一种植物型消毒凝胶剂及其制备方法

1.本发明涉及致病菌防治技术领域，具体涉及一种植物型消毒凝胶剂及其制备方法。


背景技术：

2.目前，日益突出的医院感染问题，已成为医院急需解决的公共卫生问题。美国cdc(疾控中心)研究表明：80％的院内感染是因为手在患者之间传播的。通过加强手卫生可降低1/3的医院感染，并且洗手是降低医院感染最经济、最有效的方法，洗手也是医护人员自身防护最有效的方法。自1889年德国医生furbringer倡导手术者术刷洗手臂进行消毒以来，经历了漫长的历史变革和进步，经典的肥皂水洗手法在临床沿用至今，现逐渐被淘汰。由于近年来新的消毒剂的研发与应用，使得术前手臂消毒的方法呈现出多样性和简单化。消毒剂剂型分为液态(液体)和凝胶两种。液态剂型使用时挤压或涂抹过程容易滴漏，用量不易准确掌握。相对于液体剂型，凝胶剂型易涂抹均匀，不易滴落，可节省用量；不易滴漏，以免造成皮肤消毒的空白区；皮肤感觉舒适。
3.目前市场上的消毒凝胶主要有两类,一类是以三氯生等阴离子的杀菌剂，以卡波为增稠剂的产品，但这种产品对使用者存在潜在的健康风险。另一类是以葡萄糖酸氯己定等阳离子为杀菌剂，以羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素为增稠剂的凝胶产品，这类产品因增稠剂的原因存在手感粘腻等问题。另外，这种产品常用的有效浓度为0.5％-4％，用量大，产品成本高。
4.随着现代中药提取、分离技术的不断发展，且中药来源广泛、对皮肤的刺激性小，不易使致病菌产生耐药性，中药抗菌成分受到国内外专家学者的重视。苦豆子( sophora alopecuroidesl.) 是豆科槐属多年生半灌木植物，其别名苦豆根、苦豆草、苦甘草，主要分布于中国北方的荒漠、半荒漠地区，甘肃、宁夏、青海、新疆等地区资源分布面积广，蕴藏量丰富。苦豆子的干燥全草、根及种子均可药用。由于极高的生态价值和药用价值，其资源的合理保护与开发越来越引起人们的重视。苦豆子主要成分为生物碱和黄酮，此外还有挥发油、有机酸、多糖氨基酸等。基础研究表明：苦豆子具有清热解毒、抗炎、抗菌、抗病毒、提高免疫功能的作用，其中所含生物碱对白色念珠菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、表皮葡萄球菌均有一定的抑制作用，且具有一定的抗炎效果。另外，槐定碱还具有增强机体免疫的功能，增加机体对病原微生物的抵抗力，减少感染。苦豆子提取物同时具备了抑菌抗炎、提高免疫力的作用，能充分发挥中药的优点。苦豆子的此种特性，将可能在消毒抑菌的领域中取得一定成果。
5.金盏草（tagetes erecta l.）为菊科万寿属的植物，又称臭芙蓉、万寿灯等。其中含有类胡萝卜素、黄酮、挥发油、多糖、蒽醌、氨基酸、生物碱等多种化学成分，具有抑菌杀虫、抗氧化、抗炎和增强免疫力等生物活性。
6.积雪草（centella asiatica l. urban）为伞形科积雪草属植物积雪草的干燥全草，又名为落得打、马蹄草等，为多年生匍匐草本。积雪草苷是积雪草提取物三萜皂苷的主
要活性成分之一，现代药理学研究证实其具有抗炎、抗病毒等方面的药理作用。
7.马桑（coriariasinica maxim）为双子叶植物纲木兰亚纲马桑科（coriariaceae）马桑属（coriaria linn）植物，前期研究发现，马桑提取物具有一定的抑菌作用（《马桑提取物的抑菌作用和抑菌机理的初步研究》，《四川大学学报：自然科学版》，作者： 周莉君等）。
8.土木香提取物以菊科植物土木香（inula helenium l.）的根为原料提取，主要含有萜类、黄酮、挥发油、氨基酸和多糖等成分；具有抗菌、细胞毒、保肝、抗肿瘤、驱虫以及降糖等作用，对黄瓜白粉菌、黄瓜霜毒菌、黄瓜炭疽菌、番茄灰霉菌、番茄叶霉菌等都有较强的抗菌活性。
9.白及，为兰科植物白及bletilla striata（thunb.）reichb.f.的干燥块茎，白及提取物中的白芨多糖对大肠杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的生长具有一定抑制作用。


技术实现要素：

10.本发明的目的是提供了一种植物型消毒凝胶剂及其制备方法。
11.本发明的上述目的可采用下列技术方案来实现：一种植物型消毒凝胶剂，由中药活性成分和凝胶基质组成，所述中药活性成分是由按照重量份计的以下原料制备得到的：苦豆子提取物8-12份、金盏草提取物0-5份、积雪草提取物0-6份、马桑提取物0-5份、土木香提取物0-5份、白及提取物0-5份；所述苦豆子提取物中，包含有苦豆碱和/或槐定碱。
12.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂，是由按照重量份计的以下原料制备得到的：苦豆子提取物10份、金盏草提取物3份、积雪草提取物4份、马桑提取物3份、土木香提取物3份、白及提取物3份。
13.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂，所述苦豆子提取物中，包含有按照质量比计为1：（2-4）的苦豆碱和槐定碱。
14.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂，所述苦豆子提取物的制备方法为：取苦豆子粉碎成细粉，加入浓度为60-70%的乙醇，浸泡0.5-1.5h后，进行回流提取5-7h，过滤，定容，所得滤液减压浓缩至相对密度为1.0-1.1，加水搅匀，静置3-6h，沉淀后离心分离，所得上清液减压浓缩至相对密度为1.0-1.1的清膏，将清膏在ph8-9下静置、离心分离，所得的上清液减压浓缩至相对密度为1.05-1.15，得到苦豆子提取物。
15.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂，所述金盏草提取物和积雪草提取物的制备方法为：分别取金盏草或积雪草以3-8倍重量70-95％乙醇渗漉，渗漉液回收乙醇至无醇味，将渗漉后的金盏草/积雪草药渣加水煎煮1-3次，收集煎煮液，然后与金盏草/积雪草渗漉液合并，浓缩至相对密度为1.1-1.3的清膏，将清膏上da201中等极性苯乙烯型大孔树脂柱，先用水洗脱，再用50-70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得到金盏草提取物/积雪草提取物。
16.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂，所述马桑提取物的制备方法为：取马桑叶粉碎成粗粉，加100000 u/g的纤维素酶，以酶用量为2-7mg/g，在ph6.0-7.5溶液中保温3-5h，再加入无水乙醇至乙醇终浓度为50-60%，料液比（6-12）：1，加热回流提取2次，每次1.5-2.5h，过滤，减压浓缩至相对密度为1.0-1.1，加水搅匀，静置过夜，沉淀后离心分离，所得上
清液减压浓缩至稠膏状，得到马桑提取物。
17.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂，所述土木香提取物的制备方法为：取土木香根粉碎过70-90目筛得细粉，加入60%-70 %乙醇，浸泡过夜，35-45℃搅拌浸提2.5-3.5 h，减压抽滤，滤渣再次加入180-220ml 95%乙醇，30-40℃，130-150r/min振荡浸提2.5-3.5 h，减压抽滤，合并上述2次滤液，减压浓缩至稠膏状，得到土木香提取物。
18.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂，所述白及提取物的制备方法为：取白及干燥块茎粉碎成70-90目细粉，加水使料液比达（8-15）：1，加热至70-80℃提取1.5-2.5h，提取2次，过滤定容，所得滤液浓缩之相对密度为1.0-1.2，加无水乙醇使乙醇浓度为75%，静置5-7h，沉淀后离心分离，所得上清液减压浓缩至稠膏状，得到土木香提取物。
19.本发明的第二个目的是提供了一种植物型消毒凝胶剂的制备方法，所述植物型消毒凝胶剂的中药活性成分为上述的中药活性成分，所述植物型消毒凝胶剂的制备方法是将各成分按照以下重量份配比混合后制得：中药活性成分6-8份，卡波姆1-3份，丙三醇6-12份，薄荷脑2-6份，水20-25份。
20.进一步的，上述的一种植物型消毒凝胶剂的制备方法，是将各成分按照以下重量份配比混合后制得：所述中药活性成分7份，卡波姆1份，丙三醇9份，薄荷脑4份，水25份。
21.本发明的特点及优点是：本发明植物型消毒凝胶剂，采用了纯中药提取物，苦豆子、金盏草、积雪草、马桑、木土香和白及，分别采用不同的提取方法进行提取，再复配得到的植物型消毒凝胶剂，其原料来源广泛，经前期试验，能够较好的抑制多种病菌，也具有良好的持续抑菌效果。
附图说明
22.图1显示为本发明所提供的植物型消毒凝胶剂，送检至西安国联质量检测技术股份有限公司，得到检测报告中的抑菌性能测试结果截图。
具体实施方式
23.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
24.实施例1：苦豆子提取物，取苦豆子粉碎成细粉，加入浓度为65%的乙醇，浸泡1h后，进行回流提取6h，过滤，定容，所得滤液减压浓缩至相对密度为1.05，加水搅匀，静置4.5h，沉淀后离心分离，所得上清液减压浓缩至相对密度为1.05的清膏，将清膏在ph8.5下静置、离心分离，所得的上清液减压浓缩至相对密度为1.1，得到苦豆子提取物。
25.苦豆子提取物也可以直接从企业购买。
26.苦豆碱，分子式：c
15h24
n2，分子量：232.365，分子结构如式ⅰ所示：
式ⅰ；槐定碱，分子式：c
15h24
n2o分子量：248.37，分子结构如式ⅱ所示：式ⅱ；槐果碱，分子式：c
15h22
n2o 分子量：246.35，分子结构如式iii所示：式iii。
27.以上3种单体成分都可在市场上直接购买得到，可通过高效液相色谱法对其进行含量分析。
28.本发明用于消毒抑菌的植物型消毒凝胶剂，由中药活性成分和凝胶基质组成，所述中药活性成分是由按照重量份计的以下原料制备得到的：苦豆子提取物8-12份、金盏草提取物0-5份、积雪草提取物0-6份、马桑提取物0-5份、土木香提取物0-5份、白及提取物0-5份；所述苦豆子提取物中，包含有苦豆碱和/或槐定碱。
29.实施例2：1. 试验药物：苦豆子采自宁夏盐池县，由宁夏大学李小伟教授鉴定为豆科槐属植物苦豆子（sophora alopecuroidesl.）的地上部分，自然晾干，备用。马桑、土木香和白及为安徽亳州药材市场购买。槐定碱（批号：190726-3）、苦豆碱（批号：190917-2）、槐果碱（批号：190922-3）购自宁夏都顺生物科技有限公司。
30.2. 菌株：大肠杆菌（8099）、白色念珠菌（atcc10231）、金黄色葡萄球菌（atcc6538），以上标准菌株均由宁夏医科大学临床医学院检验中心杨秀琴老师馈赠，并保存于宁夏中药材开发与利用工程技术研究中心微生物研究室-70℃冰箱中。
31.3. 培养基配制：细菌固培养基：牛肉膏粉3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，琼脂20g，定容至1000ml，ph7.0-7.2。液体培养基不加琼脂，其余成分相同。
32.真菌固体培养基：葡萄糖40g，蛋白胨10g，琼脂20g，定容至1000ml，ph5.5-5.8。液
体培养基不加琼脂，其余成分相同。
33.4. 试剂：蛋白胨、牛肉膏粉、琼脂均购于青岛海博生物技术有限公司，葡萄糖、氯化钠、无水乙醇等分析纯试剂购自上海国药试剂集团公司。
34.5. 仪器与设备el204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；re-52a真空旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂)；shb-iii循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；dhp-9162智能型电热恒温培养箱（上海琅轩实验设备有限公司）；yj-875型超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）；yxq-ls-50s立式压力蒸汽灭菌器（上海博讯实业有限公司）。
35.6. 试验过程（1）原料提取物的制备：苦豆子提取物的制备方法为：取苦豆子粉碎成细粉，加入浓度为60-70%的乙醇，浸泡0.5-1.5h后，进行回流提取5-7h，过滤，定容，所得滤液减压浓缩至相对密度为1.0-1.1，加水搅匀，静置3-6h，沉淀后离心分离，所得上清液减压浓缩至相对密度为1.0-1.1的清膏，将清膏在ph8-9下静置、离心分离，所得的上清液减压浓缩至相对密度为1.05-1.15，得到苦豆子提取物。
36.金盏草提取物和积雪草提取物的制备方法为：分别取金盏草或积雪草以3-8倍重量70-95％乙醇渗漉，渗漉液回收乙醇至无醇味，将渗漉后的金盏草/积雪草药渣加水煎煮1-3次，收集煎煮液，然后与金盏草/积雪草渗漉液合并，浓缩至相对密度为1.1-1.3的清膏，将清膏上da201中等极性苯乙烯型大孔树脂柱，先用水洗脱，再用50-70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得到金盏草提取物/积雪草提取物。
37.马桑提取物的制备方法为：取马桑叶粉碎成粗粉，加100000 u/g的纤维素酶，以酶用量为2-7mg/g，在ph6.0-7.5溶液中保温3-5h，再加入无水乙醇至乙醇终浓度为50-60%，料液比（6-12）：1，加热回流提取2次，每次1.5-2.5h，过滤，减压浓缩至相对密度为1.0-1.1，加水搅匀，静置过夜，沉淀后离心分离，所得上清液减压浓缩至稠膏状，得到马桑提取物。
38.土木香提取物的制备方法为：取土木香根粉碎过70-90目筛得细粉，加入60%-70 %乙醇，浸泡过夜， 35-45℃搅拌浸提2.5-3.5 h，减压抽滤，滤渣再次加入180-220ml 95%乙醇，30-40℃，130-150r/min振荡浸提2.5-3.5 h，减压抽滤，合并上述2次滤液，减压浓缩至稠膏状，得到土木香提取物。
39.白及提取物的制备方法为：取白及干燥块茎粉碎成70-90目细粉，加水使料液比达（8-15）：1，加热至70-80℃提取1.5-2.5h，提取2次，过滤定容，所得滤液浓缩之相对密度为1.0-1.2，加无水乙醇使乙醇浓度为75%，静置5-7h，沉淀后离心分离，所得上清液减压浓缩至稠膏状，得到土木香提取物。
40.苦豆子提取物、金盏草提取物、积雪草提取物、马桑提取物、土木香提取物和白及提取物的中药活性成分组方如下：组一：苦豆子提取物10份、金盏草提取物3份、积雪草提取物4份、马桑提取物3份、土木香提取物3份、白及提取物3份。
41.组二：苦豆子提取物10份、积雪草提取物4份、马桑提取物3份、土木香提取物3份、白及提取物3份。
42.组三：苦豆子提取物10份、金盏草提取物3份、马桑提取物3份、土木香提取物3份、
白及提取物3份。
43.组四：苦豆子提取物10份、马桑提取物3份、土木香提取物3份、白及提取物3份。
44.（2）菌株的活化和菌悬液的制备：将低温保藏的受试菌株在固体培养基上连续传代培养2次，第2次培养后在30℃传代培养2d，取菌落用1ml无菌生理盐水制成菌悬液，移液枪吹打均匀，用麦氏比浊管调整为0.5个麦氏单位，然后用液体培养基将菌悬液浓度稀释为（1～5）
×
10
6 cfu/l(cfu，colony-forming units)，备用。
45.（3）不同试药的抑菌活性测定：采用牛津杯法进行体外抗菌活性试验。于固体培养基平板表面接种100 μl稀释好的菌悬液并用涂布器涂布均匀。并用镊子将无菌的牛津杯轻轻放入培养皿中，在水平放置的平皿中均匀地放置3只牛津杯。吸取一定浓度的上述药物溶液0.2ml至牛津杯中，注意不要溢出牛津杯外。30℃培养48～72 h。观察结果，并用游标卡尺测量抑菌圈直径（mm）。平行进行3次试验，以3次结果相同为准，抑菌圈直径结果以3次的平均值进行计算。根据抑菌圈的大小，初步判断细菌对药物的敏感性。抑菌效果判定：抑菌圈直径＞20mm为极敏感，15～20mm为高度敏感，10～15mm为中度敏感，抑菌圈＜10mm为低度敏感，
“‑”
为无抑菌活性。抗菌药的抑菌圈以临床和实验室标准研究所（clinical and laboratory standards institute）制定的标准判定。
46.（4）最小抑菌浓度测定：根据美国临床和实验室标准化研究所针对酵母菌制定的ｍ27－a3方案中微量液体培养基倍比稀释法，测定不同复合物组别抗菌的mic值。取无菌96孔培养板，于每孔中加入培养液100 μ l，然后在第2列每孔加入受试药物100 μ l，混匀后取出100 μ l移至第2排中，以此类推进行倍比稀释直至第9列混匀后弃掉 100 μ l，使稀释后各孔中的受试药物浓度倍比减少，第1-10列每孔加入菌的菌悬液100 μl，其中第10列作阳性对照，第11列孔中加药物作阴性对照，第12列孔中加入100 μl纯化水作为空白对照。将培养板置于30或 35℃ 恒温箱中，培养 48～72 h观察结果，及时观察生长情况，以阳性对照孔生长良好为准，取无肉眼可见菌生长的最低药物浓度孔位作为该活性成分的mic。
47.以上最小抑菌实验，分别针对大肠杆菌（8099）、白色念珠菌（atcc10231）、金黄色葡萄球菌（atcc6538）各做三次，取平均值。
48.(5) 抑菌性能测试参照gb 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录c c4方法完成抑菌试验。
49.7. 试验结果（1）四组中药活性成分分别对3种菌的抑菌活性：从表1得知，组一至组四对3种常见致病菌，均有不同程度的抑制作用。组一对大肠杆菌、白色念珠菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用最为明显，其抑菌圈直径达到约26.4mm、20.3mm和22.7mm，为极敏感。组二和组三的抑菌作用也较强，其中对大肠杆菌均为极敏感，其抑菌圈直径达到约25.9mm和22.6mm。
50.表1显示为四种中药活性成分组方对不同菌种的抑菌圈大小（mm，x + s，n=3）。
51.表1
（2）四组中药活性成分分别对3种菌的最小抑菌浓度测定：由表2可以看出：组一对大肠杆菌、白色念珠菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好，其mic分别为0.39mg/ml、1.56 mg/ml和0.78 mg/ml，对大肠杆菌的mic为0.39mg/ml，其值最低，抑菌效果最明显。
52.试验过程中，菌株在此培养基上生长良好，无菌污染，测定结果可靠。
53.表2显示为四种中药活性成分组方对不同菌种的最小抑菌浓度（mg/ml）。
54.表2（3）抑菌性能测试：该样品作用浓度为原样品，作用2min，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的抑菌率＞50%，根据gb 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录c c4判定，该产品具有抑菌作用。
55.检测结果如图1所示。图1为西安国联质量检测技术股份有限公司针对本技术凝胶剂所进行检测后得到的“抑菌性能测试结果”表。
56.最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进
行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。