一种含有溶菌酶的面膜的制作方法

200重量份去离子水。
13.更优选的，所述面膜液包含0.5重量份果蔬酵素、0.5重量份溶菌酶、6重量份透明质酸钠、3重量份甘油、6重量份丙二醇、0.01重量份尼泊金甲酯和150重量份去离子水。
14.优选的，所述果蔬酵素的制备方法包括如下步骤：
15.(1)将酵母加入到葡萄糖溶液中，保温活化得到酵母活化液；
16.(2)取清洗干净的果蔬，加入酵母活化液，保温发酵24小时；
17.(3)将果蔬发酵液离心后喷雾干燥得果蔬酵素粉。
18.优选的，所述步骤(1)中葡萄糖溶液的浓度为0.02g/ml。
19.优选的，所述步骤(1)中酵母与葡萄糖溶液的重量体积比为1g：200ml。
20.优选的，所述步骤(1)中保温的温度为35℃。
21.优选的，所述步骤(2)中果蔬与酵母活化液的重量体积比为1kg：45ml。
22.优选的，所述步骤(2)中保温的温度为30℃。
23.优选的，所述果蔬酵素的制备方法包括如下步骤：
24.(1)将0.5g安琪活性酵母加入到100ml 0.02g/ml葡萄糖溶液中，35℃保温活化20min得到酵母活化液；
25.(2)取清洗干净的果蔬1kg，加入酵母活化液45ml，30℃保温发酵24小时；
26.(3)将果蔬发酵液离心后喷雾干燥得果蔬酵素粉。
27.本发明的第二方面提供上述果蔬酵素面膜的制备方法，其包括如下步骤：
28.(1)将酵母加入到葡萄糖溶液中，保温活化得到酵母活化液；
29.(2)取清洗干净的果蔬，加入酵母活化液，保温发酵24小时；
30.(3)将果蔬发酵液离心后喷雾干燥得果蔬酵素粉；
31.(4)取果蔬酵素粉，与任选的溶菌酶混合，再与透明质酸钠、甘油、丙二醇、尼泊金甲酯和去离子水混合均匀制得面膜液；
32.(5)将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得；
33.所述果蔬酵素粉选自桑葚酵素、猕猴桃酵素和枸杞酵素中的一种或多种。
34.优选的，所述步骤(1)中葡萄糖溶液的浓度为0.02g/ml。
35.优选的，所述步骤(1)中酵母与葡萄糖溶液的重量体积比为1g：200ml。
36.优选的，所述步骤(1)中保温的温度为35℃。
37.优选的，所述步骤(2)中果蔬与酵母活化液的重量体积比为1kg：45ml。
38.优选的，所述步骤(2)中保温的温度为30℃。
39.优选的，所述步骤(4)中取1g果蔬酵素粉，与6g透明质酸钠、3g甘油、6g丙二醇、0.01g尼泊金甲酯和150g去离子水混合均匀制得面膜液。
40.优选的，所述步骤(4)中取0.5g果蔬酵素粉，与0.5g溶菌酶混合，再与6g透明质酸钠、3g甘油、6g丙二醇、0.01g尼泊金甲酯和150g去离子水混合均匀制得面膜液。
41.优选的，所述制备方法包括如下步骤：
42.(1)将0.5g安琪活性酵母加入到100ml 0.02g/ml葡萄糖溶液中，35℃保温活化20min得到酵母活化液；
43.(2)取清洗干净的果蔬1kg，加入酵母活化液45ml，30℃保温发酵24小时；
44.(3)将果蔬发酵液离心后喷雾干燥得果蔬酵素粉；
45.(4)取1g果蔬酵素粉，与6g透明质酸钠、3g甘油、6g丙二醇、0.01g尼泊金甲酯和150g去离子水混合均匀制得面膜液；
46.(5)将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得。
47.优选的，所述制备方法包括如下步骤：
48.(1)将0.5g安琪活性酵母加入到100ml 0.02g/ml葡萄糖溶液中，35℃保温活化20min得到酵母活化液；
49.(2)取清洗干净的果蔬1kg，加入酵母活化液45ml，30℃保温发酵24小时；
50.(3)将果蔬发酵液离心后喷雾干燥得果蔬酵素粉；
51.(4)取0.5g果蔬酵素粉，与0.5g溶菌酶混合，再与6g透明质酸钠、3g甘油、6g丙二醇、0.01g尼泊金甲酯和150g去离子水混合均匀制得面膜液；
52.(5)将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得。
53.本发明的第三方面提供上述果蔬酵素面膜在制备具有抗氧化功效的化妆品中的应用。
54.优选的，所述抗氧化功效体现为具有dpph自由基清除和/或羟基自由基清除作用。
55.本发明的第四方面提供上述果蔬酵素面膜在制备治疗痤疮的化妆品中的应用。
56.本发明具有积极有益的效果：
57.令人惊奇的是，经过反复多次试验，本发明意外发现将多种果蔬酵素组合使用在抗氧化方面具有协同增效效果，且溶菌酶与果蔬酵素组合使用对于治疗痤疮具有协同增效的效果。此外，本发明面膜的活性成分选自天然的溶菌酶和果蔬酵素，安全性好，适于工业化生产。
具体实施方式
58.下面结合实施例对本发明作更进一步的说明，但本发明的实施方式不限于此。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。实施例和试验例中使用的溶菌酶均为提取自鸡蛋清中的溶菌酶。
59.实施例1、含桑葚酵素的面膜m1
60.将0.5g安琪活性酵母加入到100ml 0.02g/ml的葡萄糖溶液，35℃水浴活化20min。取清洗干净的桑葚1kg，加入45ml酵母活化液于30℃水浴锅中发酵24小时。将发酵液离心后喷雾干燥得桑葚酵素粉，取桑葚酵素粉1g，与透明质酸钠6g、甘油3g、丙二醇6g、尼泊金甲酯0.01g和去离子水150g混合均匀制得面膜液，将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得本发明含桑葚酵素的面膜m1。
61.实施例2、含猕猴桃酵素的面膜m2
62.将0.5g安琪活性酵母加入到100ml 0.02g/ml的葡萄糖溶液，35℃水浴活化20min。取清洗干净、去皮的猕猴桃1kg，加入45ml酵母活化液于30℃水浴锅中发酵24小时。将发酵液离心后喷雾干燥得猕猴桃酵素粉，取猕猴桃酵素粉1g，与透明质酸钠6g、甘油3g、丙二醇6g、尼泊金甲酯0.01g和去离子水150g混合均匀制得面膜液，将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得本发明含猕猴桃酵素的面膜m2。
63.实施例3、含枸杞酵素的面膜m3
64.将0.5g安琪活性酵母加入到100ml 0.02g/ml的葡萄糖溶液，35℃水浴活化20min。
取清洗干净的枸杞1kg，加入45ml酵母活化液于30℃水浴锅中发酵24小时。将发酵液离心后喷雾干燥得枸杞酵素粉，取枸杞酵素粉1g，与透明质酸钠6g、甘油3g、丙二醇6g、尼泊金甲酯0.01g和去离子水150g混合均匀制得面膜液，将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得本发明含枸杞酵素的面膜m3。
65.实施例4、含桑葚酵素和猕猴桃酵素的面膜m4
66.分别取实施例1和2制备得到的桑葚酵素粉和猕猴桃酵素粉各0.5g，与透明质酸钠6g、甘油3g、丙二醇6g、尼泊金甲酯0.01g和去离子水150g混合均匀制得面膜液，将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得本发明含桑葚酵素和猕猴桃酵素的面膜m4。
67.实施例5、含桑葚酵素和枸杞酵素的面膜m5
68.分别取实施例1和3制备得到的桑葚酵素粉和枸杞酵素粉各0.5g，与透明质酸钠6g、甘油3g、丙二醇6g、尼泊金甲酯0.01g和去离子水150g混合均匀制得面膜液，将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得本发明含桑葚酵素和枸杞酵素的面膜m5。
69.实施例6、含猕猴桃酵素和枸杞酵素的面膜m6
70.分别取实施例2和3制备得到的猕猴桃酵素粉和枸杞酵素粉各0.5g，与透明质酸钠6g、甘油3g、丙二醇6g、尼泊金甲酯0.01g和去离子水150g混合均匀制得面膜液，将面膜基质浸入经灭菌操作后的面膜液中，包装，即得本发明含猕猴桃酵素和枸杞酵素的面膜m6。
71.实施例7-12、含溶菌酶和果蔬酵素的面膜m7-m12
72.分别将实施例1-3中1g果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素)粉替换成0.5g果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素)粉和0.5g溶菌酶，将实施例4-6中1g混合果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素)粉替换成0.5g混合果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素，两种果蔬酵素的重量比仍为1:1)粉和0.5g溶菌酶，其余步骤和方法同实施例1-6，即得本发明含溶菌酶和果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素)的面膜m7-m12。
73.试验例1、果蔬发酵液dpph自由基清除能力试验
74.1、试验方法
75.分别称取实施例1-6制备得到的果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素)粉0.1g，加入10ml蒸馏水配制成果蔬酵素待测液。各试验组分别取2ml待测液加入2ml的2
×
10-4
mol/l的dpph(50％)乙醇溶液混匀避光放置30min，在波长为517nm处测吸光度记为a，按照下述公式计算dpph的清除率％：
76.dpph的清除率％＝(1-(a
1-a2)/a3)*100％，
77.式中：a1为待测液的吸光度；a2为乙醇溶液替换dpph溶液的吸光度；a3为乙醇溶液替换样液的吸光度。
78.2、试验结果
79.本发明各试验组的果蔬酵素的dpph自由基清除率结果如下表1所示。
80.表1本发明果蔬酵素的dpph自由基清除能力
81.试验组dpph清除率(％)实施例170.05％实施例272.88％实施例374.56％实施例490.27％
实施例577.36％实施例674.41％
82.由表1试验结果可知，实施例1-6的果蔬酵素均具有优异的dpph清除率，预示着其作为面膜活性成分具有显著的抗氧化效果。其中实施例4果蔬酵素的dpph清除率最高，产生了难以预期的优异抗氧化效果。
83.试验例2、本发明果蔬酵素的羟基自由基清除能力试验
84.1、试验方法
85.分别称取实施例1-6制备得到的果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素)粉0.1g，加入10ml蒸馏水配制成果蔬酵素待测液。取2ml待测液加2ml 6mmol/l的feso4溶液和2ml6mmol/l的h2o2溶液混匀静置10min，再加入2ml 6mmol/l的水杨酸溶液，混匀置于37℃水浴锅中30min后，于3000r/min离心10min，取上清液于波长510nm处测吸光度，记为a1；将蒸馏水代替水杨酸反应的吸光度值记作a2；将蒸馏水代替待测样反应的吸光度值记作a3，按照下述公式计算羟基的清除率％：
86.羟基的清除率％＝[(a
1-a2)/(a
3-a2)]*100％，
[0087]
式中：a1为待测液的吸光度；a2为蒸馏水代替水杨酸反应的吸光度；a3为蒸馏水代替待测样反应的吸光度。
[0088]
2、试验结果
[0089]
本发明各试验组果蔬酵素的羟基自由基清除率结果如下表2所示。
[0090]
表2本发明果蔬酵素的羟基自由基清除能力
[0091]
试验组羟基自由基清除率(％)实施例167.55％实施例269.26％实施例372.08％实施例485.36％实施例574.17％实施例671.82％
[0092]
由表2试验结果可知，实施例1-6的果蔬酵素均具有优异的羟基自由基清除率，预示着其作为面膜活性成分具有显著的抗氧化效果。其中实施例4果蔬酵素的羟基自由基清除率最高，产生了难以预期的优异抗氧化效果。
[0093]
试验例3、本发明溶菌酶和果蔬酵素组合物对痤疮治疗效果评估
[0094]
1、试验方法
[0095]
分别称取实施例7-12制备得到的溶菌酶和果蔬酵素(桑葚/猕猴桃/枸杞酵素)粉混合物0.1g(其中各溶菌酶和果蔬酵素粉各0.05g)，加入10ml蒸馏水配制成溶菌酶和果蔬酵素混合液7-12。
[0096]
选取80只健康小鼠，随机分为对照组、模型组和本发明实施例7-12组，每组10只。其中，对照组在小鼠双侧内耳郭中央皮内注射pbs溶液20μl，模型组在小鼠双侧内耳郭中央皮内注射p.acnes混悬液20μl；本发明实施例7-12组的建模方法与模型组相同，建模5天后各实施例组在小鼠耳郭处涂抹溶菌酶和果蔬酵素混合液7-12，每天1次，每次0.1ml，连续给药21天，在末次给药24小时后处死小鼠，收集小鼠血清，采用elisa法，根据试剂盒说明测定
小鼠血清中il-1β和tnf-ɑ
的水平。
[0097]
2、试验结果
[0098]
使用本发明各试验组给予溶菌酶和果蔬酵素混合物后小鼠血清中il-1β和tnf-ɑ
含量如下表3所示。
[0099]
表3本发明各试验组对小鼠血清中il-1β和tnf-ɑ
水平影响
[0100][0101][0102]
痤疮炎症的产生与痤疮丙酸杆菌(p.acnes)诱发痤疮免疫应答并释放白细胞介素(il-1β)、肿瘤坏死因子(tnf-α)等炎症因子有关，这些炎症因子含量的高低直接反应了痤疮炎症的严重程度。
[0103]
从上表3可知，与模型组小鼠相比，本发明实施例7-12组均可不同程度降低小鼠血清中il-1β和tnf-ɑ
水平，差异具有统计学意义(p《0.05)，说明本发明面膜中的有效成分(溶菌酶和果蔬酵素混合物)具有明确的抗炎作用，因此本发明的面膜预期临床具有显著的治疗痤疮的技术效果。