一种酒洗当归饮片及其炮制方法、质量检测方法和应用

1.本发明涉及一种中药原料药酒洗当归饮片，其制备方法以及质量检测方法，以及其在制备益气生血的中药汤剂中的应用。


背景技术：

2.当归为伞形科植物当归angelica sinensis(oliv.)diels的干燥根，其味甘、辛，性温，归肝、心、脾经，主治血虚萎黄、经闭痛经、月经不调、崩中漏下等。当归是我国常用的大宗药材，最早见于《尔雅》中的“山蕲”就是指的当归。当归由于其药性温和，属偏性“随凉药凉，随热药热”，因此在中医处方中大量使用，素有“十方九归”之说。在众多的含有当归的药方中以当归补血汤最为著名。
3.中药的炮制是中药用于临床治疗前必不可少的步骤，大部分中药材在用于临床治疗前都是以植物的地下根茎、动物的部分、矿石等原始的形式存在，表面常存在灰尘等杂质，不利于制剂，不便于服用，不便于煎煮，有些本身或带有毒性，或服用后有较为严重的不良反应。中药的炮制可以有效避免这些情况的出现，在解决了上述问题的基础上，还具有提高疗效的作用。一般认为当归本身无毒性，生当归甘温，取其补性，酒当归辛温，取其散性，以增强其活血补血的效果。当归炮制的作用在于增加或改变其药性，扩大当归的适用范围。
4.历代对于当归的炮制有不同的方法，在目前的文献考证中于南齐的《刘涓子鬼遗方》中首次提到了当归的炮制。后经过历代医家的发展以及经验总结，当归的炮制方法越来越多至20余之多。而如今被广泛沿用的仅剩酒制、炒制等。刘宋时代的一部中医学著作《雷公炮炙论》中初次见到以酒作为辅料进行炮制当归的方法，文中记载“先去尘并头尖硬处一分已来，酒浸一宿”。但这里的酒浸是否也可以理解为酒洗并不能确定。到了唐朝和宋朝时期，除了沿用前朝医家所言酒浸及炒法外，在炮制工艺和辅料方面均有所发展。其中当归酒制法有酒洗、酒炙、酒焙等。在金元时期，除在酒制工艺上又发展为酒蒸法外基本沿用宋之前所用炮制方法。元朝时期王好古在其著作《汤液本草》中提出“酒浸，助法之意也”的论点，并指出：“病在头面及手稍皮肤者，须用酒炒，借酒力以上腾也”。这些见解体现了当归不同用途应使用不同的炮制方法，积极推动了当归酒制法的发展。明代医家开始重视理论的系统整理及研究，这其中一些观点至今仍有重要指导意义。其中，《本草蒙荃》就提出“芦苗去净，醇酒制精。行表洗片时，行上渍一宿”，认为当归酒制能得其精华。但在这里，当归“渍”与当归酒洗是否相同尚不确定，到了清代，当归的酒制工艺则发展有酒煮、酒晒。这些历朝历代对当归炮制的经验以及见解为当归的酒洗提供了许多的借鉴。近代除沿用土炒法外，其他方法均未见有沿用。但这一时期医家对当归炮制作了系统综合归纳。认为当归酒制“上行酒炒，导血归源之理”。
5.目前2020版《中国药典》收载的炮制当归品种为酒炙当归，对于酒洗当归，不同的省、自治区、直辖市药品监督管理部门制定的规范有所不同，所得酒洗当归也没有明确的质量标准。因此，对于不同用处的当归，规范其炮制方法并制定其相应的质量标准是十分必要的。


技术实现要素：

6.本发明旨在提供一种酒洗当归饮片及其炮制方法、质量检测方法和应用。本发明所述方法简单高效，适合大规模生产酒洗当归，采用本方法炮制后的酒洗当归饮片，阿魏酸等有效成分的含量都有所提升。本发明所述方法炮制后的酒洗当归饮片可用于熬制当归补血汤，对于所炮制的酒洗当归饮片，建立了对应的质量标准以便于其后续的应用。
7.本发明通过以下技术方案实现：
8.1.一种酒洗当归饮片的炮制方法，具体包括以下步骤：
9.取不去除根皮的生品当归饮片，厚度在1.5mm～2.5mm之间，将当归与适量黄酒混匀，密封闷透，充分吸润使黄酒被充分吸收，晾干得到酒洗当归饮片，晾干以后的酒洗当归饮片具有浓郁的酒香，且表面呈棕黄色，含水量不得高于15％。
10.作为优选方案，以上所述酒洗当归饮片的制备方法为，取不去除根皮的生品当归饮片，厚度在1.5mm～2.5mm之间，按照当归：黄酒为10g：1g的比例取适量半甜型黄酒均匀喷入当归中，密封闷透，充分吸润4～6h使黄酒被充分吸收，晾干得到酒洗当归饮片，晾干以后的酒洗当归饮片具有浓郁的酒香，且表面呈棕黄色，含水量不得高于15％。
11.经过上述炮制工艺得到的用于当归补血汤的的酒洗当归饮片，其中阿魏酸、挥发油等有效成分溶出速度加快，保证了炮制当归临床应用的安全性以及有效性，且炮制过程简单易行，易于质量控制和大规模生产。
12.上述炮制工艺中，所用的当归饮片的厚度在1.5mm～2.5mm之间，切片厚度会影响干燥时水分的挥发以及在提取时有效成分的溶出，饮片过薄可能产生有效成分再次吸附且有可能由于吸附过多溶剂导致饮片过软不易成形。
13.上述炮制工艺中，当归和黄酒的比例为10g：1g，加入适量的黄酒能够充分促进有效成分的溶出，但黄酒的量若是过多，则会使有效成分溶出而流失。本发明的研究结果表明，当当归和黄酒的比例为10g：1g时，有效成分含量最高。
14.上述炮制工艺所用炮制用辅料为半甜型黄酒，该种黄酒酒精浓度较高，有利于当归饮片中有效成分溶出，且该种黄酒含糖量适中，不会对当归本身的药性产生过高影响。
15.上述炮制工艺中，当归与黄酒需要充分混合均匀，密封，闷润4～6h，使饮片具有酒香。
16.上述炮制工艺中，酒洗当归饮片晾干，实验结果表明，晾干较烘干、炒干等其他方法的有效成分含量高，生产过程易于控制且有效成分能够最大限度的得到保留。
17.上述炮制工艺制备的酒洗当归饮片，其中阿魏酸含量在0.092％～0.109％之间，具有明显的补血的效果，可作为补益剂当归补血汤及其他补益剂的中药材饮片，也可作为包括但不限于天然药物、中成药、保健品的原材料。
18.2.一种中药方剂当归补血汤，以酒洗当归饮片和黄芪饮片为原料，按照当归：黄芪＝1g：5g的比例生产当归补血汤，具体方法为：
19.取所述酒洗当归饮片6g，黄芪饮片30g，加水400ml浸泡30min，待药材吸水量达到饱和后使用武火煎煮30min，收集所得煎液。在药渣中重新加入200ml水使用文火煎煮30min，合并两次煎液，即得具有益气补血效果的当归补血汤。
20.上述当归补血汤的用途包括当归补血汤汤剂、颗粒剂、胶囊剂、配方颗粒等其他含当归补血汤的制品。
21.3.应用薄层色谱法对酒洗当归饮片中的阿魏酸和藁本内酯进行定性鉴别，应用高效液相色谱法对酒洗当归饮片中的阿魏酸进行含量测定，对当归的炮制工艺进行考察，规范当归炮制生产程序。
22.(1)薄层色谱鉴别法
23.取所得酒洗当归饮片，按照2020版《中国药典》当归药材项下的薄层鉴别法进行，以当归对照药材、阿魏酸和藁本内酯为对照品对所制备的酒洗当归饮片进行鉴别，所制备的酒洗当归饮片的薄层色谱图中，与对照药材以及对照品相比，在相应的位置上呈现相同的荧光斑点。
24.(2)高效液相色谱法
25.s1、对照品溶液的制备：取阿魏酸适量于容量瓶中，加甲醇溶解定容，得阿魏酸对照品溶液，4℃保存。
26.s2、供试品溶液的制备：取所述酒洗当归饮片适量，粉碎，精密加入甲醇加热回流提取，待样品冷却后再称量，用溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得。
27.s3、将所述阿魏酸对照品溶液以及供试品溶液于高效液相色谱仪中进样测定。
28.所述高效液相色谱的色谱条件为：
29.色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈(a)：0.1％磷酸水溶液(b)＝13：87为流动相，流速0.5～1.0ml/min；柱温：30～35℃；检测波长：280～320nm；进样量：10μl。
30.作为优选方案，以上所述的酒洗当归饮片的含量测定方法，s1中阿魏酸对照品溶液的制备：精密称定阿魏酸置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成200μg/ml的阿魏酸对照品溶液。
31.作为优选方案，以上所述的酒洗当归饮片的含量测定方法，s2中供试品溶液制备方法为：取制备的酒洗当归粉末0.2g，置于具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，回流提取30min，待样品冷却后用甲醇补足减失的重量，用0.45μm微孔滤膜滤过即得。
32.与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
33.本发明通过采用最适宜的黄酒种类、干燥方式，制备出了一种用于熬制当归补血汤的当归原料药饮片酒洗当归。该方法制备的酒洗当归饮片，阿魏酸等有效成分能够充分溶出，得到的酒洗当归饮片与生当归饮片相比较，有效成分含量大大增加，该方法炮制过程简单易行，易于质量控制和工业化生产。
34.本发明制备的酒洗当归饮片有很好的生血补血活性，能够充分发挥当归补血汤益气补血的功效。
35.本发明采用薄层色谱与高效液相色谱法对所炮制的当归饮片进行质量检测，所得薄层色谱图斑点清晰。用高效液相色谱法建立酒洗当归的含量测定方法，用乙腈-0.1％磷酸水溶液作为流动相进行洗脱，色谱图基线较稳定且色谱峰峰型较好，线性关系考察、精密度、稳定性、重复性、加样回收、系统适用性等方法学考察结果良好，能客观、准确的检测和评价所得酒洗当归的质量，规范化当归的炮制过程。
36.本发明所述方法炮制后的当归可用于熬制当归补血汤，当归补血汤是国家中药管理局会同国家药品监督管理局制定的《古代经典名方目录(第一批)》中的第51首方，具有良
好的补气生血功效。
附图说明
37.图1酒洗当归炮制过程以及炮制后的酒洗当归；
38.图2 10批生品当归饮片的含量测定图；
39.图3酒洗当归炮制用酒种类的优化；
40.图4酒洗当归炮制用酒量的优化；
41.图5酒洗当归干燥方式的优化；
42.图6酒洗当归炮制用黄酒种类的优化；
43.图7 15批酒洗当归饮片与对照药材薄层鉴别图，其中1～15.酒洗当归饮片，16.当归对照药材；
44.图8 15批所制备酒洗当归饮片与对照品薄层鉴别图，其中1.藁本内酯对照品，2.阿魏酸对照品，3～15.酒洗当归饮片；
45.图9酒洗当归含量测定提取方式的优化；
46.图10酒洗当归含量测定提取溶剂的优化；
47.图11阿魏酸对照品溶液的hplc图谱a以及酒洗当归饮片含量测定hplc图谱b；
48.图12酒洗当归饮片中阿魏酸的标准曲线图；
49.图13阿魏酸的系统适应性hplc图谱，其中a是extend-c18色谱柱实验结果，b是hypersil-c18色谱柱实验结果，c是newmate
tm c18色谱柱实验结果。
具体实施方式
50.为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行描述，这些描述只是进一步解释本发明的特征和优点，并非用于限制本发明的权利要求。
51.实施例用到的仪器与试剂如下：
52.实验器材
53.1.仪器
54.岛津仪器(中国苏州)股份有限公司lc-20(uv)高效液相色谱仪，包括lc-20送液单元，sil-20自动进样器，spd-20紫外可见检测器和cto-20储液盒一体型柱温箱，ym-100s型数控超声波清洗器(深圳市方奥微电子有限公司)，ja2603b电子分析天平(上海天美天平仪器有限公司)，le204e/02电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，jcs-600电子天平(凯丰集团有限公司)，blsb-5低温冷却液循环泵(南京大卫仪器设备有限公司)，rs-fs1406多功能粉碎机(合肥荣事达小家电有限公司)，hh-8数显恒温水浴锅(金坛市江南仪器厂)。
55.2.药品与试剂
56.生品当归饮片，阿魏酸(批号：110773-201915)对照品购自中国食品药品检定研究院；藁本内酯(批号：91980008)对照品购自上海安谱实验科技股份有限公司；甲醇(分析纯)；磷酸(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；50％食用酒精、某品牌黄酒(半甜型)以及某品牌浓香型白酒(58％vol)均由连锁超市购得。
57.实施例1：炮制用于制作当归补血汤的当归饮片：
58.取厚度在1.5mm～2.5mm之间的生品当归饮片，称重，再称取与当归重量十分之一
相当的半甜型黄酒置于喷壶。首先将生品当归饮片平铺于合适的器皿中，将半甜型黄酒均匀的喷洒于当归饮片上，密封闷透4h直至当归饮片两面都被完全润湿，内部也被黄酒完全浸润至透心；常温下晾干，直至当归饮片轻折易断且具有浓郁的酒香为结束，酒洗当归饮片炮制过程以及得到的酒洗当归饮片如图1所示。
59.实施例2：生品当归饮片的含量测定
60.采购来自三个地区的10批当归饮片，按照《中国药典》2020版中相关规定进行所购买生品当归饮片的含量，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈：0.085％磷酸溶液(17：83)为流动相，检测波长为316nm，柱温35℃。所采购的10批当归饮片产地以及批号见表1，所得10批生品当归的含量测定结果见表1以及图2。
61.表1 10批生品当归产地、批号以及含量测定结果
[0062][0063]
根据药典的规定，干燥的生品当归饮片中，含阿魏酸不得少于0.050％，本发明所采购的当归饮片中阿魏酸含量在0.064％～0.081％之间，所采购的当归饮片符合药典标准。
[0064]
实施例3：用于当归补血汤具有补血生血的酒洗当归饮片炮制工艺的比较，按以下方法进行。
[0065]
将炮制好的当归药材利用hplc法进行初步的评价，精密称取样品0.2g，精密加入20ml水，超声30min，取续滤液过0.45μm微孔滤膜进样进行评价。照表2所述色谱条件对当归的炮制工艺进行初步评价。hplc色谱条件：色谱柱为hypersil c18 ods，流动相分别为0.08％磷酸水溶液(a)和乙腈(b)，流速：1.0ml
·
min-1
，spd-20av紫外-可见光检测器检测波长：316nm，进样量：10μl；柱温：30℃。
[0066]
表2炮制工艺初步评价梯度洗脱条件
[0067][0068]
(1)炮制用酒种类的选择：
[0069]
本发明选用50％食用酒精、黄酒(半甜型)以及白酒(58％vol)三类酒，分别按照当归和酒10:1(g：g)的比例，将当归饮片平铺于合适的器皿中，将酒均匀的喷洒于当归饮片上，密封闷透4h直至当归两面都被完全润湿，内部也被酒完全浸润至透心；常温下晾干，直至当归饮片轻折易断且具有浓郁的酒香为结束。将炮制好的酒洗当归饮片利用hplc法进行质量评价。按照实施例1所述方法制备样品并按照表2所示方法进行洗脱并分析测定，结果见表3以及图3。
[0070]
表3不同的酒炮制当归饮片效果测定结果
[0071][0072]
结果表明，使用黄酒炮制当归饮片所得的阿魏酸等有效成分含量最高。因此，炮制酒洗当归饮片选用黄酒为辅料。
[0073]
(3)加酒量对酒洗当归饮片炮制效果的影响：
[0074]
取生品当归饮片3批，每批50g，将当归饮片平铺于合适的器皿中，分别按照当归和黄酒10:1、10:2、10:3(g：g)的比例加入黄酒，密封闷透4h直至当归两面都被完全润湿，内部也被酒完全浸润至透心；常温下晾干。将炮制好的酒洗当归饮片利用hplc法进行质量评价，按照实施例1所述方法制备样品并按照表2所示方法进行洗脱并分析测定，结果见表4以及图4。
[0075]
表4不同加酒量酒洗当归样品中阿魏酸的含量测定结果
[0076][0077]
结果表明：当归和黄酒的比例为10：1(g：g)时，阿魏酸的含量最高。加入适量的黄酒能够充分促进有效成分的溶出，但黄酒的量若是过多，则会使有效成分溶出而流失。本发明的研究结果表明，当当归和黄酒的比例为10：1(g：g)时，有效成分含量最高。
[0078]
(4)炒干、晾干和烘干对酒洗当归饮片的影响：
[0079]
取生品当归饮片3批，每批50g，将当归饮片平铺于合适的器皿中，按照当归和黄酒10:1(g：g)的比例加入黄酒，密封闷透4h直至当归两面都被完全润湿，内部也被酒完全浸润
至透心；选择不同的方式将所得当归饮片干燥。将炮制好的酒洗当归饮片利用hplc法进行质量评价，按照实施例1所述方法制备样品并按照表2所示方法进行洗脱并分析测定，结果见表5及图5。
[0080]
表5不同干燥方式对酒洗当归样品中阿魏酸的含量影响
[0081][0082]
结果表明：晾干的饮片中有效成分含量高于炒干和烘干，温度过高会使当归中的有效成分损失，故选择将酒洗当归饮片晾干。
[0083]
(5)炮制用黄酒种类的选择：
[0084]
取生品当归饮片3批，每批50g，将当归饮片平铺于合适的器皿中，按照当归和酒10:1(g：g)的比例，分别均匀加入半干型黄酒、半甜型黄酒、甜型黄酒，密封闷透4h直至当归两面都被完全润湿，内部也被酒完全浸润至透心；常温下晾干，直至当归饮片轻折易断且具有浓郁的酒香为结束。将炮制好的酒洗当归饮片利用hplc法进行质量评价，按照实施例1所述方法制备样品并按照实施例4项下优化后的色谱条件进行hplc含量测定，结果见表6以及图6。
[0085]
表6不同黄酒类型炮制当归饮片效果测定结果
[0086][0087]
结果表明，使用半甜型黄酒炮制当归饮片所得的阿魏酸含量最高。该种黄酒酒精浓度较高，有利于当归饮片中有效成分溶出，且该种黄酒含糖量适中，不会对当归本身的药性产生过高影响。因此，炮制酒洗当归饮片选用半甜型黄酒为辅料。
[0088]
(6)工艺总结：取厚度在1.5mm～2.5mm之间的生品当归饮片，称重，再称取与当归重量十分之一相当的半甜型黄酒置于喷壶。首先将当归饮片平铺于合适的器皿中，将黄酒均匀的喷洒于当归饮片上，密封闷透4h直至当归两面都被完全润湿，内部也被黄酒完全浸润至透心；常温下晾干，直至当归饮片轻折易断且具有浓郁的酒香为结束。
[0089]
实施例4：酒洗当归饮片的质量标准，采用薄层色谱法对所得酒洗当归饮片进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对所得酒洗当归饮片中的阿魏酸进行定量分析。
[0090]
(1)酒洗当归的薄层色谱法进行定性分析，按以下方法进行：
[0091]
取所得酒洗当归饮片，按照2020版《中国药典》当归药材项下的薄层鉴别法进行，以当归对照药材、阿魏酸和藁本内酯为对照品对所制备的酒洗当归饮片进行鉴别，所制备的酒洗当归饮片的薄层色谱图中，与对照药材以及对照品相比，在相应的位置上呈现相同的荧光斑点，详见图7和图8。实验结果表明，所得的酒洗当归饮片与生品当归饮片相比，有效成分没有缺失。
[0092]
(2)阿魏酸的高效液相色谱定量分析：
[0093]
s1、对照品溶液的制备：精密称定阿魏酸置于容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成200μg/ml的阿魏酸对照品溶液。
[0094]
s2、供试品溶液的制备：取制备的酒洗当归粉末0.2g，至于具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，回流提取30min，待样品冷却后用甲醇补足减失的重量，用0.45μm微孔滤膜滤过即得。
[0095]
本发明通过对不同提取方法(超声以及回流)及不同提取溶剂(50％甲醇水溶液、50％乙醇水溶液、甲醇、水、乙醇)进行实验比较，结果发现回流提取所得的阿魏酸峰分离度良好，且得到的阿魏酸含量高，故采用回流提取的方法，详见图9；对提取溶剂的考察中发现甲醇提取阿魏酸含量最高，所以选用甲醇进行提取，详见图10。
[0096]
s3、液相色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈(a)：0.1％磷酸水溶液(b)＝13：87为流动相，流速0.5ml/min；柱温：35℃；检测波长：316nm；进样量：10μl。
[0097]
本发明对流速(0.5ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min)进行筛选，发现当流速为0.5ml/min时，所得阿魏酸峰面积最大，故选择0.5ml/min的流速。
[0098]
本发明比较了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-0.1％磷酸水、乙腈-0.1％磷酸水、乙腈-0.2％磷酸水、乙腈-0.1％甲酸等多个不同洗脱系统的洗脱效果。结果发现以乙腈和0.1％磷酸水为流动相时，阿魏酸峰峰形良好，故最终选定以乙腈和0.1％磷酸水为流动相。
[0099]
本发明比较了不同的流动相比例的洗脱效果，乙腈-0.1％磷酸水＝13:87，乙腈-0.1％磷酸水＝17:83，乙腈-0.1％磷酸水＝20:80，实验结果表明当流动相为乙腈-0.1％磷酸水＝13:87时，阿魏酸峰能够完全分开且耗时较短，所得阿魏酸对照品色谱峰以及供试品溶液色谱图详见图11。
[0100]
优化后的色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈(a)：0.1％磷酸水溶液(b)＝13：87为流动相，流速0.5ml/min；柱温：35℃；检测波长：316nm；进样量：10μl。
[0101]
s4、方法学考察：
[0102]
(1)线性关系的考察：分别配制阿魏酸对照品溶液10.00μg/ml，20.00μg/ml，30.00μg/ml，40.00μg/ml，100.00μg/ml，进样分析，记录阿魏酸色谱图峰面积，结果见表7，纵坐标为峰面积，横坐标为进样浓度，绘制标准曲线，详见图12，并进行线性回归。回归方程为：y＝55126.4x(r＝0.9996)。结果表明，阿魏酸对照品溶液在10.00～100.00μg/ml之间线形关系良好。
[0103]
表7阿魏酸线性实验结果
[0104][0105]
(2)精密度考察：取阿魏酸对照品溶液稀释制成40μg/ml的样品溶液，按照实施例4项下优化后的色谱条件进样6次，测定阿魏酸峰面积，计算rcd值，结果见表8，rsd＝0.788％，表明该方法精密度良好。
[0106]
表8阿魏酸精密度实验峰面积保留时间和峰面积实验结果
[0107][0108]
(3)重现性考察：取同一批酒洗当归粉末制备供试品溶液，平行制备6份样品，按实施例4项下优化后的色谱条件分别进样1次，记录阿魏酸的峰面积，计算阿魏酸色谱峰面积的rsd为0.425％，表明该方法重现性良好
[0109]
表9阿魏酸重现性实验峰面积保留时间和峰面积实验结果
[0110][0111]
(4)稳定性实验：取同一批酒洗当归粉末制备一份供试品溶液，按照实施例4项下优化后的色谱条件分别于0，2，4，8，12，24h进样分析，记录色谱峰面积，计算阿魏酸色谱峰面积的rsd为1.417％，说明样品在24h内稳定，结果见表10。
[0112]
表10阿魏酸稳定性实验峰面积保留时间和峰面积实验结果
[0113][0114]
(5)加样回收实验：取已知含量的酒洗当归粉末约0.1g，称取6份，精密称定，6组依次加入含阿魏酸浓度为样品浓度100％的标品溶液1.0ml，摇匀，按上述制备方法制备供试品溶液，按实施例4项下优化后的色谱条件进样分析，记下色谱峰面积，计算回收率，平均回收率为96.33％，结果表明该方法回收率良好，结果见表11。
[0115]
表11阿魏酸加样回收实验结果
[0116][0117]
(6)系统适应性实验：依次取extend-c18 5μm(250
×
4.6mm)、hypersil ods 5μm
(250
×
4.6mm)、newmate
tm c18(250
×
4.6mm)三根不同厂家生产的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，取100μg/ml的对照品和供试品溶液，按实施例4优化后的色谱条件进样，结果见表12以及图13a～c，可见不同的色谱柱所测得的阿魏酸含量差异不大，阿魏酸含量差异rsd值为3.78％，小于5％，说明该方法系统适应性良好。
[0118]
表12阿魏酸系统适应性实验实验结果
[0119][0120]
s5、取10批制备的酒洗当归饮片制备供试品溶液，按照实施例4项下所述方法注入高效液相色谱仪进行分析，记录色谱图；结果见表13。
[0121]
表13 10批酒洗当归中阿魏酸的含量
[0122][0123]
以上结果表明，所制备的酒洗当归饮片比生品当归饮片中阿魏酸含量高，阿魏酸含量在0.096％～0.109％之间，平均含量为0.101％，按照平均含量下浮20％记，规定本发明所炮制的当归饮片中阿魏酸含量不得少于0.080％。
[0124]
实施例5经典名方当归补血汤及其基准样品冻干粉的制备方法
[0125]
称取黄芪饮片30g，酒洗当归饮片6g，捣碎后过10目筛，置煎药锅中，加水400ml浸泡30min。使用武火煎煮30min，放冷，滤过。另加水200ml，文火煎煮30min，放冷，滤过。将两次煎液合并，得当归补血汤；
[0126]
将所得当归补血汤不经过浓缩，以进料流量15ml/min和-35℃冻结温度进行喷雾冷冻干燥，得当归补血汤基准样品冻干粉。
[0127]
实施例6：当归补血颗粒的制备方法
[0128]
称取黄芪饮片30g，酒洗当归饮片6g，捣碎后过10目筛，置煎药锅中，加水400ml浸泡30min。使用武火煎煮30min，放冷，滤过。另加水200ml，文火煎煮30min，放冷，滤过。将两次煎液合并，得当归补血汤；将所得当归补血汤不经过浓缩，以进料流量15ml/min和-35℃冻结温度进行喷雾冷冻干燥，得当归补血汤基准样品冻干粉。在冻干粉中加入适量的糊精，以75％～80％乙醇作为粘合剂，湿法制粒，干燥，整粒，即得。
[0129]
实施例7：酒洗当归饮片的应用，用于制备具有补气生血效果的当归补血汤以及当归补血颗粒。
[0130]
取实施例5以及实施例6项下的药品10批，每批0.2g，精密称定，精密加入甲醇10ml，称重，回流提取30min，待样品冷却后用甲醇补足减失的重量，用0.45μm微孔滤膜滤过即得。
[0131]
按照实施例4项下优化后的色谱条件进样分析，结果见表14。
[0132]
表14 10批当归补血汤/当归补血颗粒中阿魏酸含量
[0133][0134][0135]
可见，本发明所制备的酒洗当归饮片可用于制备具有补气生血的当归补血汤以及当归补血汤的现代制剂当归补血颗粒，所制备的制剂质量稳定，可靠。
[0136]
实施例8阿魏酸在生品当归、酒洗当归、当归补血汤冻干粉以及当归补血颗粒之间的量值传递研究
[0137]
以主要指标成分阿魏酸的含量为指标，计算阿魏酸从生品当归饮片到制备的酒洗当归饮片、酒洗当归饮片到当归补血汤冻干粉、从当归补血汤冻干粉到当归补血汤颗粒之间的量值传递，结合实施例2、实施例4、实施例7中所得实验结果，按照公式转移率＝(m/m)*100％进行计算，其中m为下一级物质中指标成分的含量，即酒洗当归、冻干粉和颗粒剂，m为上一级物质中指标成分的含量，即生品当归、酒洗当归和冻干粉。研究阿魏酸在生品当归-酒洗当归饮片-冻干粉-颗粒剂中的转移情况，为当归补血汤从传统汤剂开发为现代颗粒剂提供理论依据。
[0138]
结果如表15所示，可以看到阿魏酸从生品当归饮片到炮制的酒洗当归饮片之间的转移率在117.72％～150.00％之间，平均转移率为135.03％，转移率rsd值为7.78％。阿魏酸从炮制的当归饮片到当归补血汤冻干粉之间的转移率在62.96％～73.12％之间，平均转移率为66.03％，转移率rsd值为5.58％。阿魏酸从当归补血汤冻干粉到当归补血颗粒之间的转移率在19.12％～20.63％之间，平均转移率为19.94％，转移率rsd值为2.51％。可以看出，阿魏酸的转移率未出现离散数据，且转移率都很高，说明该炮制工艺优良，能够最大可能的将药材中的有效成分保留并促进溶出，能够在后续当归的应用中保证药品质量的稳定可靠。
[0139]
表15当归中阿魏酸的量值传递研究
[0140][0141][0142]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0143]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。