一种治疗凹陷性疤痕毛囊干细胞组织泥的制备方法与流程

1.本发明涉及皮肤病中疤痕的治疗技术领域，具体涉及毛囊干细胞及周围活性组织治疗疤痕过程中毛囊干细胞组织泥的制备方法。


背景技术：

2.凹陷性疤痕，是皮肤真皮层及皮下组织缺损而造成的伤疤。痤疮、手术、外伤、感染、水痘及天花等是常见的引起凹陷性疤痕原因，这些病因导致皮肤真皮层及皮下组织缺损，而在随后的愈合过程中胶原蛋白、弹力蛋白缺失则会留下永久凹陷性疤痕。
3.凹陷型疤痕的危害性：疤痕是人体创伤修复过程中的必然产物，从广义上来讲，没有疤痕就没有创伤的愈合。疤痕组织的主要成分是纤维蛋白。疤痕组织胶原的产生和沉积增加了伤口的强度，从一般意义上来说是有益的。如果疤痕组织形成不充分，受损组织得不到正常的张力，由此可以引发许多并发症，如腹壁切口愈合的疤痕薄弱，在腹内压的作用下可使疤痕处重新裂开或腹内容物逐渐向外膨出而形成腹壁疝。相反，如果疤痕过度形成，就可造成严重的外形或功能上的重要问题。疤痕的危害取决于它的本质和特性，以及对深部组织的继发的固定作用。因而疤痕相对于损伤前组织来说，总是一个不完善的替换。从机械角度来看，其对抗性减弱；从营养角度来看，造成了氧和营养物质交流的障碍；从功能角度看，引起受损组织的畸形和功能障碍；从美观角度看，造成了外形的破坏。
4.美丽的脸是平滑而细腻的，充满弹性和活力。没有人喜欢一张凹凸不平的脸，即使是掩盖在衣服中的身体部位也难以让人接受。特别是女性，即使是腋窝皮肤的一个瑕疵都影响其整体的美丽程度，更何况凹陷疤痕是一个个皮肤上的坑呢？因此，凹陷疤痕不仅影响一个人的美观，也影响观众的视觉感受。从个人心理来看，疤痕直接影响人的心情、思绪以及生活。
5.凹陷性疤痕的治疗现状：目前凹陷性疤痕的治疗主要包括：手术与非手术2类治疗方法。
6.一、非手术疗法主要包括以下6种方法：
7.1、微晶祛疤是将真空中的天然晶粒高速喷向凹凸不平的皮肤疤痕表面，从而刺激皮肤生长，促进胶原蛋白、弹性纤维的生成。优点是治疗面受力均匀、柔和；而缺点是针对性差，治疗次数多。适用于表浅而形态单一的疤痕。
8.2、磨削是用电转磨头来磨削疤痕。优点是针对性强，速度快，治疗次数少；缺点是出血多，微创，需包扎。适用于大面积疤痕及色素沉着。
9.3、机械刺激是用专用器械刺激皮肤后促进皮肤生长。优点是皮肤损伤小；缺点是操作难度大，恢复慢。适用于单个浅表凹疤。
10.4、激光磨削这种方法治疗后不出血，恢复也相对要快一些。目前激光磨削常用的有高能脉冲co2激光和脉冲铒激光，但是需要多次治疗才能够取得理想效果，适用于较小的皮肤凹陷。
11.5、超高频是通过超高热将病损组织气化。优点:术野清晰，治疗分层效果好；缺点
是治疗后有创面结痂脱痂期，在此期间要注意创面的保护。适用于各种疤痕，主要是增生性疤痕，对于凹陷性疤痕疗效不显著。
12.6、药物主要是采用某些腐蚀性"药物"以破坏疤痕局部，再辅以抗炎生肌类药物以促进愈合。该方法操作要求高，修复慢；如操作不慎易产生新的疤痕。
13.上述治疗方法的基本原理都是通过对凹疤的局部微创，以刺激皮肤的再生；但是，其效果的好坏取决于患者皮肤自身的再生修复能力。
14.二、凹陷性疤痕的手术治疗
15.目前有很多治疗方法主要包括以下6种：
16.1、擦皮法:将清凉剂涂于患处，使皮肤麻木，并使其表面固定，然后用一个可旋转的镶有细小的工业用钻石的不锈钢轮进行打磨。疤痕突出的边缘可被磨光，底部同样也可受到打磨，这样中央部位增多，整修皮肤表面变平。擦皮法可以交一个很深的盒状变为一块平坦的谷地。
17.2、脂肪注射法:由脂肪损失而造成的很深的疤痕可以通过脂肪注射法进行治愈。有时候称之为脂肪注射。在进行这种治疗时，脂肪通过外科手术由身体的另一部位取得，冲洗干净后，注入疤痕处，使疤痕的脂肪增长。这种治愈的效果通常可持续6至12个月。
18.3、化学去皮法:轻度或者表面去皮
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只是轻轻除去皮肤细胞的最上层
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用三氯乙酸或者a-羟基酸处理。对于很严重的粉刺，医生们使用苯酚去皮法，这通常要由整容外科医生实施全身麻醉。对于一般的疤痕，你可以让医生进行三氯乙酸去皮法处理。这些去皮对于坑状疤痕的治愈效果是很好的。
19.4、打孔凿切除法:这种治疗方法对于生有窄而深的"碎冰锥"状疤痕是非常有效的。医生使用一个圆形的包干成型切割刀状的凿子将疤痕切除，然后将边缘缝合在一起。
20.5、激光擦皮法:这种治疗方法是使用二氧化碳激光器打磨皮肤。与擦皮法不同，激光擦皮是一种相对来说不会出血的皮肤磨光方法。但是与擦皮法相同，激光治疗也有它的缺点
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如果使用不当，会产生新的疤痕，或者不均匀色斑。
21.6、自体细胞注射:即艾斯丽质(isolagen):是先从求美者耳后取一小块皮肤，然后放到gmp国际标准细胞培养中心进行细胞克隆。首次经过6-8周的细胞培养，培养出3000万-4000万的成纤维细胞及胶原蛋白、弹力蛋白等成分，然后注射到凹陷性疤痕处，使疤痕自然长平。优点：安全、自然、疗效是永久性的，无排异反应及其他副作用。缺点：细胞培养技术要求高，费用较高，对表皮修复作用差。
22.本发明的创新之处：尽管目前有毛发移植手术治疗疤痕性脱发的报导，但与本发明在体外毛囊处理和使用具有活性的毛囊干细胞再生组织泥治疗疤痕上有较大差异；本发明兼有以上诸多疗法的优势，填充具有再生功能的干细胞活性组织泥；本发明不仅可以迅速平复凹陷性疤痕，还可以持久修复疤痕表皮接近或者恢复正常皮肤的功能，安全、微创、自然、疗效是永久性的，无排异反应及其他副作用。
23.本发明毛囊干细胞经过特殊培养，毛囊干细胞的增殖能力进一步提高，移植后可以改善疤痕组织结构，软化疤痕，促进血液循环。毛囊干细胞可以抑制纤维细胞的疯狂增殖，为防止疤痕的复发和继续增长以及治疗提供了一种更有效的微创方法；尤其植入毛囊附属器不仅可以恢复正常皮肤的生理功能，还会减轻疤痕的增生及痒、痛等不适症状；而且填充填平作用显著，改善凹陷立竿见影。该发明很好的解决了上述背景技术中疤痕治疗中
出现的损伤大、恢复时间长、效果不理想、易复发、副作用大等问题。


技术实现要素：

24.本发明的目的在于提供一种治疗凹陷性疤痕的毛囊干细胞组织泥及其制备方法，用于凹陷性疤痕的治疗。通过提取毛囊单位获得毛囊周围皮肤再生组织，通过特制体外培养液培养和舒敏仪照光进一步激活毛囊干细胞，促进毛囊干细胞的生长与增殖；并与培养液一起制成组织泥，从而实现抑制疤痕增生、软化填平疤痕、修复美化凹陷性疤痕的目的。
25.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
26.一种治疗凹陷性疤痕毛囊干细胞组织泥的制备方法，该技术方法包括以下步骤：
27.步骤s1，毛囊的提取，根据凹陷疤痕数量和凹陷程度计算所需毛囊数量，采用fue技术提取若干个毛囊单位备用；
28.步骤s2，毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织的分离，在电子显微镜下将步骤s1提取的毛囊单位分离出毛囊干细胞部分及毛囊周围皮肤再生组织，在电子显微镜或者放大镜下将所述完整毛囊单位分离出毛囊干细胞及毛囊周围真皮组织，去除获得毛囊单位的表皮基底层之上表皮部分和毛干，保留毛囊周围组织和提取到的完整的毛球部、皮脂腺、汗腺等皮肤附属器及连带的皮下脂肪。
29.步骤s3，体外培养，将提取分离的毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织放入温度24-26℃特制培养液培养，培养液的主要成分为地塞米松磷酸钠注射液、复方甘草酸苷注射液和自体prp；激活，激活使用深圳半岛医疗集团研发的舒敏仪(其产生的lllt光能够提高毛囊干细胞的倍殖)照射2小时，通过研究发现培养联合激活能够诱发毛囊干细胞的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长，速度明显提高。
30.步骤s4，再生组织泥的制备，将毛囊干细胞及毛囊周围组织连同适量培养液一起切碎或者打碎，形成再生组织泥备用。尽量保留提取到的皮脂腺、汗腺和部分皮下组织，该成分对于皮肤的修复和恢复皮肤功能具有重要意义；移植后的毛囊干细胞可对疤痕组织进行全面的修复，新生的皮脂腺、汗腺等组织可以解决疤痕组织的痒痛问题。
31.步骤s5，凹陷性疤痕的填补，以种植针在凹陷疤痕周围打孔后将适量再生组织泥填平凹陷疤痕。从而实现抑制疤痕增生、软化填平疤痕、修复美化凹陷性疤痕的目的。
32.所述步骤s1中采用fue技术，提取含有毛囊干细胞及毛囊附属器成份的毛囊。
33.进一步的，所述步骤s2中，提取毛囊单位在放大2-10倍的状态下在电子显微镜或者放大镜下分离出毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织，去除获得毛囊单位的表皮基底层之上表皮部分和毛干，保留毛囊周围组织和提取到的完整的毛球部、皮脂腺、汗腺等皮肤附属器及连带的皮下脂肪。
34.进一步的，所述步骤s3中，体外培养将步骤s2分离的毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织放入特制培养液培养激活，在24-26℃培养60分钟以上备用，培养液的主要成分为地塞米松磷酸钠注射液、复方甘草酸苷注射液和自体prp，激活使用深圳半岛医疗集团研发的舒敏仪(其产生的lllt光能够实现毛囊干细胞的倍殖)照射2小时，通过研究发现培养液培养联合舒敏仪激活能够诱发毛囊干细胞的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长速度，在培养液中进行舒敏仪照光治疗克隆速度明显提高。
35.进一步的，所述步骤s4中，再生组织泥的制备，将毛囊干细胞及毛囊周围组织连同
适量培养液一起切碎或者打碎，形成再生组织泥备用，尽量保留提取到的皮脂腺、汗腺和部分皮下组织，该成分对于皮肤的修复和恢复皮肤功能具有重要意义；移植后的毛囊干细胞可对疤痕组织进行全面的修复，新生的皮脂腺、汗腺等组织可以解决疤痕组织的痒痛问题。
36.进一步的，所述步骤s5，凹陷性疤痕的填补，以种植针在凹陷疤痕周围打孔后将适量再生组织泥填平凹陷疤痕。从而实现抑制疤痕增生、软化填平疤痕、修复美化凹陷性疤痕的目的。
37.以往技术与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
38.1、本发明采用在电子显微镜下或者放大镜下分离出毛囊干细胞部分及毛囊周围皮肤再生组织，保证了所需毛囊周围组织和提取到的完整的毛球部、皮脂腺、汗腺等皮肤附属器及连带的皮下脂肪的完整性，也就保证了毛囊干细胞再生组织泥的活性。
39.2、本发明通过体外培养技术，通过特殊培养液培养和舒敏仪激活，能够诱发毛囊干细胞的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长速度明显提高，从而使再生组织泥具有更强的活性。
40.3、本发明经过提取得到的毛囊干细胞部分，存在于皮脂腺开口和竖毛肌附着点之间的毛囊隆突部。其具有慢周期性、自我更新能力强、多分化潜能、未分化性、体外增殖能力强等特性。毛囊干细胞属于成体干细胞，在体内处于静止状态，在体内培养和内环境作用下表现出惊人的增殖能力，而体外培养同样具有非常强大的增殖能力。毛囊干细胞具有很高的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长，可诱导分化为神经元细胞，神经胶质细胞，平滑肌细胞和黑色素细胞等细胞，而植入体内则可分化形成神经元、黑色素细胞和角化细胞等。这些细胞对于疤痕的修复具有重要意义，基于此我们发明了毛囊干细胞体外培养液。研究发现，毛囊干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，参与皮肤创伤愈合的过程。通过临床研究发现我们发明的培养液诱发了毛囊干细胞的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长明显，相较于现有的凹陷性疤痕治疗方法疗效更显著。
附图说明
41.附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的具体实施方式一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。
42.图1为本发明毛囊干细胞移植治疗疤痕时离体毛囊的处理方法流程图；
具体实施方式
43.以下结合附图对本发明的优选实施例进行详细说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
44.本发明的技术关键点：分离得到完备的毛囊干细胞部分和皮肤附属器的组织成分、毛囊干细胞体外培养和制备干细胞再生组织泥。
45.1、采用fue技术提取并分离出单株毛囊，提取毛囊单位在放大2-10倍的状态下在电子显微镜或者放大镜下分离出毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织，去除获得毛囊单位的表皮基底层之上表皮部分和毛干，保留毛囊周围组织和提取到的完整的毛球部和皮脂腺、汗腺等皮肤附属器及连带的皮下脂肪。
46.2、放入特殊培养液培养，将提取分离的毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织放入
温度24-26℃特制培养液培养，培养液的主要成分为地塞米松磷酸钠注射液、复方甘草酸苷注射液和自体prp；并通过舒敏仪进一步激活毛囊干细胞，实现其倍殖。
47.实施例一：
48.步骤s1，毛囊的提取，采用fue技术提取一个毛囊单位；
49.步骤s2，分离提取毛囊单位在放大2-10倍的状态下在电子显微镜或者放大镜下分离出毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织，去除获得毛囊单位的表皮基底层之上表皮部分和毛干，保留毛囊周围组织和提取到的完整的毛球部及皮脂腺、汗腺等皮肤附属器和连带的皮下脂肪。为制备具有活性的毛囊干细胞再生组织泥提供物质保障。步骤s3，体外培养，将步骤s2分离的毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织放入特制培养液培养激活，在24-26℃培养60分钟以上备用，培养液的主要成分为地塞米松磷酸钠注射液、复方甘草酸苷注射液和自体prp，激活使用深圳半岛医疗集团研发的舒敏仪(其产生的lllt光能够提供毛囊干细胞的倍殖速度)照射2小时，通过研究发现培养液能够诱发毛囊干细胞的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长速度，在培养液中进行舒敏仪照光激活后，克隆速度明显提高。
50.步骤s4，再生组织泥的制备，将毛囊干细胞及毛囊周围组织连同适量培养液一起切碎或者打碎，形成再生组织泥备用，尽量保留提取到的皮脂腺、汗腺和部分皮下组织，该成分对于皮肤的修复和恢复皮肤功能具有重要意义；移植后的毛囊干细胞可对疤痕组织进行全面的修复，新生的皮脂腺、汗腺等组织可以解决疤痕组织的痒痛问题。
51.在本实施例中，所述步骤s1采用fue技术，提取1个单位枕部头发或胡须的毛囊。
52.在本实施例中，所述步骤s2中，采用步骤s1提取毛囊后，提取毛囊单位在放大2-10倍的状态下在电子显微镜或者放大镜下分离出毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织，去除获得毛囊单位的表皮基底层之上表皮部分和毛干，保留毛囊周围组织和提取到的完整的毛球部、皮脂腺、汗腺等皮肤附属器及连带的皮下脂肪。为制备具有活性的毛囊干细胞再生组织泥提供物质保障。
53.在本实施例中，所述步骤s3中，将步骤s2分离的毛囊干细胞及毛囊周围皮肤再生组织放入特制培养液培养激活，在24-26℃培养60分钟以上备用，培养液的主要成分为地塞米松磷酸钠注射液、复方甘草酸苷注射液和自体prp，激活使用深圳半岛医疗集团研发的舒敏仪(其产生的lllt光能够提高毛囊干细胞的活性，促进毛囊干细胞的分化增殖)照射2小时，通过研究发现培养液能够诱毛囊干细胞的增殖潜能，在体外培养时呈克隆性生长，在培养液中进行舒敏仪照光激活后，克隆速度明显提高。
54.在本实施例中，所述步骤s4中，再生组织泥的制备，将毛囊干细胞及毛囊周围组织连同适量培养液一起切碎或者打碎，形成再生组织泥备用，尽量保留提取到的皮脂腺、汗腺和部分皮下组织，该成分对于皮肤的修复和恢复皮肤功能具有重要意义；移植后的毛囊干细胞可对疤痕组织进行全面的修复，新生的皮脂腺、汗腺等组织可以解决疤痕组织的痒痛问题。
55.实施例二：
56.在本实施例中，通过毛囊干细胞再生组织泥治疗凹陷性疤痕的有效率达到100％以上，本发明经临床对比发现毛囊干细胞再生组织泥对凹陷性疤痕修复时间较其他疗法明显缩短，疗效显著提高。
57.本发明的技术难点：“毛囊干细胞及皮肤附属器的完整性”是指种植后的毛囊干细
胞能否直接存活，关系到后期的治疗效果。而经过特殊分离和体外培养的自体毛囊干细胞，具有慢周期性、自我更新能力强、高增殖能力、多分化潜能等特性，移植后可以持续对疤痕组织进行修复。
58.本发明的原理：本发明基于毛囊干细胞体外培养具有慢周期性、自我更新能力强、高增殖能力、多分化潜能等特性。根据所处环境不同，毛囊干细胞可分化为毛囊细胞、皮脂腺细胞、毛囊间表皮细胞等。这些细胞对于皮肤的重构和再生具有重要意义，因此可成功应用于疤痕的修复，治疗各种疤痕。
59.以上所述仅为本发明的优选实例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。