一种含益生菌发酵液的美白面膜液及其制备方法

1.本发明涉及护肤用品技术领域，具体涉及一种含益生菌发酵液的美白面膜液及其制备方法。


背景技术：

2.现在市面上的面膜种类很多，按照功效划分，主要包括美白面膜、清洁面膜、保湿面膜、紧肤面膜、舒缓面膜和再生面膜这六大类。而面膜作为一种载体主要用于负载面膜液，使的面膜液中的精华成分可以透过皮肤，发挥功效。
3.对于美白面膜液，尤其增白效果明显的面膜液，很可能添加了荧光增白成分，这对我们的皮肤来说，很容易导致脸部的过敏现象，例如出现红疹、红斑等，更严重的会造成皮肤炎症反应，诱发不良副反应发生。因此，人们在追求美白效果的时候，会选择天然的美白成分，用于减少对皮肤的刺激反应。
4.另外，美白面膜液中的美白成分的稳定性较差，在常温或者高温环境下，容易发生氧化而变质，这将会严重限制面膜液的运输和储存，以及储存成本的增加。


技术实现要素：

5.为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种含益生菌发酵液的美白面膜液及其制备方法。
6.为实现上述目的，本发明的技术方案如下。
7.一种含益生菌发酵液的美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
8.益生菌发酵液3～5份、葡萄籽油0.5～1份、紫苏籽油0.5～1份、橄榄油0.1～0.3份、茶叶提取物0.5～2份、edta二钠0.06～0.08份、丙三醇5～8份、丙二醇3～6份、海藻糖1～2份、卡波姆0.5～1.5份、透明质酸钠0.01～0.2份、尿囊素0.5～1.5份、甘草酸二钾0.1～0.5份；
9.所述益生菌发酵液是由以下方法制备得到：
10.s1、将破壁处理的油菜花粉与缓冲溶液混合均匀，然后加入水解酶进行酶解，制得活性肽；
11.s2、将活性肽与牛磺酸于100～110℃下进行缩合反应，制得牛磺酸化活性肽；然后调节ph至7～8，加入水解酶进行酶解，制得抗氧化肽酶解液；
12.s3、将乳杆菌类益生菌接种到发酵培养基中培养12～36h，制得乳杆菌类益生菌活化液；
13.s4、向s2的抗氧化肽酶解液中加入钼酸铵，调节ph至5.5～6.0，然后接种s3的乳杆菌类益生菌活化液，在30～50℃下发酵，制得含有抗氧化肽的益生菌发酵液。
14.进一步，s1制备活性肽的具体操作如下：
15.将经破壁处理的油菜花粉与缓冲溶液按照质量比1：5～10混合，然后加入水解酶，在ph＝7.0～8.5、50～55℃下酶解3～5h；酶解结束后高温灭活2～10min，得到酶解液，再向
酶解液中加入三氯乙酸沉淀大分子蛋白，离心收集上清液，制得活性肽；其中，所述水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶混合制得的复合蛋白酶；
16.更进一步，所述缓冲溶液是硼酸-硼砂缓冲溶液，缓冲溶液的ph为7.4～9.0。
17.进一步，s1和s2中，所述水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶按照质量比1：1～5混合而成的复合蛋白酶。
18.进一步，所述水解酶中，中性蛋白酶的酶活力为800u/g，碱性蛋白酶的酶活力为3000u/g。
19.进一步，s2中，活性肽与牛磺酸的质量比为10：0.5～1。
20.进一步，s3中，所述乳杆菌类益生菌为嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌中的任意一种或者两种的混合。
21.进一步，s3中，所述发酵培养基是由以下组分制成：葡萄糖20～40g/l、胰蛋白胨5～10g/l、酵母蛋白胨5～15g/l、牛肉膏10～20g/l、吐温-801～1.5ml/l、乙酸钠3～8g/l、柠檬酸铵2～3g/l、mgso4·
7h2o 0.2～0.6g/l、mnso4·
4h2o 0.03～0.06g/l、k2hpo4·
7h2o 2～3g/l、天冬氨酸0.1～0.2g/l、丝氨酸0.1～0.2g/l、琼脂粉10～20g/l和水1000ml/l。
22.进一步，s4中，抗氧化肽酶解液与钼酸铵的用量比为1l：0.01～0.1g。
23.本发明还提供一种含益生菌发酵液的美白面膜液的制备方法，包括以下步骤：
24.步骤一、按照所述配比称取原料；
25.步骤二、将丙三醇、卡波姆、透明质酸钠、edta二钠、尿囊素、甘草酸二钾和水在50～70℃下混合制得a液；
26.将益生菌发酵液、丙二醇、海藻糖混合制得b液；
27.将葡萄籽油、紫苏籽油、橄榄油、茶叶提取物混合制得c液；
28.步骤三、将a液与c液在50～70℃下搅拌混合，然后加入b液，在4000～5000rpm下均质10～20min，得到含益生菌发酵液的美白面膜液。
29.本发明的有益效果：
30.1、本发明的美白面膜液中，茶叶提取物具有美白、抗氧化和抗辐射的效果。甘草酸二钾具有营养、滋润效果，改善皮肤的弹性和光泽度，配合茶叶提取物进一步发挥美白抗皱的效果。
31.益生菌发酵液中，抗氧化肽通过与牛磺酸和乳杆菌类益生菌的代谢产物修饰，不仅能够提高抗氧化活性，还能促进机体吸收，促进皮肤的新陈代谢。并与葡萄籽油、紫苏籽油和橄榄油发挥协同抗氧化效果。
32.尿囊素能够促进皮肤角质层吸收水分，软化角质层，促进机体吸收效果。
33.茶叶提取物、丙三醇和丙二醇等多元醇具有很好的保湿效果，并通过卡波姆和透明质酸钠锁紧皮肤水分，提高产品品质。
34.2、本发明的美白面膜液稳定性好，能够发挥很好的皮肤护理功能。
附图说明
35.图1是本发明实施例1与对比例1～4的美白面膜液对于羟基自由基清除率的变化趋势曲线。
36.图2是本发明实施例1与对比例1～4的美白面膜液对于dpph自由基清除率的变化
趋势曲线。
具体实施方式
37.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
38.基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
39.中性蛋白酶(800u/g)，碱性蛋白酶(3000u/g)庞博生物工程有限公司；嗜酸乳杆菌(lactibailus acidophilus,la)，植物乳杆菌(lacibacilus plantarum,lp)济南允诚生物科技有限公司。
40.本发明实施例中所述材料及设备，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。
41.实施例1
42.一种含益生菌发酵液的美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
43.益生菌发酵液4份、葡萄籽油0.7份、紫苏籽油0.7份、橄榄油0.2份、茶叶提取物1份、edta二钠0.06份、丙三醇6份、丙二醇5份、海藻糖1份、卡波姆1份、透明质酸钠0.1份、尿囊素1份、甘草酸二钾0.3份；
44.具体制备方法如下：
45.步骤一、益生菌发酵液的制备
46.s1、将经破壁处理的油菜花粉与硼酸-硼砂缓冲溶液按照质量比1：10混合，然后加入水解酶，在ph＝8.5、50℃下酶解3h；酶解结束后高温灭活5min，得到酶解液，再向酶解液中加入三氯乙酸沉淀大分子蛋白，离心收集上清液，制得活性肽；其中，水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶混合制得的复合蛋白酶；水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶按照质量比1：4混合而成的复合蛋白酶。水解酶中，中性蛋白酶的酶活力为800u/g，碱性蛋白酶的酶活力为3000u/g。
47.s2、将活性肽与牛磺酸于110℃下进行缩合反应，制得牛磺酸化活性肽；然后调节ph至7.6，加入水解酶进行酶解，制得抗氧化肽酶解液；活性肽与牛磺酸的质量比为10：1。
48.s3、将乳杆菌类益生菌接种到发酵培养基中培养24h，制得乳杆菌类益生菌活化液；
49.乳杆菌类益生菌是由嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌两种的混合，其中，嗜酸乳杆菌的接种量为5
×
106cfu/ml；植物乳杆菌的接种量为2
×
106cfu/ml。
50.发酵培养基是由以下组分制成：葡萄糖26g/l、胰蛋白胨8g/l、酵母蛋白胨10g/l、牛肉膏12g/l、吐温-801ml/l、乙酸钠5g/l、柠檬酸铵2g/l、mgso4·
7h2o 0.3g/l、mnso4·
4h2o 0.05g/l、k2hpo4·
7h2o 2g/l、天冬氨酸0.12g/l、丝氨酸0.12g/l、琼脂粉16g/l和水1000ml/l。
51.s4、向s2的抗氧化肽酶解液中加入钼酸铵，调节ph至5.5，然后接种s3的乳杆菌类益生菌活化液，在45℃下发酵，制得含有抗氧化肽的益生菌发酵液。抗氧化肽酶解液与钼酸铵的用量比为1l：0.1g。
52.步骤二、按照上述配比称取各原料，将丙三醇、卡波姆、透明质酸钠、edta二钠、尿
囊素、甘草酸二钾和水在50～70℃下混合制得a液；
53.将益生菌发酵液、丙二醇、海藻糖混合制得b液；
54.将葡萄籽油、紫苏籽油、橄榄油、茶叶提取物混合制得c液；
55.步骤三、将a液与c液在50～70℃下搅拌混合，然后加入b液，在4000～5000rpm下均质10～20min，得到含益生菌发酵液的美白面膜液。
56.实施例2
57.一种含益生菌发酵液的美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
58.益生菌发酵液3份、葡萄籽油0.5份、紫苏籽油0.5份、橄榄油0.1份、茶叶提取物0.5份、edta二钠0.06份、丙三醇5份、丙二醇3份、海藻糖1份、卡波姆0.5份、透明质酸钠0.01份、尿囊素0.5份、甘草酸二钾0.1份；
59.具体制备方法如下：
60.步骤一、益生菌发酵液的制备
61.s1、将经破壁处理的油菜花粉与硼酸-硼砂缓冲溶液按照质量比1：8混合，然后加入水解酶，在ph＝8.0、55℃下酶解4h；酶解结束后高温灭活2min，得到酶解液，再向酶解液中加入三氯乙酸沉淀大分子蛋白，离心收集上清液，制得活性肽；其中，水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶混合制得的复合蛋白酶；水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶按照质量比1：5混合而成的复合蛋白酶。水解酶中，中性蛋白酶的酶活力为800u/g，碱性蛋白酶的酶活力为3000u/g。
62.s2、将活性肽与牛磺酸于100℃下进行缩合反应，制得牛磺酸化活性肽；然后调节ph至7，加入水解酶进行酶解，制得抗氧化肽酶解液；活性肽与牛磺酸的质量比为10：1。
63.s3、将乳杆菌类益生菌接种到发酵培养基中培养36h，制得乳杆菌类益生菌活化液；
64.乳杆菌类益生菌是由嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌两种的混合，其中，嗜酸乳杆菌的接种量为5
×
106cfu/ml；植物乳杆菌的接种量为5
×
106cfu/ml。
65.发酵培养基是由以下组分制成：葡萄糖20g/l、胰蛋白胨10g/l、酵母蛋白胨5g/l、牛肉膏20g/l、吐温-801ml/l、乙酸钠3g/l、柠檬酸铵2g/l、mgso4·
7h2o 0.2g/l、mnso4·
4h2o 0.06g/l、k2hpo4·
7h2o 3g/l、天冬氨酸0.1g/l、丝氨酸0.1g/l、琼脂粉10g/l和水1000ml/l。
66.s4、向s2的抗氧化肽酶解液中加入钼酸铵，调节ph至6.0，然后接种s3的乳杆菌类益生菌活化液，在50℃下发酵，制得含有抗氧化肽的益生菌发酵液。抗氧化肽酶解液与钼酸铵的用量比为1l：0.08g。
67.步骤二、按照上述配比称取各原料，将丙三醇、卡波姆、透明质酸钠、edta二钠、尿囊素、甘草酸二钾和水在50～70℃下混合制得a液；
68.将益生菌发酵液、丙二醇、海藻糖混合制得b液；
69.将葡萄籽油、紫苏籽油、橄榄油、茶叶提取物混合制得c液；
70.步骤三、将a液与c液在50～70℃下搅拌混合，然后加入b液，在4000～5000rpm下均质10～20min，得到含益生菌发酵液的美白面膜液。
71.实施例3
72.一种含益生菌发酵液的美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
73.益生菌发酵液5份、葡萄籽油1份、紫苏籽油1份、橄榄油0.3份、茶叶提取物2份、edta二钠0.08份、丙三醇8份、丙二醇6份、海藻糖2份、卡波姆1.5份、透明质酸钠0.2份、尿囊素1.5份、甘草酸二钾0.5份；
74.具体制备方法如下：
75.步骤一、益生菌发酵液的制备
76.s1、将经破壁处理的油菜花粉与硼酸-硼砂缓冲溶液按照质量比1：5混合，然后加入水解酶，在ph＝7.0、50℃下酶解5h；酶解结束后高温灭活10min，得到酶解液，再向酶解液中加入三氯乙酸沉淀大分子蛋白，离心收集上清液，制得活性肽；其中，水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶混合制得的复合蛋白酶；水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶按照质量比1：1混合而成的复合蛋白酶。水解酶中，中性蛋白酶的酶活力为800u/g，碱性蛋白酶的酶活力为3000u/g。
77.s2、将活性肽与牛磺酸于110℃下进行缩合反应，制得牛磺酸化活性肽；然后调节ph至8，加入水解酶进行酶解，制得抗氧化肽酶解液；活性肽与牛磺酸的质量比为10：0.5。
78.s3、将乳杆菌类益生菌接种到发酵培养基中培养12h，制得乳杆菌类益生菌活化液；
79.乳杆菌类益生菌是嗜酸乳杆菌，其中，嗜酸乳杆菌的接种量为5
×
106cfu/ml。
80.发酵培养基是由以下组分制成：葡萄糖40g/l、胰蛋白胨5g/l、酵母蛋白胨15g/l、牛肉膏10g/l、吐温-801.5ml/l、乙酸钠8g/l、柠檬酸铵3g/l、mgso4·
7h2o 0.6g/l、mnso4·
4h2o 0.03g/l、k2hpo4·
7h2o 2g/l、天冬氨酸0.2g/l、丝氨酸0.2g/l、琼脂粉20g/l和水1000ml/l。
81.s4、向s2的抗氧化肽酶解液中加入钼酸铵，调节ph至6.0，然后接种s3的乳杆菌类益生菌活化液，在30℃下发酵，制得含有抗氧化肽的益生菌发酵液。抗氧化肽酶解液与钼酸铵的用量比为1l：0.01g。
82.步骤二、按照上述配比称取各原料，将丙三醇、卡波姆、透明质酸钠、edta二钠、尿囊素、甘草酸二钾和水在50～70℃下混合制得a液；
83.将益生菌发酵液、丙二醇、海藻糖混合制得b液；
84.将葡萄籽油、紫苏籽油、橄榄油、茶叶提取物混合制得c液；
85.步骤三、将a液与c液在50～70℃下搅拌混合，然后加入b液，在4000～5000rpm下均质10～20min，得到含益生菌发酵液的美白面膜液。
86.对比例1
87.一种美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
88.益生菌发酵液4份、葡萄籽油0.7份、紫苏籽油0.7份、橄榄油0.2份、茶叶提取物1份、edta二钠0.06份、丙三醇6份、丙二醇5份、海藻糖1份、卡波姆1份、透明质酸钠0.1份、尿囊素1份、甘草酸二钾0.3份；
89.具体制备方法，与实施例1相比，益生菌发酵液中未添加牛磺酸，其他条件不变。
90.步骤一、益生菌发酵液的制备
91.s1、将经破壁处理的油菜花粉按照质量比1：10加入硼酸-硼砂缓冲溶液，然后加入水解酶，在ph＝8.5、50℃下酶解3h；酶解结束后高温灭活5min，得到酶解液，再向酶解液中加入三氯乙酸沉淀大分子蛋白，离心收集上清液，制得活性肽；其中，水解酶为中性蛋白酶
与碱性蛋白酶混合制得的复合蛋白酶；水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶按照质量比1：4混合而成的复合蛋白酶。水解酶中，中性蛋白酶的酶活力为800u/g，碱性蛋白酶的酶活力为3000u/g。
92.s2、将活性肽调节ph至7.6，加入水解酶进行酶解，制得抗氧化肽酶解液。
93.s3、将乳杆菌类益生菌接种到发酵培养基中培养24h，制得乳杆菌类益生菌活化液；
94.乳杆菌类益生菌是由嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌两种的混合，其中，嗜酸乳杆菌的接种量为5
×
106cfu/ml；植物乳杆菌的接种量为2
×
106cfu/ml。
95.发酵培养基是由以下组分制成：葡萄糖26g/l、胰蛋白胨8g/l、酵母蛋白胨10g/l、牛肉膏12g/l、吐温-801ml/l、乙酸钠5g/l、柠檬酸铵2g/l、mgso4·
7h2o 0.3g/l、mnso4·
4h2o 0.05g/l、k2hpo4·
7h2o 2g/l、天冬氨酸0.12g/l、丝氨酸0.12g/l、琼脂粉16g/l和水1000ml/l。
96.s4、向s2的抗氧化肽酶解液中加入钼酸铵，调节ph至5.5，然后接种s3的乳杆菌类益生菌活化液，在45℃下发酵，制得含有抗氧化肽的益生菌发酵液。抗氧化肽酶解液与钼酸铵的用量比为1l：0.1g。
97.对比例2
98.一种美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
99.益生菌发酵液4份、葡萄籽油0.7份、紫苏籽油0.7份、橄榄油0.2份、茶叶提取物1份、edta二钠0.06份、丙三醇6份、丙二醇5份、海藻糖1份、卡波姆1份、透明质酸钠0.1份、尿囊素1份、甘草酸二钾0.3份；
100.具体制备方法，与实施例1相比，益生菌发酵液中未添加活性肽和牛磺酸，其他条件不变。
101.步骤一、益生菌发酵液的制备
102.s1、将乳杆菌类益生菌接种到发酵培养基中培养24h，制得乳杆菌类益生菌活化液；
103.乳杆菌类益生菌是由嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌两种的混合，其中，嗜酸乳杆菌的接种量为5
×
106cfu/ml；植物乳杆菌的接种量为2
×
106cfu/ml。
104.发酵培养基是由以下组分制成：葡萄糖26g/l、胰蛋白胨8g/l、酵母蛋白胨10g/l、牛肉膏12g/l、吐温-801ml/l、乙酸钠5g/l、柠檬酸铵2g/l、mgso4·
7h2o 0.3g/l、mnso4·
4h2o 0.05g/l、k2hpo4·
7h2o 2g/l、天冬氨酸0.12g/l、丝氨酸0.12g/l、琼脂粉16g/l和水1000ml/l。
105.s2、将s1的乳杆菌类益生菌活化液，在45℃下发酵，制得益生菌发酵液。
106.对比例3
107.一种美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
108.抗氧化肽4份、葡萄籽油0.7份、紫苏籽油0.7份、橄榄油0.2份、茶叶提取物1份、edta二钠0.06份、丙三醇6份、丙二醇5份、海藻糖1份、卡波姆1份、透明质酸钠0.1份、尿囊素1份、甘草酸二钾0.3份；
109.具体制备方法，与实施例1相比，益生菌发酵液中未添加牛磺酸和乳杆菌类益生菌活化液，直接添加抗氧化肽，其他条件不变。
110.步骤一、抗氧化肽的制备
111.s1、将经破壁处理的油菜花粉按照质量比1：10加入硼酸-硼砂缓冲溶液，然后加入水解酶，在ph＝8.5、50℃下酶解3h；酶解结束后高温灭活5min，得到酶解液，再向酶解液中加入三氯乙酸沉淀大分子蛋白，离心收集上清液，制得活性肽；其中，水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶混合制得的复合蛋白酶；水解酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶按照质量比1：4混合而成的复合蛋白酶。水解酶中，中性蛋白酶的酶活力为800u/g，碱性蛋白酶的酶活力为3000u/g。
112.s2、将活性肽调节ph至7.6，加入水解酶进行酶解，制得抗氧化肽酶解液。
113.s3、向s2的抗氧化肽酶解液中加入钼酸铵，调节ph至5.5，即得。
114.对比例4
115.一种美白面膜液，由以下重量份数的原料制成：
116.葡萄籽油0.7份、紫苏籽油0.7份、橄榄油0.2份、茶叶提取物1份、edta二钠0.06份、丙三醇6份、丙二醇5份、海藻糖1份、卡波姆1份、透明质酸钠0.1份、尿囊素1份、甘草酸二钾0.3份.
117.具体制备方法，与实施例1相比，未添加益生菌发酵液，其他条件不变。
118.本发明实施例1-3制备得到的含益生菌发酵液的美白面膜液，效果基本相同，因此仅采用实施例1的美白面膜液作为试验样品进行性能检测。
119.一、理化性质检测
120.将实施例1制备的含益生菌发酵液的美白面膜液作为试验样本，取12份试验样品，平均分为四组：高温组、低温组、光照组和对照组，每组三份，进行稳定性测试。
121.高温组：将试验样品放置在45
±
0.5℃的恒温箱中静置30天，每隔两天取出约3g样品，观察试验样品的理化性质，如分层现象、析出颗粒物、变色、变味或者其他异常现象。
122.低温组：将试验样品放置在-5
±
0.5℃的恒温箱中静置30天，每隔两天取出约3g样品，观察试验样品的理化性质，如分层现象、析出颗粒物、变色、变味或者其他异常现象。
123.光照组：将试验样品放置紫外光照条件下静置30天，观察试验样品的理化性质，如分层现象、析出颗粒物、变色、变味或者其他异常现象。
124.对照组：将试验样品放置在25
±
0.5℃(常温)的恒温箱中静置30天，每隔两天取出约3g样品，观察试验样品的理化性质，如分层现象、析出颗粒物、变色、变味或者其他异常现象。
125.通过上述试验可以看出，本发明实施例1的美白面膜液在-5～45℃环境下并未出现分层以及析出颗粒物的现象，且并未出现变色和变味等异常现象，而且在长期光照条件下也能达到很好的稳定性。由此说明，本发明实施例1制备的美白面膜液具有很好的稳定性。
126.二、皮肤刺激性试验
127.对大鼠背部脊柱一侧的去毛部位均匀涂敷实施例1的美白面膜液；对大鼠背部脊柱另一侧的去毛部位均匀涂敷蒸馏水作为空白对照；每天同一时间涂敷一次，连续涂敷七天，观察涂敷部位皮肤的状态，如红斑、水肿等异常现象。
128.通过上述试验可以看出，大鼠去毛部位皮肤并未出现红斑、水肿等异常现象，说明本发明实施例1的美白面膜液对大鼠皮肤并不具有刺激性反应。
129.三、抗氧化试验
130.以实施例1以及对比例1-4的美白面膜液作为试验样本，根据沈密
1.的方法进行dpph自由基消除作用试验和羟基自由基消除作用试验。
131.[1]沈密,陈伟伟,梁少华.槐米提取物的抗氧化性能研究[j].河南工业大学学报,2012,33(6):72-75.
[0132]
3.1、对羟基自由基消除作用的试验
[0133]
试验样本的配置：取试验样本0.2g、0.4g、0.6g、0.8g、1.0g分别加入5个10ml容量瓶中，加入50％乙醇至刻度，摇匀，得到浓度为20～100mg/ml的试验溶液。
[0134]
在25ml比色管中依次加入1.8mmol/l feso4溶液3ml、1.8mmol/l水杨酸-乙醇溶液3ml，摇匀，然后分别加入浓度为20～100mg/ml的试验溶液1ml，最后加入3ml 0.3％h2o2溶液，37℃水浴加热15min；混匀后，测定吸光度a
x
。
[0135]
在25ml比色管中依次加入1.8mmol/l feso4溶液3ml、1.8mmol/l水杨酸溶液3ml，摇匀，然后分别加入浓度为20～100mg/ml的试验溶液1ml，最后加入蒸馏水3ml，37℃水浴加热15min；混匀后，测定吸光度ac。
[0136]
在25ml比色管中依次加入1.8mmol/l feso4溶液3ml、1.8mmol/l水杨酸溶液3ml，摇匀，然后加入蒸馏水1ml，最后加入3ml 0.3％h2o2溶液，37℃水浴加热15min；混匀后，测定吸光度a0。
[0137]
按下式计算试验样本对羟基自由基(
·
oh)的清除率。
[0138]
羟基自由基(
·
oh)的清除率
[0139]
实施例1与对比例1～4中所添加材料的区别之处见表1，实施例1与对比例1～4制备的美白面膜液中的羟基自由基清除率趋势曲线如图1。
[0140]
表1实施例1与对比例1～4中所添加材料的对比结果
[0141] 抗氧化肽牛磺酸乳杆菌类益生菌实施例1+++对比例1+-+对比例2
‑‑
+对比例3+
‑‑
对比例4
‑‑‑
[0142]
注：+表示添加；-表示未添加。
[0143]
由表1结合图1结果表明，与对比例1～4相比，本发明实施例1制备的美白面膜液对羟基自由基的清除效果最佳。究其原因主要是，本发明实施例1通过抗氧化肽与牛磺酸修饰后，再添加乳杆菌类益生菌活化液，此时在促进乳杆菌类益生菌发酵的同时，还能促进牛磺酸修饰后的抗氧化肽与乳杆菌类益生菌的代谢产物发生进一步的修饰作用，能够提高修饰后的抗氧化肽的抗氧化活性，并且还能增强其生物活性功能，在清除羟基自由基的同时，有利于机体的吸收，且还能发挥益生菌的益生功能。另外，修饰后的抗氧化肽还能与葡萄籽油、紫苏籽油和橄榄油发挥协同抗氧化效果。
[0144]
而对比例1中虽然添加了抗氧化肽和乳杆菌类益生菌，但是由于抗氧化肽未被牛磺酸修饰，无法与乳杆菌类益生菌的代谢产物发生修饰作用，因此，对比例1的抗氧化效果
低于实施例1的抗氧化效果，且比实施例1对于羟基自由基的清除率相比于实施例1低了36％。对比例2中仅添加了乳杆菌类益生菌，并未添加抗氧化肽与牛磺酸，因此对比例2对于羟基自由基的清除率相比于实施例1低了69％。对比例3仅添加了抗氧化肽，并未添加牛磺酸和乳杆菌类益生菌，因此，对比例3对于羟基自由基的清除率相比于实施例1低了41％。对比例4并未添加抗氧化肽、牛磺酸和乳杆菌类益生菌，因此，对比例4对于羟基自由基的清除率相比于实施例1低了75％。
[0145]
由此说明，乳杆菌类益生菌和抗氧化肽均具有一定的抗氧化性能，且抗氧化肽的抗氧化性能相对较高，但是，抗氧化肽经过牛磺酸和乳杆菌类益生菌的代谢物的修饰作用后，能够提高抗氧化活性和生物活性，且抗氧化肽在经过牛磺酸修饰之后才能与乳杆菌类益生菌的代谢物发生进一步的修饰作用，提高抗氧化活性和生物活性。
[0146]
3.2、对dpph自由基消除作用的试验
[0147]
试验样本的配置：取试验样本0.2g、0.4g、0.6g、0.8g、1.0g分别加入5个10ml容量瓶中，加入50％乙醇至刻度，摇匀，得到浓度为20～100mg/ml的试验溶液。
[0148]
取1.5mg dpph溶于20ml无水乙醇中，得到dpph自由基溶液。
[0149]
分别取浓度为20～100mg/ml的试验溶液1ml，加入5mldpph自由基溶液，摇匀，以无水乙醇作参比，在517nm处测定吸光度ai。
[0150]
分别取浓度为20～100mg/ml的试验溶液1ml，加入5ml无水乙醇，摇匀，以无水乙醇作参比，在517nm处测定吸光度aj。
[0151]
取蒸馏水1ml，加入5mldpph自由基溶液，摇匀，以无水乙醇作参比，在517nm处测定吸光度ae。
[0152]
按下式计算试验样本对dpph自由基的清除率。
[0153]
dpph自由基的清除率
[0154]
实施例1与对比例1～4制备的美白面膜液中的dpph自由基清除率的趋势曲线如图2。
[0155]
由图2可知，本发明实施例制备的美白面膜液对消除dpph自由基的能力很强，在20～100mg/ml的范围内，消除率随质量浓度的增加而明显增大。
[0156]
综上可知，本发明实施例1的美白面膜液首先利用牛磺酸对抗氧化肽进行修饰，然后再与乳杆菌类益生菌的代谢产物发生修饰作用，所获得的益生菌发酵液不仅能够提高抗氧化活性，还能促进机体吸收，促进皮肤的新陈代谢。并与葡萄籽油、紫苏籽油和橄榄油发挥协同抗氧化效果，且对dpph.和.oh两种自由基的最大消除率分别达到92.5％和99.1％。
[0157]
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。