一种治疗骨关节病的组合物及其应用的制作方法

1.本发明属于生物医药、保健品技术领域，具体涉及一种治疗骨关节病的组合物及其应用。


背景技术：

2.骨关节炎由于关节软骨退化磨损，同时会随着年龄的增长而增加疾病风险的退行性关节疾病。骨关节炎的临床症状主要表现为在发病早期，会出现隐性疼痛，运动加重后疼痛程度加强，恢复正常后，疼痛程度缓解，但是随着症状的加重，通过休息也无法缓解疼痛；关节僵硬，在早晨，会出现关节被束缚的感觉而且运动僵硬，关节乏力和功能丧失，随着病情的进展，出现的疼痛和关节僵硬、关节变形、肌肉萎缩等都可能会导致关节自主功能的丧失。
3.目前影响骨关节炎发病的主要因素主要包括以下几种：(1)年龄、性别、种族和遗传因素；(2)骨密度高的人发生骨关节炎的可能性较大，骨量增加与骨关节炎的发生呈正相关；(3)关节失稳：随着年龄的增长或受疾病的影响，神经系统对关节周围的肌肉和感觉的控制支配能力下降，关节周围肌力也下降，出现关节不稳。不稳定的膝关节很易发生关节炎。(4)营养不足，如果缺乏维生素d则膝关节发生骨关节炎和疼痛的风险性增加翻倍。
4.当前对骨关节炎的药物治疗主要包括解热镇痛抗炎、止痛剂和营养补充剂。这些药物可以在一定程度上改善疾病的临床症状，但非留体消炎药会促进软骨中蛋白多糖的合成，加快关节软骨的的退变，长期服用不仅影响患者康复，还有可能加重病情的进展。除此之外还有关节内注射药，糖皮质激素、透明质酸钠。关节内注射对机体有一定的创伤，不适宜长期使用，且激素类药物短期见效快，长期服用会导致骨质疏松，从长远来看也会加重病情。
5.临床上骨关节疼痛的治疗药副作用较大，因此中药、食疗治疼痛的理念具有重大的意义。
6.中国发明专利申请cn106822915a公开了一种用于治疗类风湿关节炎的姜黄素透明质酸纳米胶束及其制备方法和应用，是将姜黄素和透明质酸溶液通过酯化反应形成复合物，在水溶液中通过亲疏水作用力自组装形成纳米胶束；并提供了其制备方法和应用。本发明方法制备简单，无特殊设备要求，且成本低廉，药物具有良好的生物相容性及体内无毒副作用；还具有明显的关节润滑及保护、抗炎症、抗水肿的作用。
7.再一中国发明专利申请cn106072651a公开了一种具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物及其制备方法，原料药组分如下：硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠、二甲基碱、葛根提取物。该发明经动物功能试验证明，能显著提高大鼠的股骨重量、骨钙含量、股骨中点密度和股骨远心端骨密度。
8.以上均对治疗骨关节炎和关节痛的治疗进行了一定的探索，对骨关节炎的炎症及疼痛具有一定的治疗作用，仍无法满足临床的治疗需要，大部分患者在患病急性期仍需服用化学药予以缓解，中药、食疗仍是疾病缓和期的辅助治疗，其效果仍有待进一步提高。


技术实现要素：

9.针对现有技术存在的不足，本发明提供一种治疗骨关节病的组合物，对骨关节的炎症反应及疼痛具有缓解和治疗作用，此外还可预防疾病的发生。
10.本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
11.一种治疗骨关节病的组合物，所述组合物的原料包括如下组分：葛根、姜黄、壳寡糖、鱼骨粉和透明质酸/透明质酸钠。
12.优选地，以重量份数计，所述组合物的原料包括如下组分：葛根20-30份、姜黄5-10份、壳寡糖5-10份、鲟鱼骨粉5-10份和透明质酸/透明质酸钠3-5份。
13.优选地，以重量份数计，所述组合物的原料包括如下组分：葛根24份、姜黄6份、壳寡糖6份、鲟鱼骨粉6份和透明质酸/透明质酸钠3份。
14.优选地，所述葛根、姜黄和壳寡糖的质量比为2-6:1-2:1。
15.优选地，所述鱼骨粉为鲟鱼骨粉。
16.鲟鱼筋为鲟鱼的脊骨，具有补血、益气，强肾开胃、清热解毒、滋阴养颜、明目清心、润燥理肺的功效，对防止骨质疏松，增强肌体免疫力非常有效。本发明选用鲟鱼骨粉含有丰富的骨胶原、蛋白质和不饱和脂肪酸，能促进骨细胞再生，保护骨血管。
17.本发明再一目的是提供上述组合物的制备方法，包括如下步骤：
18.(1)将葛根和姜黄加水提取，过滤得滤渣1和滤液1；
19.(2)将滤渣1加乙醇提取得滤液2，将滤液2过大孔树脂，先用水洗脱去除，然后用乙醇洗脱，得洗脱液；
20.(3)将壳寡糖加水溶胀，然后加入滤液1中搅拌，酶解，过滤，得酶解液；
21.(4)将将洗脱液和酶解液混合干燥得干膏粉；
22.(5)将干膏粉、鱼骨粉和透明质酸混合即得。
23.优选地，步骤(1)中所述水的质量与葛根和姜黄总质量的比为5-10：1，所述提取时间为0.5-1h，提取的次数为1-3次。
24.优选地，步骤(2)中所述乙醇为50-75％乙醇，所述乙醇的质量与滤渣1的质量比为5-8：1，所述大孔树脂的型号为dm-301，所述洗脱为用30-40％乙醇，55-60％乙醇，75-85％乙醇依次洗脱，合并洗脱液。
25.优选地，步骤(3)中所述水的质量为壳寡糖质量的1-3倍，溶胀的温度为30-50℃。
26.优选地，所述酶解用的酶为木瓜蛋白酶和纤维素酶。
27.优选地，木瓜蛋白酶和纤维素酶的质量比为5-8:1。
28.优选地，酶解的温度为35-45℃，所述酶解的时间为1-2.5h；所述酶解的ph为5.0-6.0。
29.本发明还有一个目的是提供上述组合物在制备治疗骨关节病的产品中的应用。
30.与现有技术相比，本发明的有益效果：
31.(1)本发明通过葛根、姜黄、壳寡糖、鱼骨粉和透明质酸/透明质酸钠配伍，采用科学的配比，达到了明显治疗骨关节的炎症反应及疼痛的效果，且在疼痛的急性期，也具有快速缓解的作用。相比常用非甾体抗炎药，无毒副作用，有效成分种类多，通过多靶点调节炎性反应。
32.(2)本发明采用鲟鱼骨粉，不仅能提供丰富的钙源，含有丰富的骨胶原、蛋白质和
不饱和脂肪酸，能促进骨细胞再生，保护骨血管。与葛根、姜黄配伍，补血活血，行气止痛、燥湿解毒，协同治疗关节肿痛。
33.(2)本发明对制备方法进做了进一步研究，研究表明，通过采用特定的酶提取，以及dm-301树脂过柱纯化富集活性成分，可以充分提取活性成分，镇痛抗炎作用明显增强，说明其提取的活性成分更丰富。
附图说明
34.图1为本发明组合物对福尔马林诱导的小鼠疼痛的作用；
35.图2为给药3天后本发明组合物对碘乙酸诱导的小鼠疼痛的作用；
36.图3为给药7天后本发明组合物对碘乙酸诱导的小鼠疼痛的作用。
具体实施方式
37.下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明。
38.实施例1
39.本实施例治疗骨关节病的组合物，其原料组分及重量份如下：葛根24份、姜黄6份、壳寡糖6份、鲟鱼骨粉6份和透明质酸3份。
40.制备方法如下：
41.(1)将葛根和姜黄加水回流提取2次，每次1h，过滤，得滤渣1和滤液1；
42.(2)将滤渣1加5倍量75％乙醇回流提取1h，得滤液2，将滤液2过树脂dm-301柱子，湿法装柱，径高比为1:5，先用5柱体积量水洗脱去除，然后用3倍柱体积量的35％乙醇，5倍柱体积量的60％乙醇，3倍柱体积量的80％乙醇依次洗脱，合并洗脱液；
43.(3)将壳寡糖加1倍水溶胀，加入滤液1中搅拌均匀，然后加入0.3％的木瓜蛋白酶和纤维素酶混合物(质量比5:1)，调ph为6.0，在45℃下酶解1h，煮沸5分钟灭活酶，过滤，得酶解液；
44.(4)将洗脱液和酶解液混合，浓缩，干燥得干膏粉；
45.(5)将干膏粉、鲟鱼骨粉和透明质酸混合均匀即得。
46.实施例2
47.本实施例治疗骨关节病的组合物，其原料组分及重量份如下：葛根20份、姜黄5份、壳寡糖5份、鲟鱼骨粉5份和透明质酸3份。
48.制备方法如下：
49.(1)将葛根和姜黄加水回流提取1h，过滤得滤渣1和滤液1；
50.(2)将滤渣1加8倍量50％乙醇回流提取1h，得滤液2，将滤液2过树脂dm-301柱子，湿法装柱，径高比为1:5，先用6柱体积量水洗脱去除，然后用2倍柱体积量的40％乙醇，6倍柱体积量的55％乙醇，4倍柱体积量的75％乙醇依次洗脱，合并洗脱液；
51.(3)将壳寡糖加1倍水溶胀，然后加入滤液1中搅拌均匀，然后加入0.5％的木瓜蛋白酶和纤维素酶(质量比8:1)，调ph为5.0，在35℃下酶解2h，煮沸5分钟灭活酶，过滤，得酶解液；
52.(4)将洗脱液和酶解液混合，浓缩，干燥得干膏粉；
53.(5)将干膏粉、鲟鱼骨粉和透明质酸混合均匀即得。
54.实施例3
55.本实施例治疗骨关节病的组合物，其原料组分及重量份如下：葛根30份、姜黄10份、壳寡糖10份、鲟鱼骨粉9份和透明质酸5份。
56.制备方法如下：
57.(1)将葛根和姜黄加水回流提取3次，每次0.5h，过滤得滤渣1和滤液1；
58.(2)将滤渣1加5倍量70％乙醇回流提取1h，得滤液2，将滤液2过树脂dm-301柱子，湿法装柱，径高比为1:5，先用5柱体积量水洗脱去除，然后用2倍柱体积量的30％乙醇，4倍柱体积量的55％乙醇，5倍柱体积量的75％乙醇依次洗脱，合并洗脱液；
59.(3)将壳寡糖加1倍水溶胀，然后加入滤液1中搅拌均匀，然后加入0.2％的木瓜蛋白酶和纤维素酶(质量比7:1)，调ph为6.0，在40℃下酶解1.5h，煮沸5分钟灭活酶，过滤，得酶解液；
60.(4)将洗脱液和酶解液混合，浓缩，干燥得干膏粉；
61.(5)将干膏粉、鲟鱼骨粉和透明质酸混合均匀即得。
62.对比例1
63.本对比例与实施例1的区别在于，组分原料不同，具体如下：葛根30份、壳寡糖6份、鲟鱼骨粉6份和透明质酸3份。
64.制备方法如下：
65.(1)将葛根加水回流提取2次，每次1h，过滤得滤渣1和滤液1；
66.(2)将滤渣1加75％乙醇回流提取1h，得滤液2，将滤液2过树脂dm-301柱子，湿法装柱，径高比为1:5，先用5柱体积量水洗脱去除，然后用3倍柱体积量的35％乙醇，5倍柱体积量的60％乙醇，3倍柱体积量的80％乙醇依次洗脱，合并洗脱液；
67.(3)将壳寡糖加1倍水溶胀，然后加入滤液1中搅拌均匀，然后加入0.3％的木瓜蛋白酶和纤维素酶(质量比5:1)，调ph为6.0，在45℃下酶解1h，煮沸5分钟灭活酶，过滤，得酶解液；
68.(4)将洗脱液和酶解液混合，浓缩，干燥得干膏粉；
69.(5)将干膏粉、鲟鱼骨粉和透明质酸混合均匀即得。
70.对比例2
71.本对比例与实施例1的区别在于，组分原料不同，具体如下：姜黄30份、壳寡糖6份、鲟鱼骨粉6份和透明质酸3份。
72.制备方法如下：
73.(1)将姜黄加水回流提取2次，每次1h，过滤得滤渣1和滤液1；
74.(2)将滤渣1加75％乙醇回流提取1h，得滤液2，将滤液2过树脂dm-301柱子，湿法装柱，径高比为1:5，先用5柱体积量水洗脱去除，然后用3倍柱体积量的35％乙醇，5倍柱体积量的60％乙醇，3倍柱体积量的80％乙醇依次洗脱，合并洗脱液；
75.(3)将壳寡糖加1倍水溶胀，然后加入滤液1中搅拌均匀，然后加入0.3％的木瓜蛋白酶和纤维素酶(质量比5:1)，调ph为6.0，在45℃下酶解1h，煮沸5分钟灭活酶，过滤，得酶解液；
76.(4)将洗脱液和酶解液混合，浓缩，干燥得干膏粉；
77.(5)将干膏粉、鲟鱼骨粉和透明质酸混合均匀即得。
78.对比例3
79.本对比例与实施例1的制备方法不同，具体为步骤(2)的大孔树脂采用hpd-300，其余同实施例1。
80.制备方法如下：
81.(1)将葛根和姜黄加水回流提取2次，每次1h，过滤得，滤渣1和滤液1；
82.(2)将滤渣1加75％乙醇回流提取1h，得滤液2，将滤液2过树脂hpd-300柱子，湿法装柱，径高比为1:5，先用5柱体积量水洗脱去除，然后用3倍柱体积量的35％乙醇，5倍柱体积量的60％乙醇，3倍柱体积量的80％乙醇依次洗脱，合并洗脱液；
83.(3)将壳寡糖加1倍水溶胀，然后加入滤液1中搅拌均匀，然后加入0.3％的木瓜蛋白酶和纤维素酶(质量比5:1)，调ph为6.0，在45℃下酶解1h，煮沸5分钟灭活酶，过滤，得酶解液；
84.(4)将洗脱液和酶解液混合，浓缩，干燥得干膏粉；
85.(5)将干膏粉、鲟鱼骨粉和透明质酸混合均匀即得。
86.对比例4
87.本对比例与实施例1的区别在制备方法不同，具体为步骤(3)中酶解时采用的酶为质量比为2:3:1的无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶和纤维素酶复配而成。
88.制备方法如下：
89.(1)将葛根和姜黄加水回流提取2次，每次1h，过滤得，滤渣1和滤液1；
90.(2)将滤渣1加75％乙醇回流提取1h，得滤液2，将滤液2过树脂dm-301柱子，湿法装柱，径高比为1:5，先用5柱体积量水洗脱去除，然后用3倍柱体积量的35％乙醇，5倍柱体积量的60％乙醇，3倍柱体积量的80％乙醇依次洗脱，合并洗脱液；
91.(3)将壳寡糖加1倍水溶胀，然后加入滤液1中搅拌均匀，然后加入0.3％的无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶和纤维素酶(质量比2:3:1)，调ph为6.0，在45℃下酶解1h，煮沸5分钟灭活酶，过滤，得酶解液；
92.(4)将洗脱液和酶解液混合，浓缩，干燥得干膏粉；
93.(5)将干膏粉、鲟鱼骨粉和透明质酸混合均匀即得。
94.试验1本发明对福尔马林诱导的小鼠疼痛的影响
95.110只spf级c57小鼠、雄性、22-24克，随机分为11组，每组10只，阴性组小鼠给予溶剂；实施例1低剂量组(50mg/kg)、中剂量组(100mg/kg)、高剂量组(200mg/kg)，实施例2(200mg/kg)、实施例3组(200mg/kg)，阳性组给予非甾体抗炎药精氨酸布洛芬颗粒剂(0.16g/kg)，对比例1-4组(200mg/kg)，样品混合后加入0.5％cmc，超声1分钟，稀释所要浓度备用。每日灌胃给药一次，共14天。
96.末次给药后30分钟，小鼠足趾皮下注射20ul的1％福尔马林，立即放入烧杯内，摄像机连续拍摄60分钟，统计小鼠舔足的时间。阴性组与实施例1低、中、高剂量组对小鼠炎性疼痛舔足时间的影响见图1，其余实施例、阳性组和对比例组的测定值如表1所示。
97.表1配方样品对福尔马林诱导疼痛和炎症的作用
98.[0099][0100]
注：同一列，各组与阴性组比较，
*
p＜0.05；
**
p＜0.01。
[0101]
结果分析：小鼠足底注射福尔马林后产生了以伤害性刺激为主的i相疼痛(0-15分钟)和以炎性疼痛为主的ii相疼痛(16-45分钟)。从图1结果可知，配方样品显著降低了小鼠i相和ii相疼痛的舔足时间，说明样品具有显著的镇痛抗炎的作用。对比例1和对比例2采用缺味药配方，对比例3采用不合理的配比，对比例4采用其他制备方法，在同等剂量给药前提下，小鼠对福尔马林诱导的疼痛和炎症作用显著较差。
[0102]
试验2本发明对碘乙酸诱导关节炎疼痛实验的影响
[0103]
动物及分组：
[0104]
110只spf级c57小鼠、雄性、22-24克，随机分为11组，每组10只，模型组小鼠给予溶剂；实施例1低剂量组(50mg/kg)、中剂量组(100mg/kg)、高剂量组(200mg/kg)，实施例2(200mg/kg)、实施例3组(200mg/kg)，阳性组给予非甾体抗炎药精氨酸布洛芬颗粒剂(0.16g/kg)，对比例1-4组(200mg/kg)，样品混合后加入溶剂0.5％cmc，超声1分钟，稀释所要浓度备用。每日灌胃给药一次，共14天。
[0105]
末次给药后30分钟，小鼠麻醉后剔除关节处毛发，微量注射器关节腔内注射碘乙酸(10mg/ml，注射10ul)。对照组注射pbs。分别于碘乙酸注射3天、7天后，足底动态触觉仪检测配方对小鼠疼痛的影响。模型组与实施例1低、中、高剂量组对小鼠足底机械性刺激疼痛的影响见图2-3，其余实施例、阳性组和对比例组的测定值如表2所示。
[0106]
表2配方样品对碘乙酸诱导疼痛的作用
[0107]
[0108][0109]
注：同一列，与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与实施例1高剂量组比较，
#
p＜0.05。
[0110]
结果分析：碘乙酸诱导3天(以伤害性刺激疼痛为主)和7天(以炎性反应诱导的疼痛为主)后，分别使用足底动态触觉仪检测小鼠足底对机械性刺激疼痛的影响。从图2-3和表1可以看出，与模型组相比，本发明不同剂量的配方样品在第3天和第7天均显著提高了小鼠刺激痛阈值。说明对碘乙酸诱导的疼痛和炎症具有治疗作用。
[0111]
由于对比例1和对比例2采用缺味药配方，对比例3采用不合理的配比，对比例4采用其他制备方法，在同等剂量给药前提下，小鼠对碘乙酸诱导的疼痛和炎症作用效果差于本发明。
[0112]
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。