苄索氯铵在制备抑制结直肠癌转移药物方面的应用

1.本发明属于医药技术领域。更具体地，涉及苄索氯铵在制备抑制结直肠癌转移药物方面的应用。


背景技术：

2.结直肠癌(colorectal cancer，crc)是全球常见的消化系统恶性肿瘤之一，在我国各种恶性肿瘤中居首位，其发病率居全球肿瘤发病率的第三位、死亡率居全球肿瘤死亡率的第二位，临床治疗存在很大的困难。结直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，在我国以41～65岁人群发病率最高，近年来越来越多的报道指出结直肠癌发病呈现年轻化趋势，而且这部分患者的分期更晚，预后更差(徐谊，等.年轻人结直肠癌的诊疗进展[j].中国普通外科杂志,2018，27(4):6.)，结直肠癌近年来在大城市的发病率也明显上升，对于结肠癌的治疗多以手术治疗为主，但超过50％的结直肠癌患者往往容易错过最佳诊治时间，就诊时已到ⅲ～ⅲ期，5年存活率不及40％(张宇涛.结直肠癌的治疗进展[j].山西医药杂志，2020，49(5):2)。手术疗法中存在患者术中出血多、创伤面较大、术后有较多并发症等缺点，并且合并有基础疾病的高龄患者往往难以耐受等原因，抗结肠癌药物治疗也逐渐被列入结肠癌患者的一种重要选择。癌细胞转移是癌症难以根治的重要因素，因此探究新的具有抑制癌细胞转移的抗癌药物，无论是在开拓新的治疗药物还是丰富结直肠癌治疗方式上均具有重要的意义。
[0003]
癌细胞转移可以发生在癌症不同的时期，而转移部位往往具有一定偏好，即不同的癌细胞往往常见的转移部位是不同的，肝脏是结直肠癌转移的最常见部位，有15％-25％的结直肠癌患者在初诊时即发现伴有肝转移，而在疾病进展过程中，近半数结直肠癌患者会最终发生肝转移，且有近1/3的患者是以肝脏为单一转移器官(周嘉敏，等.结直肠癌肝转移的外科治疗[j].肝胆外科杂志，2021，(第1期))。因此控制结直肠癌肝转移对于结直肠癌的防治，特别是抑制结肠癌转移、延长患者生存时间至关重要。
[0004]
苄索氯铵(benzethonium chloride)，化学式为：c
27h42
clno2，又名苄己铵、苄索氯铵、卡索氯铵、氯化苯乙鎓、氯化苯乙铵、氯化苄乙氧胺、海明1622、苄索铵氯化物、氯化苯铵松宁、海胺1622，等。苄索氯铵是一种神经抑制剂，可以抑制人重组α7和α4β2神经元烟碱型乙酰胆碱受体，也是一种新型季铵盐类抗菌剂、表面活性剂，在医药、日化、化妆品等行业有广泛的应用，如消毒剂、酒石酸布托啡诺注射液、湿巾、抗菌洗浴产品、膏霜类、乳液类和水类化妆品中等。目前现有技术对于苄索氯铵的应用主要为将其作为杀菌剂及表面活性剂方面的研究(王丹锋,等.卫生用品中苄索氯铵用量对杀菌效果的影响[j].造纸科学与技术,2018,37(2):5.)，而对于将其作为治疗癌症的药物方面的研究相对较少，中国专利(cn109793726a)公开了苄索氯铵在制备用于防治肺癌的药物中的应用，其机理为苄索氯铵通过抑制肺癌细胞的生长和增值进行肺癌的防治。相关科研人员(george h.yoo,et al.benzethonium chloride activates er stress and reduces proliferation in hnscc[j].oral oncology,2018,76:27-33.)研究了苄索氯铵可以抑制头颈部鳞状癌细胞。
而对于苄索氯铵作为药物在结肠癌方面的抑制，特别是苄索氯铵在制备肠癌转移药物，尤其抑制肠癌晚期转移的药物方面的应用未见报道。因此，寻找和开发防治结肠癌及其肝转移方面的高效药物，将会是一种有价值、有意义的新策略。


技术实现要素：

[0005]
本发明对苄索氯铵进行了研究，提供了苄索氯铵在制备抗结直肠癌转移药物方面的应用；苄索氯铵在制备抑制结直肠癌转移药物方面的应用；苄索氯铵在制备预防结直肠癌转移药物方面的应用；苄索氯铵在制备结直肠癌转移时促使结直肠癌细胞凋亡药物方面的应用，并提供一种含有苄索氯铵的抗结直肠癌转移药物，和抑制、预防结直肠癌转移药物，该药物可抑制结直肠癌细胞和/或促结直肠癌细胞凋亡，提升机体免疫，并能有效防治结直肠癌细胞肝转移。
[0006]
本发明的目的是提供苄索氯铵在制备抑制结直肠癌转移药物方面的应用。
[0007]
本发明的再一目的是提供苄索氯铵在制备预防结直肠癌转移药物方面的应用。
[0008]
本发明的又一目的是提供一种抑制或预防结直肠癌转移药物。
[0009]
本发明为了实现上述目的，采用以下技术方案：
[0010]
本发明通过门静脉注射构建免疫正常小鼠肝转移模型检测苄索氯铵处理后，对小鼠结直肠癌细胞mc38体内肝转移及小鼠体重的影响，通过门静脉注射构建免疫正常小鼠肝转移模型检测苄索氯铵处理后，对小鼠结直肠癌肝转移肝脏微环境中免疫细胞的影响。结果显示，免疫正常小鼠肝转移模型中，苄索氯铵处理可以显著降低结直肠癌体内的肝转移能力并对c57小鼠体重无明显变化。免疫正常小鼠结直肠癌肝转移模型中，苄索氯铵处理可以显著升高结直肠癌肝转移肝脏微环境中ifn+cd8+、ifn+cd4+t细胞数量，促进抗肿瘤免疫，影响结直肠癌转移。
[0011]
因此本发明要求保护：
[0012]
苄索氯铵在制备抑制结直肠癌转移药物方面的应用。
[0013]
苄索氯铵在制备预防结直肠癌转移药物方面的应用。
[0014]
进一步的，上述应用所述的结直肠癌转移为结直肠癌细胞肝转移。
[0015]
进一步的，上述应用所述的的药物可以显著提升机体抗肿瘤免疫。
[0016]
更进一步的，所述的抗肿瘤免疫为提高体内ifn+cd8+、ifn+cd4+t细胞数量。
[0017]
基于此，一种抑制或预防结直肠癌转移药物，也应当在本发明的保护之内。
[0018]
所述药物还可包含药学上可接受的载体或辅料，制备成不同的剂型。
[0019]
可接受的药物载体可以为可以释放药物的有机高分子材料如用琥珀酸酐、枸杞多糖和α-亚麻酸制备的疏水性载体、含有磷酸盐的靶向微生物体、纳米管、纳米球、纳米粒载体、具有双亲性的聚天冬氨酸-酪氨酸接枝物，自组装形成纳米胶束等均可以作为抑制或预防结直肠癌转移药物的载体。
[0020]
可接受的辅料为任何不影响本抑制或预防结直肠癌转移药物疗效、不与本药物发生化学反应而减弱药物活性，及不影响其稳定性的辅料。药用辅料可包括下列之一或其任一组合：生物相容性多聚物，包括生物可降解的或生物不可降解的多聚物及其混合物或共聚物；水溶性低分子化合物等。生物可降解的多聚物如聚酐类、聚羟基酸、聚酯、聚酰胺、聚原酸酯、聚磷腈、对羧苯基丙烷、癸二酸、聚苯丙生等、蛋白质及多糖，包括透明质酸、胶原蛋
白、明胶、白蛋白等。其他可接受的些药用辅料也可以应用于本抑制或预防结直肠癌转移药物的制备，包括充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制孔剂、赋型剂或阻止剂等。
[0021]
本抑制或预防结直肠癌转移药物可以采用常规的药物制剂形式和常规的稀释剂来制备，所述稀释剂有：表面活性剂、润滑剂、添充剂、增稠剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂。根据需要，在药物制剂中可任意地掺入着色剂、防腐剂、香料、调味剂、增甜剂和其它药物，但其最终药物形式的效果不应受到常规制剂或稀释剂的影响。
[0022]
本发明抗癌药物组合物可制成多种剂型，具有代表性的剂型有：片剂、小丸剂、粉剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、注射液(溶液、悬浮液等)等。
[0023]
相对于现有技术，本发明的有益效果体现在：
[0024]
本发明研究得出，苄索氯铵处理可以显著降低结直肠癌体内的肝转移能力并对c57小鼠体重无明显变化。苄索氯铵处理可以显著升高结直肠癌肝转移肝脏微环境中ifn+cd8+、ifn+cd4+t细胞数量，促进抗肿瘤免疫，抑制结直肠癌转移。
[0025]
因此，苄索氯铵在制备抗结直肠癌转移药物/制结直肠癌转移药物/预防结直肠癌转移药物/结直肠癌转移时促使结直肠癌细胞凋亡药物方面具有很好的应用前景和应用价值。本发明也为苄索氯铵的开发和利用提供了理论依据，对防治结直肠癌及防治结直肠癌肝转移具有重要意义。
附图说明
[0026]
图1为苄索氯铵对结直肠癌细胞转移以及小鼠体重的影响。
[0027]
图2为苄索氯铵对结直肠癌肝转移肝脏微环境中免疫细胞的影响。
具体实施方式
[0028]
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0029]
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0030]
实施例1-2为苄索氯铵应用的实施例。
[0031]
实施例1苄索氯铵对结直肠癌细胞转移及小鼠体重的影响
[0032]
1.实验材料
[0033]
药物：苄索氯铵；
[0034]
结直肠癌细胞：小鼠结直肠癌细胞系mc38；
[0035]
市购的体重大小相近，年龄相同的健康c57小鼠。
[0036]
2.实验目的
[0037]
通过门静脉注射构建免疫正常小鼠肝转移模型检测苄索氯铵处理后，对小鼠结直肠癌细胞mc38体内肝转移的影响。
[0038]
3.实验方法
[0039]
将健康c57小鼠随机分成3组，分别为对照组、低剂量苄索氯铵组、高剂量苄索氯铵组，每组5只c57小鼠平行，适应性饲养后按照如下方式进行肝转移模型构建。
[0040]
将对数生长期的mc38细胞用胰酶消化后，取2
×
105细胞用100微升pbs重悬。将2
×
105mc38细胞分别注射到三组c57小鼠门静脉内，构建小鼠肝转移模型。从第2天开始，分组每隔1天注射处理，其中对照组注射等体积的pbs、低剂量苄索氯铵组注射3mg/kg苄索氯铵溶液、高剂量苄索氯铵组注射5mg/kg苄索氯铵至小鼠腹腔。每周对各组小鼠进行称重。5周后，对小鼠实施安乐死，取出小鼠肝脏，多聚甲醛固定，切片后he染色，显微镜下拍照并统计肝转移结节个数。
[0041]
4.实验结果
[0042]
结果如图1所示，免疫正常小鼠肝转移模型中，经过苄索氯铵处理后，与注射pbs组相比，注射相同体积处理的3mg/kg苄索氯铵、5mg/kg苄索氯铵，其肝转移结节个数均明显下降，且注射相同体积处理的5mg/kg苄索氯铵结节数量稍低于3mg/kg的结节数；切片后he染色结果与结节相对应，可以明显看出苄索氯铵处理最优，而同时c57小鼠体重无明显变化，表明苄索氯铵处理可以显著降低结直肠癌体内的肝转移能力并对c57小鼠体重无明显变化。
[0043]
实施例2苄索氯铵对结直肠癌肝转移肝脏微环境中免疫细胞的影响
[0044]
1.实验材料
[0045]
药物：苄索氯铵；
[0046]
结直肠癌细胞：小鼠结直肠癌细胞系mc38；
[0047]
市购的体重大小相近，年龄相同的健康c57小鼠。
[0048]
2.实验目的
[0049]
通过门静脉注射构建免疫正常小鼠肝转移模型检测苄索氯铵处理后，对小鼠结直肠癌肝转移肝脏微环境中免疫细胞的影响。
[0050]
3.实验方法
[0051]
将健康c57小鼠随机分成3组，分别为对照组、低剂量苄索氯铵组、高剂量苄索氯铵组，每组5只c57小鼠平行，适应性饲养后按照如下方式进行肝转移模型构建。
[0052]
将对数生长期的mc38细胞用胰酶消化后，取2
×
105细胞用100微升pbs重悬。将2
×
105mc38细胞分别注射到三组c57小鼠门静脉内，构建小鼠肝转移模型。
[0053]
从第2天开始，每隔1天注射处理，其中对照组注射等体积的pbs、低剂量苄索氯铵组注射3mg/kg苄索氯铵溶液、高剂量苄索氯铵组注射5mg/kg苄索氯铵至小鼠腹腔。4周后，对小鼠实施安乐死，取出新鲜小鼠肝脏，对小鼠肝脏裂解后通过流式检测肝脏微环境中免疫细胞数量。
[0054]
4.实验结果
[0055]
如图2所示，免疫正常小鼠结直肠癌肝转移模型中，经过苄索氯铵处理，肝脏微环境中ifn+cd8+、ifn+cd4+t细胞数量显著升高，表明苄索氯铵处理可以显著升高结直肠癌肝转移肝脏微环境中ifn+cd8+、ifn+cd4+t细胞数量，促进抗肿瘤免疫，影响结直肠癌转移。
[0056]
由实施例1-2对苄索氯铵的应用进行了验证，通过门静脉注射构建免疫正常小鼠肝转移模型检测苄索氯铵处理后，对小鼠结直肠癌细胞mc38体内肝转移及小鼠体重的影响，通过门静脉注射构建免疫正常小鼠肝转移模型检测苄索氯铵处理后，对小鼠结直肠癌肝转移肝脏微环境中免疫细胞的影响。
[0057]
结果显示，免疫正常小鼠肝转移模型中，苄索氯铵处理可以显著降低结直肠癌体内的肝转移能力并对c57小鼠体重无明显变化。免疫正常小鼠结直肠癌肝转移模型中，苄索
氯铵处理可以显著升高结直肠癌肝转移肝脏微环境中ifn+cd8+、ifn+cd4+t细胞数量，促进抗肿瘤免疫，影响结直肠癌转移。
[0058]
综上，本发明通过上述实施例1-2对苄索氯铵进行了研究，通过苄索氯铵在结直肠癌肝转移的抑制作用，及小鼠免疫细胞的显著提升作用，特别是能显著升高结直肠癌肝转移肝脏微环境中的免疫细胞ifn+cd8+、ifn+cd4+t细胞的数量，提供了苄索氯铵在制备抑制结直肠癌细胞转移药物方面的应用，显然具有该成分的药物，也具有该作用效果，也因此提供了一种苄索氯铵的抑制或预防结直肠癌转移药物和一种抗结直肠癌转移药物，该药物可抑制结直肠癌细胞和/或促结直肠癌细胞凋亡，并能有效防治结直肠癌细胞肝转移。
[0059]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都应包含在本发明的保护范围之内。