.与实施例3的区别在于，所述后生元的制备方法步骤(2)中所述发酵菌中未加入长双歧杆菌婴儿亚种。
87.对比例3、一种含后生元的制剂
88.所述含后生元的制剂，包括以下组分及其质量份数：
89.后生元64份，聚乙烯醇0.7份，吸收促进剂3份，稳定剂0.2份；所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比5：1组成；所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比3：10组成。
90.所述后生元的制备方法为：
91.(1)取发酵物料，加水，水的加入量为发酵物料质量的14倍，搅拌，搅拌速度为800r/min，搅拌时间为25min，得混合物料；
92.(2)向步骤(1)所得混合物料中加入发酵菌，所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆
菌和长双歧杆菌婴儿亚种按质量比12：7：3组成，发酵菌的加入量为混合物料质量的1.5％，发酵，发酵温度调节为30℃，发酵时间为13h，得发酵物料；
93.(3)将步骤(2)所得发酵物料过滤，将滤液杀菌、离心，离心速度为2800r/min，离心时间为18min，收集上清液，即得。
94.所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
95.葡萄糖26份，蛋白胨9份，银耳多糖0.3份，菊芋粉10份，磷酸氢二钾2份，硫酸镁0.6份。
96.所述的含后生元的制剂的制备方法与实施例3类似。
97.与实施例3的区别在于，所述后生元的制备方法步骤(2)中具体的发酵操作不同。
98.对比例4、一种含后生元的制剂
99.所述含后生元的制剂的制剂，包括以下组分及其质量份数：
100.后生元64份，聚乙烯醇0.7份，吸收促进剂3份，稳定剂0.2份；所述吸收促进剂由山梨醇和l-岩藻糖按质量比5：1组成；所述稳定剂由聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基环糊精按质量比3：10组成。
101.所述后生元的制备方法为：
102.(1)取发酵物料，加水，水的加入量为发酵物料质量的14倍，搅拌，搅拌速度为800r/min，搅拌时间为25min，得混合物料；
103.(2)向步骤(1)所得混合物料中加入发酵菌，所述发酵菌由干酪乳杆菌、植物乳杆菌和长双歧杆菌婴儿亚种按质量比12：7：3组成，发酵菌的加入量为混合物料质量的1.5％，发酵，发酵温度调节为30℃，发酵时间为5h，发酵结束后调节发酵温度为35℃，进行再次发酵，发酵时间为8h，得发酵物料；
104.(3)将步骤(2)所得发酵物料过滤，将滤液杀菌、离心，离心速度为2800r/min，离心时间为18min，收集上清液，即得。
105.所述发酵物料包括以下原料及其质量份数：
106.葡萄糖26份，蛋白胨9份，菊芋粉10份，磷酸氢二钾2份，硫酸镁0.6份。
107.所述的含后生元的制剂的制备方法与实施例3类似。
108.与实施例3的区别在于，所述发酵物料中未加入银耳多糖。
109.试验例一、脂磷壁酸含量的测定
110.1、试验材料：实施例3、对比例2-4所得后生元。
111.2、试验方法：使用上海帛科生物技术有限公司的lta脂磷壁酸elisa试剂盒对实施例3、对比例2-4所得后生元中脂磷壁酸的含量进行测定。
112.3、试验结果：具体测定结果如表1所示。
113.表1：脂磷壁酸含量的测定结果
114.测定项目实施例3对比例2对比例3对比例4脂磷壁酸(pg/ml)352.9263.7305.4291.2
115.由表1可知，采用本发明实施例3的方法所得后生元中脂磷壁酸的含量明显高于对比例2-4所得后生元中脂磷壁酸的含量。由此可见，采用本发明的方法所得后生元中脂磷壁酸的含量更高，为制备高后生元含量的制剂奠定了基础。
116.试验例二、抗免疫衰老效果测试
117.1、试验材料：实施例3、对比例1-4制得的高后生元含量的制剂。
118.2、试验对象：昆明系小鼠，2月龄，体重20g，共42只，雌雄各半，由中科院上海实验动物中心提供，生产许可证号：scxk(沪)2003-0003。
119.3、试验方法：
120.将小鼠随机分为实施例3组、模型组、对照组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组，每组6只，雌雄各半。将d-半乳糖用0.9％的生理盐水稀释，配成5％(50mg/ml)的d-半乳糖生理盐水溶液。模型组每日一次定时项背部皮下注射5％d-半乳糖生理盐水溶液0.25ml/10g体重，同时腹腔注射无菌生理盐水0.3ml/鼠；实施例3组、对比例1-4组分别每日d-半乳糖造模的同时，分别腹腔注射实施例3、对比例1-4制得的高后生元含量的制剂，100μg/鼠，对照组每日一次定时项背部皮下和腹腔同时注射等体积的无菌生理盐水。各组小鼠经连续处理40天后称重，断颈处死，取出胸腺，用滤纸吸干残血后，称重，以相应体重计算出胸腺指数。胸腺指数＝胸腺重(mg)/体重(g)。将小鼠摘除眼球取血，常规分离血清，测定外周血il-2含量。
121.4、试验结果：制剂对胸腺指数、外周血il-2含量的影响如表2所示。
122.表2：制剂对胸腺指数的影响
[0123][0124]
由表2可知，与对照组相比，模型组小鼠的胸腺指数、il-2含量明显降低，说明造模成功。与模型组相比，连续处理40天后实施例3组、对比例1-4组小鼠的胸腺指数、il-2含量均有一定程度的提高，其中本发明实施例3组小鼠的胸腺指数、il-2含量升高更为明显，且与对照组较为接近。由此可见，本发明高后生元含量的制剂具有显著的抗免疫衰老效果。