一种包载神经酰胺的纳米载体及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于化妆品原料技术领域，特别涉及一种包载神经酰胺的纳米载体及其制备方法和应用。


背景技术：

2.神经酰胺是又称为神经鞘脂类，是存在于皮肤中一种脂类。神经酰胺作为角质层重要的组分之一，其具有保湿、维持皮肤屏障、抗衰老、抗过敏、诱导细胞凋亡等生理功能。但神经酰胺为高熔点和高结晶性的油溶性物质，将其直接应用于化妆品配方中，存在水溶解度低、透皮吸收性差、以及其稳定性易受周围环境影响等缺点，限制了神经酰胺在化妆品等领域的应用。
3.为了提高神经酰胺的水溶性、透皮吸收效果以及稳定性，多种经皮给药系统被广泛研究，如脂质体、纳米乳、聚合物胶束等。其中，聚合物胶束作为一种新型的药物递送载体，具有诸多优点，得益于其独特的核-壳结构，疏水性的胶束内核可通过疏水-疏水相互作用力，为疏水性药物提供包载场所，对疏水性药物起到增溶和包埋作用；亲水性的胶束外壳可促进胶束水溶性的同时，还作为保护层保持胶束的稳定性。通常，聚合物胶束由单一的聚合物自组装而成，作为疏水性药物载体，聚合物结构中疏水嵌段越长，有利于其自组装胶束对神经酰胺的包载，但疏水嵌段的增加容易造成亲水嵌段比例的下降，进而造成胶束外壳变薄甚至亲水嵌段不足以包埋胶束表面，导致神经酰胺的包封率较低以及胶束的解体。现有技术中的聚合物胶束包载神经酰胺容易导致透皮吸收性差以及稳定性不足的问题。


技术实现要素：

4.为了克服上述现有技术中神经酰胺水溶性差、透皮吸收性差以及稳定性不足的问题，本发明的首要目的在于提供一种包载神经酰胺的纳米载体的制备方法。
5.本发明另一目的在于提供上述方法制备的纳米载体。其中，纳米载体为聚合物混合胶束，聚合物混合胶束包载神经酰胺。
6.本发明再一目的在于提供上述方法制备的纳米载体的应用。
7.本发明提供的包载神经酰胺的纳米载体的制备方法包括以下步骤：
8.(1)把两种不同的两亲性嵌段聚合物溶于多元醇中，加热和搅拌，待所述两亲性嵌段聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液；
9.(2)将神经酰胺溶于多元醇中，加热和搅拌，待所述神经酰胺充分溶解后，获得神经酰胺溶液；
10.(3)将所述神经酰胺溶液加入到所述聚合物溶液中，搅拌，获得混合溶液；
11.(4)搅拌条件下，将所述混合溶液滴入水中，滴加完成后继续搅拌，进行分散处理，获得包载神经酰胺的纳米载体。
12.优选的，所述包载神经酰胺的纳米载体为包载神经酰胺的聚合物混合胶束。
13.可选地，在本发明的一些实施例中，步骤(1)中所述两种不同的两亲性嵌段聚合物
包括聚己内酯-b-聚乙二醇单甲醚(聚合物pcl
x-b-mpegy)、聚乳酸-b-聚乙二醇单甲醚(聚合物pla
x-b-mpegy)、聚(乳酸-共-羟基乙酸)-b-聚乙二醇单甲醚(聚合物p(la
x-co-gay)-b-mpegz)、聚乙二醇单甲醚-b-聚甲基丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯(聚合物mpeg
x-b-pdeaemay)、聚(乳酸-共-羟基乙酸)-b-聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯(聚合物p(la
x-co-gay)-b-ppegmaz)、聚氧乙烯-b-聚氧丙烯-b-聚氧乙烯(聚合物peo
x-b-ppo
y-b-peoz)中的两种。
14.其中，所述x，y，z为聚合物结构中对应的重复单元的聚合度。
15.可选地，在本发明的一些实施例中，所述聚合物pcl
x-b-mpegy的分子量mn＝6000-12000，结构式为：
[0016][0017]
x＝35-61，y＝45-113；
[0018]
所述聚合物pla
x-b-mpegy的分子量mn＝6000-12000，结构式为：
[0019][0020]
x＝28-48，y＝45-113；
[0021]
所述聚合物p(la
x-co-gay)-b-mpegz的分子量mn＝6000-12000，结构式为：
[0022][0023]
x＝42-78，y＝14-26，z＝45-113；
[0024]
所述聚合物mpeg
x-b-pdeaemay的分子量mn＝6000-12000，结构式为：
[0025][0026]
x＝45-113，y＝23-41；
[0027]
所述聚合物p(la
x-co-gay)-b-ppegmaz的分子量mn＝6000-12000，结构式为：
[0028][0029]
x＝42-78，y＝14-26，z＝5-13；
[0030]
所述聚合物peo
x-b-ppo
y-b-peoz的分子量mn＝6000-12000，结构式为：
[0031][0032]
x＝45-113，y＝34-135，z＝45-113。
[0033]
可选地，在本发明的一些实施例中，两种所述两亲性嵌段聚合物在所述纳米载体的质量百分数均相对独立的为0.2％-15％，优选为0.2％～10％。
[0034]
可选地，在本发明的一些实施例中，步骤(1)和步骤(2)中所述多元醇均相对独立的包括丙二醇、异丙醇、双丙甘醇、甘油、丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇中的至少一种。
[0035]
可选地，在本发明的一些实施例中，步骤(1)和步骤(2)中所述多元醇相同。
[0036]
可选地，在本发明的一些实施例中，所述多元醇在所述纳米载体的总质量百分数为10％-50％。
[0037]
可选地，在本发明的一些实施例中，
[0038]
步骤(1)和步骤(2)中所述加热的温度均相对独立地为45-80℃；
[0039]
步骤(1)和步骤(2)中所述搅拌的转速均相对独立地为150-600rpm；
[0040]
步骤(1)和步骤(2)中所述搅拌的搅拌时间均相对独立地为2h-12h。
[0041]
可选地，在本发明的一些实施例中，步骤(2)中所述神经酰胺包括神经酰胺ap、神经酰胺as、神经酰胺e(鲸蜡基-pg羟乙基棕榈酰胺)、神经酰胺np中的至少一种；
[0042]
可选地，在本发明的一些实施例中，步骤(2)中所述神经酰胺在所述纳米载体的质量百分数为0.1％～5％。
[0043]
可选地，在本发明的一些实施例中，
[0044]
步骤(3)中所述搅拌的转速为150-600rpm；步骤(3)中所述搅拌的搅拌时间为2-12h。
[0045]
可选地，在本发明的一些实施例中，
[0046]
步骤(4)中所述搅拌条件下的转速为150-600rpm；所述蠕动泵的滴加速率为20-50rpm；
[0047]
步骤(4)中所述水在所述纳米载体的质量百分数为15％-89.5％；
[0048]
步骤(4)中所述滴加后继续搅拌的转速为150-600rpm；所述滴加后继续搅拌的搅拌时间为4-24h；
[0049]
步骤(4)中所述进行分散处理是指采用高剪切均质乳化机进行剪切均质，高剪切均质乳化机的功率为500-1000w，所述高剪切均质乳化机的转速为5000-8000rpm，所述高剪
切均质乳化机高速剪切分散时间为3-10min。
[0050]
本发明还提供上述包载神经酰胺的纳米载体在化妆品领域中的应用。
[0051]
本发明所述的化妆品可以是柔肤水类、乳液类、膏霜类、面贴膜类、啫喱类、粉类、喷雾类、精华类、洗护类和彩妆类化妆品。
[0052]
所述包载神经酰胺的纳米载体在化妆品中的质量百分比为1％～20％。
[0053]
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：本发明提供了一种包载神经酰胺的纳米载体及其制备方法和应用。本发明提供的纳米载体的制备方法制备得到的纳米载体为聚合物混合胶束。聚合物混合胶束采用两种两亲性嵌段聚合物，在选择性溶剂中通过自组装形成的胶束。聚合物混合胶束将多种不同功能的嵌段整合到同一个胶束体系中。与单一组分聚合物自组装形成的聚合物胶束相比，本发明制备的聚合物混合胶束对神经酰胺具有较高的包封率以及良好的稳定性，可以改善神经酰胺在化妆品领域中存在的水溶解度低、透皮吸收性差以及神经酰胺稳定性易受周围环境影响的问题。此外，本发明提供的包载神经酰胺的纳米载体的制备方法简单，有利于节省工艺流程和降低制作成本，适合用于多种化妆品中。
附图说明
[0054]
图1为实施例1～4和对比例1～4制备的产品在3个月内的粒径变化率。
[0055]
图2为实施例1～4和对比例1～4制备的产品在3个月内包封率变化率。
[0056]
图3为实施例1，5～8制备的产品在3个月内的粒径变化率。
[0057]
图4为实施例1，5～8制备的产品在3个月内包封率变化率。
[0058]
图5为实施例1，9～12制备的产品在3个月内的粒径变化率。
[0059]
图6为实施例1，9～12制备的产品在3个月内包封率变化率。
具体实施方式
[0060]
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未标明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例中所用试剂如无特殊说明均可从市场常规购得。需要说明的是，本技术中提及的质量百分比均为对应的物质在聚合物混合胶束溶液中的质量百分比。
[0061]
在本发明的实施例中，聚己内酯-b-聚乙二醇单甲醚(聚合物pcl
x-b-mpegy)、聚乳酸-b-聚乙二醇单甲醚(聚合物pla
x-b-mpegy)、聚(乳酸-共-羟基乙酸)-b-聚乙二醇单甲醚(聚合物p(la
x-co-gay)-b-mpegz)以及聚氧乙烯-b-聚氧丙烯-b-聚氧乙烯(peo
x-b-ppo
y-b-peoz)均可直接从市场购买得到。
[0062]
聚乙二醇单甲醚-b-聚甲基丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯(mpeg
x-b-pdeaemay)由以下方法制备得到(以制备1mmol的聚乙二醇单甲醚-b-聚甲基丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯为例)：
[0063]
(1)将1.0mmol聚乙二醇单甲醚(mpeg，2.0-5.0g)溶于二氯甲烷(50ml)中，将反应体系冷却至0℃，在惰性气体保护下，缓慢加入4.0mmol 2-溴代异丁酰溴(0.92g)。反应体系在冰水浴中反应2-4h，再在室温下继续反应12-48h。反应结束后，反应混合物分别经稀盐酸
溶液(1.0mol/l)、饱和nahco3溶液和去离子水洗涤，有机相用无水mgso4干燥过夜。取上层清液，旋蒸浓缩。用过量的正己烷溶液沉淀产物，经干燥可得固体产物mpeg-br。
[0064]
(2)将1.0mmol mpeg-br(2.14-5.14g)、甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯(deaema，4.50-8.5g)和0.1mmol n,n,n',n,'n
”‑
五甲基二亚乙基三胺(pmdeta，17mg)溶于四氢呋喃(thf，50ml)中。在惰性气体保护下，往反应体系中迅速加入0.1mmol cubr(15mg)。反应体系保持50-70℃反应12-48h。反应结束后，将反应混合物通过中性氧化铝柱(洗脱液为thf)除去铜盐，洗脱液经旋蒸浓缩后，滴至过量的正己烷中沉淀，收集固体产物经干燥即得mpeg-ppegma。
[0065]
聚(乳酸-共-羟基乙酸)-b-聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯(p(la
x-co-gay)-b-ppegmaz)由以下方法制备得到(以制备1mmol的聚(乳酸-共-羟基乙酸)-b-聚乙二醇单甲醚甲基丙烯酸酯为例)：
[0066]
(1)将1.0mmol 1-丙醇(0.06g)、丙交酯(0.8-1.5g)和乙交酯(3.0-6.0g)依次反应瓶中，加入辛酸亚锡(69mg，质量分数为丙交酯和乙交酯投料总量的1％)。在惰性气体保护下，反应体系保持100-150℃反应5-10h。反应结束后，加入ch2cl2(50ml)溶解粗产品，并滴入过量的正己烷中提纯，固体沉淀经干燥得固体产物p(la-co-ga)。
[0067]
(2)将p(la-co-ga)(3.0-8.0g)溶于ch2cl2(50ml)中，将反应体系冷却至0℃，在惰性气体保护下，加入2-溴代异丁酰溴(0.92g)。反应体系在冰水浴中反应2-4h，再在室温下继续反应12-48h。反应结束后，反应混合物分别经稀盐酸溶液(1.0mol/l)、饱和nahco3溶液和去离子水洗涤，有机相用无水mgso4干燥过夜。取上层清液，旋蒸浓缩。用过量的正己烷溶液沉淀产物，经干燥可得固体产物p(la-co-ga)-br。
[0068]
(3)将p(la-co-ga)-br(3.14-8.1g)、聚乙二醇丙烯酸酯(pegma，2.0-5.5g)和pmdeta(17mg)溶于thf(50ml)中。在惰性气体保护下，往反应体系中迅速加入cubr(15mg)。反应体系保持50-70℃反应12-48h。反应结束后，将反应混合物通过中性氧化铝柱(洗脱液为thf)除去铜盐，洗脱液经旋蒸浓缩后，滴至过量的正己烷中沉淀，收集固体产物经干燥即得p(la-co-ga)-ppegma。
[0069]
需要说明的是，本发明以制备1mmol的两亲性嵌段聚合物为例，在实际制备两亲性嵌段聚合物时，可以依据实际的需求调整上述原料的添加量，本发明中原料的添加量并不以此为限。
[0070]
实施例1
[0071]
将嵌段聚合物pcl
44-b-mpeg
113
(质量百分比为1％，mn＝10000)和p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
(质量百分比为1％，mn＝10000)溶于质量百分数为10％的丁二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h。待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分数为3％的神经酰胺e溶于质量百分数为10％丁二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺e溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为150rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为150rpm)，用蠕动泵(滴加速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分数为75％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(300rpm)12h，随后高速剪切分散5min(转速为8000rpm)，获得包载神经酰胺e的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0072]
实施例2
[0073]
将嵌段聚合物pcl
44-b-mpeg
113
(质量百分数为1％，mn＝10000)和pla
35-b-mpeg
113
(质量百分数为1％，mn＝10000)溶于质量百分数为15％的丙二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分数为5％的神经酰胺e溶于质量百分数为15％丙二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺e溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为150rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为150rpm)，用蠕动泵(滴加速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分数为63％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为300rpm)12h，在高速剪切分散5min(转速为8000rpm)，获得包载神经酰胺e的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0074]
实施例3
[0075]
将嵌段聚合物pcl
62-b-mpeg
113
(质量百分比为1％，mn＝12000)和pla
49-b-mpeg
113
(质量百分比为1％，mn＝12000)溶于质量百分比为25％的丙二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为300rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为5％的神经酰胺e溶于质量百分比为25％的丙二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为300rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺溶液e加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为300rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为300rpm)，用蠕动泵(滴加速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为43％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为450rpm)12h，在高速剪切分散5min(转速为8000rpm)，获得包载神经酰胺e的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0076]
实施例4
[0077]
将嵌段聚合物pcl
35-b-mpeg
45
(1％，mn＝6000)和pla
28-b-mpeg
45
(1％，mn＝6000)溶于质量百分比为15％的丙二醇中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得混合聚合物溶液。再将质量百分比为3％的神经酰胺e溶于质量百分比为15％的丙二醇中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺e溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为150rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为150rpm)，用蠕动泵(滴加速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为65％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为300rpm)12h，在高速剪切分散5min(8000rpm)，获得包载神经酰胺e的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0078]
实施例5
[0079]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1中的质量百分数为3％的神经酰胺e修改为质量百分数为0.1％的神经酰胺e，同时将去离子水用量修改为77.9％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0080]
实施例6
[0081]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1中的质量百分数为3％的神经酰胺e修改为质量百分数为1％的神经酰胺e，同时将去离子水用量修改为77％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0082]
实施例7
[0083]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1中的质
量百分数为3％的神经酰胺e修改为质量百分数为5％的神经酰胺e，同时将去离子水用量修改为73％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0084]
实施例8
[0085]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1中的质量百分数为3％的神经酰胺e修改为质量百分数为7％的神经酰胺e，同时将去离子水用量修改为71％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0086]
实施例9
[0087]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1质量百分比为1％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为1％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
改为质量百分比为0.25％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为0.25％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
，同时将去离子水用量修改为76.5％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0088]
实施例10
[0089]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1质量百分比为1％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为1％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
改为质量百分比为5％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为5％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
，同时将去离子水用量修改为67％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0090]
实施例11
[0091]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1质量百分比为1％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为1％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
改为质量百分比为10％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为10％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
，步骤(1)和(2)质量百分数为10％的丁二醇改为15％的丁二醇，同时将去离子水用量修改为47％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0092]
实施例12
[0093]
重复实施例1制备包载神经酰胺e的纳米载体的步骤，区别在于将实施例1质量百分比为1％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为1％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
改为质量百分比为15％的pcl
44-b-mpeg
113
和质量百分比为15％的p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
，步骤(1)和(2)质量百分数为10％的丁二醇改为20％的丁二醇，同时将去离子水用量修改为27％以使总质量百分比为100％，其余条件不变。
[0094]
实施例13
[0095]
将嵌段聚合物peo
113-b-ppo
34-b-peo
113
(质量百分比为1％，mn＝12000)和p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
(质量百分比为1％，mn＝10000)溶于质量百分比为15％的异丙醇中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为300rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为5％的神经酰胺e溶于质量百分比为15％的异丙醇中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为400rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液(油相b)。将上述神经酰胺e溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为150rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为150rpm)，用蠕动泵(滴加速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为63％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为300rpm)12h，在高速剪切分散10min(转速为5000rpm)，获得包载神经酰胺e的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0096]
实施例14
[0097]
将嵌段聚合物pcl
44-b-mpeg
113
(质量百分比为3％，mn＝10000)和pla
35-b-mpeg
113
(质量百分比为3％，mn＝10000)溶于质量百分比为15％的甘油中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为4％神经酰胺e溶于质量百分比为15％的甘油中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为600rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺e溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为300rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为300rpm)，用蠕动泵(滴入速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为60％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为300rpm)12h，在高速剪切分散10min(转速为5000rpm)，获得包载神经酰胺e的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0098]
实施例15
[0099]
将嵌段聚合物pcl
44-b-mpeg
113
(质量百分比为5％，mn＝10000)和pla
35-b-mpeg
113
(质量百分比为5％，mn＝10000)溶于质量百分比为15％的1,2-己二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为5％的神经酰胺ap溶于质量百分比为15％的1,2-己二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为600rpm)4h，待神经酰胺ap充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺ap溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为600rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为600rpm)，用蠕动泵(滴入速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为55％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为600rpm)12h，在高速剪切分散5min(转速为8000rpm)，获得包载神经酰胺ap的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0100]
实施例16
[0101]
将嵌段聚合物pcl
44-b-mpeg
113
(质量百分比为5％，mn＝10000)和pla
35-b-mpeg
113
(质量百分比为5％，mn＝10000)溶于质量百分比为15％的双丙甘醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为400rpm)6h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为5％的神经酰胺as溶于质量百分比为15％的双丙甘醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为400rpm)6h，待神经酰胺as充分溶解后，获得神经酰胺as溶液。将上述神经酰胺as溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为400rpm)4h，获得的混合溶液。搅拌条件下(转速为400rpm)，用蠕动泵(滴入速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为55％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为400rpm)12h，在高速剪切分散5min(转速为8000rpm)，获得包载神经酰胺as的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0102]
实施例17
[0103]
将嵌段聚合物peo
113-b-ppo
34-b-peo
113
(质量百分比为3％，mn＝12000)和p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
(质量百分比为3％，mn＝10000)溶于质量百分比为15％的1,2-戊二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为500rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为3％的神经酰胺np溶于质量百分比为15％的1,2-戊二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为500rpm)4h，待神经酰胺np充分溶解后，获得神经酰胺np溶液。将上述神经酰胺np溶液加入到混合聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为500rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为500rpm)，用蠕动泵(滴入速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为61％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为500rpm)12h，在高速剪切分散5min(转速为8000rpm)，获得包载神经酰胺np的纳米载体。具体的，纳米载体为聚合物混合胶束。
[0104]
对比例1
[0105]
将聚合物p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
(2％，mn＝10000)溶于质量百分比为10％的丁二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为3％的神经酰胺e溶于质量百分比为10％的丁二醇中，在60℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺e溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为150rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为150rpm)，用蠕动泵(滴入速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为75％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为300rpm)12h，在高速剪切分散5min(转速为8000rpm)，获得包载神经酰胺e的纳米载体。
[0106]
对比例1与实施例1的区别在于，对比例1中仅以p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
为原料制备包载神经酰胺e的纳米载体。
[0107]
对比例2
[0108]
将聚合物pcl
44-b-mpeg
113
(2％，mn＝10000)溶于质量百分比为10％的丁二醇中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待聚合物充分溶解后，获得聚合物溶液。再将质量百分比为5％的神经酰胺e溶于质量百分比为10％的丁二醇中，在45℃下保持磁力搅拌(转速为150rpm)4h，待神经酰胺e充分溶解后，获得神经酰胺e溶液。将上述神经酰胺e溶液加入到聚合物溶液中，磁力搅拌(转速为150rpm)4h，获得混合溶液。搅拌条件下(转速为150rpm)，用蠕动泵(滴入速率为30rpm)将混合溶液匀速滴入质量百分比为73％的去离子水中，滴加完成后继续搅拌(转速为300rpm)12h，高速剪切分散5min，获得包载神经酰胺e的纳米载体。
[0109]
对比例2与实施例1的区别在于，对比例2中仅以pcl
44-b-mpeg
113
为原料制备包载神经酰胺e的纳米载体。
[0110]
对比例3
[0111]
将质量百分比为1％的大豆卵磷脂、0.1％的胆固醇和5％的神经酰胺e溶于质量百分比为30％的乙醇中，在60℃下保持搅拌(转速为150rpm)3h。将上述混合溶液，通过发旋转蒸(40℃、转速为250rpm)除去乙醇溶液。待乙醇被完全除去后，再加入质量百分比为93.9％的去离子水，通过超声(600w)分散处理30min，最后过孔径为0.45μm的有机微孔滤膜，获得包载神经酰胺e的脂质体。
[0112]
对比例3与实施例1的区别在于，对比例3以脂质体包载神经酰胺e。
[0113]
对比例4
[0114]
将质量百分比为5％的神经酰胺e与15％的辛酸/癸酸甘油三酯混合加热至85℃，至神经酰胺e完全溶解，然后再加入质量百分比为10％的丁二醇中，得到油相组分。将质量百分比为70％的去离子水，通过蠕动泵(滴入速率为30rpm)滴入至油相组分中，滴加完成后，以剪切速度为15000rpm高速剪切上述混合液。再通过高压均质(1000bar)循环处理5次，获得包载神经酰胺e的纳米乳。
[0115]
对比例4与实施例1的区别在于，对比例4以纳米乳包载神经酰胺e。
[0116]
将实施例1-12所制备的样品进行粒径表征、包封率表征以及稳定性测试。
[0117]
测试方法：
[0118]
(1)粒径表征：采用马尔文nano zs90粒径电位检测仪表征样品的粒径和粒径分散
系数(pdi)，测试角为90
°
，测试温度为25℃，每组实验均进行三次平行实验，实验结果取其算术平均值。
[0119]
(2)包封率测定：取200μl上述胶束溶液，经低温(4℃)超滤离心(9000rpm，30min)，取5μl滤液经高效液相色谱仪(hplc，日本岛津)测定滤液中神经酰胺的含量，即胶束溶液中未被包裹的游离神经酰胺的含量。另取上述胶束溶液，加入甲醇溶液，按胶束溶液：甲醇＝1:9(v/v)超声破乳30min，滤膜过滤后，取5μl样品溶液经高效液相色谱仪(hplc，日本岛津)测定神经酰胺的含量，即胶束溶液中神经酰胺的总含量。根据公式(1)计算包载神经酰胺的聚合物混合胶束的包封率(ee)。hplc系统所用分析柱为非极性c18柱，流动相为100％甲醇，流速为1.0ml/min，色谱柱柱温为25℃，根据神经酰胺的标准曲线定量检测，每组实验均进行三次平行实验，实验结果取其算术平均值。
[0120][0121]
c1表示胶束溶液中未被包裹的游离神经酰胺的浓度；c0表示胶束体系经甲醇超声破乳后，体系中神经酰胺的总浓度。
[0122]
(3)将样品分别在室温下静置一个月、两个月及三个月后，分别测定其粒径和包封率。
[0123]
表1实施例1-12、对比例1和对比例2样品的粒径和包封率
[0124]
样品粒径(nm)pdi包封率(％)实施例172.8(
±
1.1)0.25380.3(
±
1.1)实施例291.5(
±
0.8)0.26186.5(
±
0.8)实施例3102.7(
±
1.5)0.27473.9(
±
0.6)实施例486.4(
±
1.2)0.22672.1(
±
1.4)实施例575.4(
±
0.8)0.25383.6(
±
1.2)实施例683.2(
±
1.4)0.23778.2(
±
1.1)实施例793.1(
±
0.7)0.24273.6(
±
0.9)实施例892.5(
±
1.2)0.31253.3(
±
1.0)实施例970.5(
±
0.8)0.29172.7(
±
1.2)实施例1095.2(
±
1.3)0.27482.0(
±
1.4)实施例11101.6(
±
0.9)0.27575.3(
±
1.2)实施例12126.8(
±
0.6)0.24680.5(
±
0.8)对比例1120.5(
±
2.2)0.34563.2(
±
2.5)对比例2114.7(
±
1.9)0.28855.5(
±
1.2)对比例3135.3(
±
1.7)0.30253.5(
±
1.4)对比例4158.4(
±
0.8)0.28451.8(
±
1.0)
[0125]
表2实施例1-12、对比例1和对比例2样品的稳定性测试结果
[0126]
[0127]
[0128][0129]
实施例1-12、对比例1和对比例2样品的粒径和包封率结果如表1所示。实施例1-12、对比例1和对比例2样品的粒径和稳定性测试的结果如表2所示。
[0130]
将实施例1-4和对比例1、2的聚合物胶束、对比例3的脂质体、对比例4的纳米乳进行分析。实施例1-4中的混合聚合物胶束对神经酰胺的包封率分别为80.3％、86.5％、73.9％和72.1％，对比例3的脂质体的包封率为53.5％，对比例4的纳米乳的包封率为
51.8％，而单一聚合物胶束p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
(对比例1)或pcl
44-b-mpeg
113
(对比例2)对神经酰胺的包封率则分别为63.2％和55.5％，且实施例1的聚合物选自p(la
54-co-ga
18
)-b-ppegma
13
和pcl
44-b-mpeg
113
，说明相较于脂质体、纳米乳和单一聚合物胶束，混合聚合物胶束对神经酰胺具有更好的包裹效果，更有利于提高神经酰胺的稳定性。此外，实施例1-4的样品的粒径分别为72.8nm、91.5nm、102.7nm和86.4nm，而对比例1-4的样品的粒径分别为120.5nm、114.7nm、135.3nm、158.4nm，实施例1-4中样品的粒径均小于对比例1-4，说明混合聚合物更有利于制备出粒径更小的胶束。纳米载体的粒径越小，越容易发挥纳米载体的透皮吸收性能。因此实施例1-4的混合聚合物胶束比对比例1-4中的单一聚合物胶束、脂质体和纳米乳表现出更优异的透皮吸收性能。其中，实施例1、实施例2和实施例4样品的粒径均小于100nm。一般地，当纳米载体的粒径小于100nm时，纳米载体的透皮吸收性能更加优异。由此可见，实施例1、实施例2和实施例4样品的粒径与实施例3的样品的粒径相比，更有利于该样品的透皮吸收。
[0131]
其中，实施例1-4的样品在3个月内的粒径变化率分别为4.26％、1.86％、5.84％和6.83％(计算方法为：实施例中第3个月的样品粒径减去第0个月的样品粒径得到样品粒径差值，再将样品粒径差值除以第0个月的样品粒径从而得到粒径变化率)。对比例1和2的样品在3个月内的粒径变化率分别为16.93％和26.59％)。实施例1-4的包封率变化率分别为9.09％、2.20％、11.3％和12.21％(计算方法为：实施例中第3个月的包封率减去第0个月的包封率得到包封率差值，再将包封率差值除以第0个月的包封率从而得到包封率变化率)。对比例1-4的样品的包封率变化率分别为25.47％、25.77％、19.25％和18.15％。如图1和图2所示，实施例1-4在3个月内的粒径变化率以及包封率变化率的绝对值均小于对比例1和2在3个月内的粒径变化率以及包封率变化率的绝对值。实施例1-4的样品的稳定性明显优于对比例1-4。相比单一聚合物胶束、脂质体和纳米乳，混合聚合物胶束包裹神经酰胺的样品具有更优的稳定性。
[0132]
将实施例1、5-8的聚合物混合胶束进行分析。实施例1，5-8的聚合物混合胶束的区别在于包载的神经酰胺的量不同，实施例5、6、1、7、8包载神经酰胺的量分别为0.1％、1％、3％、5％和7％。但实施例5、6、1、7、8的聚合物混合胶束的包封率分别为83.6％、78.2％、80.3％、73.6％和53.3％。实施例8的聚合物混合胶束的包封率低于实施例1和5-7。如图3和4所示，实施例1，5-7的聚合物混合胶束在3个月内的粒径变化率以及包封率变化率的绝对值均小于实施例8的聚合物混胶束的粒径变化率以及包封率变化率的绝对值，说明神经酰胺的用量影响聚合物混合胶束的包封率和稳定性。当神经酰胺的添加量超过5％时，聚合物混合胶束对神经酰胺的包封率较低，且在防止一段时间后，聚合物混合胶束发生团聚，粒径变大，聚合物混合胶束的稳定性受到影响。
[0133]
将实施例1、9-12的聚合物混合胶束进行分析。实施例1，9-12的聚合物混合胶束的区别在于两亲性嵌段聚合物的投入量和使用的多元醇的量不同。实施例9、1、10、11、12两亲性嵌段聚合物的投入量分别为0.5％、2％、10％、20％和30％。但实施例11和12丁二醇的用量要多于1、9和10，这说明了两亲性嵌段聚合物加入较多时，需要用更多的醇对两亲性嵌段聚合物进行溶解。从图5和图6中可以看出，聚合物加入地越多，聚合物混合胶束的的粒径就会变得越大，在放置3个月内，聚合物混合胶束的粒径还在变大，说明聚合物加入得越多，体系更容易团聚成颗粒，聚合物混合胶束的包封率也呈现下降趋势。当两亲性嵌段聚合物的
投入量达到30％时，聚合物混合胶束的包封率出现急剧下降。
[0134]
本发明提供一种包载神经酰胺的纳米载体及其制备方法，本发明采用两种两亲性嵌段聚合物，在选择性溶剂中通过自组装形成的胶束。聚合物混合胶束将多种不同功能的嵌段整合到同一个胶束体系中。与单一组分聚合物自组装形成的聚合物胶束相比，本发明制备得到的纳米载体具有更小的粒径、对神经酰胺具有较高的包封率以及良好的稳定性，提高了神经酰胺的水溶解度、透皮吸收性以及稳定性。与此同时，本发明提供的包载神经酰胺的纳米载体的制备方法简单，有利于节省工艺流程和降低制作成本，适合用于多种化妆品中。
[0135]
本发明还提供一种包载神经酰胺的纳米载体。本发明提供的包载神经酰胺的纳米载体采用如前所述的制备方法制备得到。
[0136]
本发明提供的包载神经酰胺的纳米载体采用两种两亲性嵌段聚合物的，在选择性溶剂中通过自组装形成的胶束。聚合物混合胶束将多种不同功能的嵌段整合到同一个胶束体系中。本发明制备的包载神经酰胺的纳米载体具体为包载神经酰胺的聚合物混合胶束。与单一组分聚合物自组装形成的聚合物胶束相比，本发明制备的聚合物混合胶束对神经酰胺具有较高的包封率以及良好的稳定性，提高了神经酰胺的水溶解度、透皮吸收性以及稳定性。
[0137]
本发明还提供上述包载神经酰胺的纳米载体在化妆品领域中的应用。本发明所述的化妆品可以是柔肤水类、乳液类、膏霜类、面贴膜类、啫喱类、粉类、喷雾类、精华类、洗护类和彩妆类化妆品。
[0138]
其中，包载神经酰胺的纳米载体在化妆品中的添加量为1％～20％。上述添加量为安全添加量。包载神经酰胺的纳米载体在化妆品中的添加量小于1％时，包载神经酰胺的纳米载体无法发挥功效。当包载神经酰胺的纳米载体在化妆品中的添加量大于20％时，包载神经酰胺的纳米载体的添加量过大，容易引起皮肤问题。
[0139]
以上对本发明提供的一种包载神经酰胺的纳米载体的制备方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本技术的实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本技术的方法及其核心思想；同时，对于本领域的技术人员，依据本技术的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本技术的限制。