一种抗菌肽水凝胶搽剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及一种以抗菌肽为主要成分的搽剂，具体是一种抗菌肽水凝胶搽剂及其制备方法及应用，属于兽用搽剂领域。


背景技术：

2.随着牛奶品质的提升，牛奶中细菌指数要求越来越低，目前牧场基本是2-5万，但是随着低温奶的生产，对鲜牛乳细菌指数要求更高，为了保证低温奶的货架期，细菌指数要求在万级以下，由于乳房的乳头管是开放的，细菌便可经乳头管上行而栖生于乳池的下部，有的则停留在乳头管内，因此，挤出的头几把奶含菌量很多，比最后挤出的奶要高约30倍，所以控制奶品中的细菌数的有效办法就是让奶头周围维持在一个抑菌状态。
3.目前鲜有用于解决此类问题的药物或者制剂上市，即使有，也是一些含有抗生素或者消毒杀菌剂的喷剂，搽剂或者药膏，然而使用这些产品会在挤奶时，对奶产品造成二次污染，严重引起奶制品质量。
4.前期的研究结果表明，抗菌肽水凝胶搽剂能有效抑制奶牛奶头周围各种微生物的生长，且搽剂中的冰片和没药等成分对奶牛乳头部位易发的红肿等炎症症状有潜在的缓解作用(这些成分的抗炎镇痛作用已经早被证实)，抗菌肽作为一种成本低廉且抗菌谱广的的化合物，使用它抑制奶牛乳头部位细菌的生长是一种新颖的技术。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种抗菌肽水凝胶搽剂，该抗菌肽水凝胶搽剂中的抗菌肽成分能有效有效抑制奶牛奶头周围各种微生物的生长，且搽剂中的冰片和没药等成分对奶牛乳头部位易发的红肿等炎症症状有潜在的缓解作用。
6.本发明的技术方案如下：一种抗菌肽水凝胶搽剂，其组成为：抗菌肽0.2％-1％，壳聚糖0.2％-1％，冰醋酸0.2％-1％，戊二醛0.2％-1％，冰片0.5％，没药0.1％-0.8％，二甲基亚砜0.2-1％，注射用水加至100％质量配比。
7.本发明所述的抗菌肽水凝胶搽剂，其制备方法包括如下步骤：
8.(1)冰醋酸溶液的制备：称取适量冰醋酸加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
9.(2)戊二醛溶液的制备：称取适量戊二醛加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
10.(3)壳聚糖水凝胶的制备：按照1:40:16(m:v:v)的配比，将壳聚糖，以及(1)和(2)所配制的溶液混合，不断搅拌，并维持于50℃的温度下直至成为黄色透明水凝胶，室温放置48小时后既得壳聚糖水凝胶。
11.(4)抗菌肽水溶液的制备：将抗菌肽加入注射用水中，搅拌溶解。
12.(5)没药水溶液的制备：将没药加入注射用水中，加热至100℃，直至全部溶解于开水中，冷却即得。
13.(6)冰片水溶液的制备：将冰片溶解于注射用水中，搅拌均匀即得。
14.(7)水凝胶的混合：将(1)-(6)制备的溶液混合搅拌均匀，超声去除气泡即得。
15.本发明的抗菌肽水凝胶搽剂主要是应用于奶牛乳头周围的抑菌维护。本发明的发明人团队前期针对抗菌肽水凝胶搽剂对奶牛乳头周围常见细菌的抑制作用开展了相关的研究。结果表明：抗菌肽搽剂能有效抑制奶牛乳头周围常见细菌的生长，且抑制作用能维持72小时，实验过程如下：
16.1 实验材料
17.1.1 动物
18.成年奶牛9只，5年龄，合肥市蜀山区瑞杨奶牛场提供，饲养于温度22～24℃、湿度40％～60％的开放环境，饲养期间动物自由摄食饮水，照明条件为12小时明/12小时暗。
19.1.2试剂
20.1％抗菌肽搽剂(实验室自制)；2％兽用碘酒(山东风舞动物药业有限公司)；
21.1.3主要仪器
22.细菌培养箱(河南沃林设备有限公司)；霉菌培养箱(上海一恒bpmj-150f)；
23.2 实验方法
24.2.1 分组和涂药
25.将动物随机分为空白组(c)，治疗组(t)，阳性药物组(p)，共3组，每组3只动物。空白组动物奶头涂抹空白搽剂基制；治疗组涂抹抗菌肽搽剂；阳性药物组涂2％兽用碘酒；，每只奶牛四只乳头均涂，并标记为6，12，24和72小时，涂抹后，各个奶头均套上自制奶头套。
26.2.2采样和微生物检测于涂抹药后，6，12，24和72小时各个时间点，取下奶头套，并使用无菌棉签采集乳头套内残留药物，使用专用细菌或霉菌菌落总数贴片检测样品中细菌或霉菌菌落总数。
27.3统计学方法
28.采用spss17.0统计软件进行分析。计量资料以x
±
s表示，组间比较用方差分析。p《0.05表示差异有统计学意义。
29.4 结果
30.4.1 细菌菌落总数
31.涂抹药物后，和空白组相比，治疗组和阳性组在各个时间点的细菌菌落总数均显著性下降，且具有统计学意义(p《0.05)。见表1。
32.4.2霉菌菌落总数
33.涂抹药物后，和空白组相比，治疗组和阳性组在各个时间点的霉菌菌落总数均显著性下降，且具有统计学意义(p《0.05)。见表2。
34.本发明涉及的搽剂是基于上述实验进行开发，相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：
35.1、本发明选用抗菌肽作为主要成分，成本低廉，毒性小，能有效抑制细菌生长，具有替代常规消毒剂或者抗生素的潜力。
36.2、本发明的搽剂中含有冰片和没药(无须再实验证明)，这两种成分使得该搽剂还具有消除奶牛乳头炎症症状的潜力。
37.表1细菌菌落总数
[0038][0039]
注:**表示与空白组比，p《0.05；
[0040]
表2霉菌菌落总数
[0041][0042]
注:**表示与空白组比，p《0.05；
具体实施方式
[0043]
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
[0044]
实施例1采用如下配比的组分制备本发明的抗菌肽水凝胶搽剂：抗菌肽0.2％，壳聚糖0.2％-1％，冰醋酸0.2％-1％，戊二醛0.2％-1％，冰片0.5％，没药0.1％-0.8％，二甲基亚砜0.2-1％，注射用水加至100％质量配比；
[0045]
(1)冰醋酸溶液的制备：称取适量冰醋酸加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0046]
(2)戊二醛溶液的制备：称取适量戊二醛加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0047]
(3)壳聚糖水凝胶的制备：按照1:40:16(m:v:v)的配比，将壳聚糖，以及(1)和(2)所配制的溶液混合，不断搅拌，并维持于50℃的温度下直至成为黄色透明水凝胶，室温放置48小时后既得壳聚糖水凝胶。
[0048]
(4)抗菌肽水溶液的制备：将抗菌肽加入注射用水中，搅拌溶解。
[0049]
(5)没药水溶液的制备：将没药加入注射用水中，加热至100℃，直至全部溶解于开水中，冷却即得。
[0050]
(6)冰片水溶液的制备：将冰片溶解于注射用水中，搅拌均匀即得。
[0051]
(7)水凝胶的混合：将(1)-(6)制备的溶液混合搅拌均匀，超声去除气泡即得。
[0052]
实施例2采用如下配比的组分制备本发明的抗菌肽水凝胶搽剂：抗菌肽0.2％-1％，壳聚糖0.2％-1％，冰醋酸0.2％-1％，戊二醛0.2％-1％，冰片0.5％，没药0.1％-0.8％，二甲基亚砜0.2-1％，注射用水加至100％质量配比；
[0053]
(1)冰醋酸溶液的制备：称取适量冰醋酸加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0054]
(2)戊二醛溶液的制备：称取适量戊二醛加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0055]
(3)壳聚糖水凝胶的制备：按照1:40:16(m:v:v)的配比，将壳聚糖，以及(1)和(2)所配制的溶液混合，不断搅拌，并维持于50℃的温度下直至成为黄色透明水凝胶，室温放置48小时后既得壳聚糖水凝胶。
[0056]
(4)抗菌肽水溶液的制备：将抗菌肽加入注射用水中，搅拌溶解。
[0057]
(5)没药水溶液的制备：将没药加入注射用水中，加热至100℃，直至全部溶解于开水中，冷却即得。
[0058]
(6)冰片水溶液的制备：将冰片溶解于注射用水中，搅拌均匀即得。
[0059]
(7)水凝胶的混合：将(1)-(6)制备的溶液混合搅拌均匀，超声去除气泡即得。
[0060]
实施例3采用如下配比的组分制备本发明的抗菌肽水凝胶搽剂：抗菌肽0.2％-1％，壳聚糖0.2％-1％，冰醋酸0.2％-1％，戊二醛0.2％-1％，冰片0.5％，没药0.1％-0.8％，二甲基亚砜0.2-1％，注射用水加至100％质量配比；
[0061]
(1)冰醋酸溶液的制备：称取适量冰醋酸加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0062]
(2)戊二醛溶液的制备：称取适量戊二醛加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0063]
(3)壳聚糖水凝胶的制备：按照1:40:16(m:v:v)的配比，将壳聚糖，以及(1)和(2)所配制的溶液混合，不断搅拌，并维持于50℃的温度下直至成为黄色透明水凝胶，室温放置48小时后既得壳聚糖水凝胶。
[0064]
(4)抗菌肽水溶液的制备：将抗菌肽加入注射用水中，搅拌溶解。
[0065]
(5)没药水溶液的制备：将没药加入注射用水中，加热至100℃，直至全部溶解于开水中，冷却即得。
[0066]
(6)冰片水溶液的制备：将冰片溶解于注射用水中，搅拌均匀即得。
[0067]
(7)水凝胶的混合：将(1)-(6)制备的溶液混合搅拌均匀，超声去除气泡即得。
[0068]
实施例4采用如下配比的组分制备本发明的抗菌肽水凝胶搽剂：抗菌肽0.2％-1％，壳聚糖0.2％-1％，冰醋酸0.2％-1％，戊二醛0.2％-1％，冰片0.5％，没药0.1％-0.8％，二甲基亚砜0.2-1％，注射用水加至100％质量配比；
[0069]
(1)冰醋酸溶液的制备：称取适量冰醋酸加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0070]
(2)戊二醛溶液的制备：称取适量戊二醛加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0071]
(3)壳聚糖水凝胶的制备：按照1:40:16(m:v:v)的配比，将壳聚糖，以及(1)和(2)
所配制的溶液混合，不断搅拌，并维持于50℃的温度下直至成为黄色透明水凝胶，室温放置48小时后既得壳聚糖水凝胶。
[0072]
(4)抗菌肽水溶液的制备：将抗菌肽加入注射用水中，搅拌溶解。
[0073]
(5)没药水溶液的制备：将没药加入注射用水中，加热至100℃，直至全部溶解于开水中，冷却即得。
[0074]
(6)冰片水溶液的制备：将冰片溶解于注射用水中，搅拌均匀即得。
[0075]
(7)水凝胶的混合：将(1)-(6)制备的溶液混合搅拌均匀，超声去除气泡即得。
[0076]
实施例5采用如下配比的组分制备本发明的抗菌肽水凝胶搽剂：抗菌肽0.5％，壳聚糖1％，冰醋酸0.2％-1％，戊二醛0.2％-1％，冰片0.5％，没药0.1％-0.8％，二甲基亚砜0.2-1％，注射用水加至100％质量配比；
[0077]
(1)冰醋酸溶液的制备：称取适量冰醋酸加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0078]
(2)戊二醛溶液的制备：称取适量戊二醛加入注射用水中充分搅拌混匀，制成浓度为2％的溶液；
[0079]
(3)壳聚糖水凝胶的制备：按照1:40:16(m:v:v)的配比，将壳聚糖，以及(1)和(2)所配制的溶液混合，不断搅拌，并维持于50℃的温度下直至成为黄色透明水凝胶，室温放置48小时后既得壳聚糖水凝胶。
[0080]
(4)抗菌肽水溶液的制备：将抗菌肽加入注射用水中，搅拌溶解。
[0081]
(5)没药水溶液的制备：将没药加入注射用水中，加热至100℃，直至全部溶解于开水中，冷却即得。
[0082]
(6)冰片水溶液的制备：将冰片溶解于注射用水中，搅拌均匀即得。
[0083]
(7)水凝胶的混合：将(1)-(6)制备的溶液混合搅拌均匀，超声去除气泡即得。