原花青素在制备促进中枢神经炎性脱髓鞘再生药物中的应用

本技术属于医药，涉及原花青素的一种新用途，特别是原花青素在制备促进中枢神经炎性脱髓鞘再生药物中的应用。

背景技术：

1、中枢神经炎性脱髓鞘疾病是一类以炎性反应和广泛原发性髓鞘脱失为主要特征的疾病。其中复发-缓解型的多发性硬化(multiple sclerosis，ms)、视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders，nmosd)是最常见的脱髓鞘疾病，病程通常表现为复发-缓解交替进行，多次发作造成神经功能不可逆的损伤，是中青年非创伤性致残的主要原因之一。长期以来，减少髓鞘的炎性免疫损伤是治疗的重要靶点，但尚未取得理想的疗效。

2、星形胶质细胞(astrocytes，as)是中枢神经系统(central nervous system，cns)最丰富的非神经类细胞，以连续和基本不重叠的方式整齐有序地覆盖整个cns，可通过参与髓鞘形成、维护血脑屏障、调节突触功能和调节能量代谢以维持cns的稳态。一旦中枢受损，as迅速作出反应，大量反应性as增生并籍由本身的功能和表型显著的转化对周围的神经和非神经细胞产生有益或有害的影响。如nmosd、ms及其动物模型-实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，eae)和双环己酮草酰二腙(cuprizone，cpz)诱导的脱髓鞘模型中均存在着的数量众多的反应性as，可通过释放多种抑制性因子如硫酸角质素蛋白聚糖，少突胶质细胞髓鞘蛋白及髓鞘相关蛋白，及炎性因子如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，tnf-α)，白介素-1α(interleukin-1α，il-1α)和补体1q(complement 1q，c1q)等损伤神经元和髓鞘细胞。而靶向as可显著缓解髓鞘脱失，如dalahmah等发现半乳糖凝集素-3(galectin-3，gal-3)可通过促进as的增殖和炎性反应减少少突胶质细胞的损伤。因此，随着对反应性as功能及其作用机制的深入研究，它已逐渐成为保护和促进髓鞘再生的一类重要潜在靶细胞。

3、原花青素(proanthocyanidins/procyanidins，pc)广泛存在于葡萄籽、松树皮、莲房、苹果、蓝莓、黑枸杞和蔷薇果等植物组织器官中，是由不同数目黄烷-3-醇类化合物(儿茶素、表儿茶素或没食子酸)缩合而成的多酚类化合物。原花青素是最为安全有效的抗氧化剂之一，具的抗炎、抗恶性肿瘤、免疫调节、抗衰老和神经保护等药理作用，但是目前为止尚未发现原花青素在中枢神经炎性脱髓鞘疾病方面的报道。

技术实现思路

1、针对原花青素的新用途开发问题，本技术通过探索原花青素对双环己酮草酰二腙(cuprizone，cpz)诱导的慢性脱髓鞘小鼠的作用，发现原花青素可促进小鼠髓鞘的再生，说明原花青素在脱髓鞘疾病的治疗和预防中具有广阔的应用前景。

2、对于原花青素的用途，本技术主要通过以下技术方案实现：

3、作为本技术的一个实施方案，提供了原花青素在制备促进中枢神经炎性脱髓鞘再生药物中的应用。

4、申请人通过小鼠迷宫实验对脱髓鞘模型小鼠进行行为学检测，分析小鼠在十字高架迷宫、旷场实验和t迷宫中的行为，结果表明原花青素能显著改善脱髓鞘模型小鼠的焦虑和工作记忆缺损。

5、申请人对脱髓鞘模型小鼠的脑组织进行染色分析，采用含有胼胝体的脑切片进行固蓝(luxol fast blue，lfb)染色，通过颜色差异评估脱髓鞘形态，分析结果表明原花青素治疗组lfb染色变深，根据髓鞘脱失区颜色比正常组织更浅的判断标准，说明原花青素对于髓鞘脱失区的髓鞘恢复再生具有促进作用。采用fluoromyelintmgreen髓鞘荧光探针对脱髓鞘模型小鼠胼胝体进行染色，结果表明原花青素治疗组胼胝体荧光强度恢复。采用免疫荧光染色检测成熟少突胶质细胞的标记物降解髓鞘碱性蛋白和髓磷脂碱性蛋白，结果表明原花青素逆转了脱髓鞘模型小鼠胼胝体中降解髓鞘碱性蛋白和髓磷脂碱性蛋白的表达。染色分析说明原花青素可以促进脱髓鞘模型小鼠髓鞘的再生。

6、所述脱髓鞘是指与病毒感染、自身免疫反应异常、遗传、环境等有关的中枢神经炎性脱髓鞘，包括多发性硬化和视神经脊髓炎等。

7、在本实施方案中，所述脱髓鞘为双环己酮草酰二腙介导的慢性脱髓鞘。

8、在本实施方案中，所述原花青素通过调控反应性星形胶质细胞增生改善中枢神经炎症性微环境，促进有益于髓鞘再生的细胞因子的表达。

9、申请人通过检测原花青素对脱髓鞘模型小鼠的中枢神经炎性微环境的改善作用，发现原花青素显著抑制了中枢的炎症反应，其机制与原花青素调控反应性星形胶质细胞增生有关。

10、在本实施方案中，所述原花青素可促进星形胶质细胞分泌有益于髓鞘再生细胞因子。

11、所述有益于髓鞘再生的细胞因子包括神经营养因子-3(neurotrophic factor 3,nt3)、睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,cntf)、缝隙连接蛋白30(connexin 30,cx30)和缝隙连接蛋白47(connexin 47,cx47)中至少一种。

12、申请人通过在体外用原花青素干预炎性因子激活的星形胶质细胞，检测了有益和有害于少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells，opcs)分化生存的细胞因子，发现原花青素显著促进神经营养因子-3、睫状神经营养因子、缝隙连接蛋白30和缝隙连接蛋白47在基因水平和蛋白水平的表达。另外，在体内进一步验证后发现原花青素显著增加cpz介导的小鼠胼胝体区gfap+星形胶质细胞中神经营养因子-3、睫状神经营养因子、缝隙连接蛋白30和睫状神经营养因子的表达。

13、在本技术的上述实施方案中，所述原花青素包括从天然植物中提取的及人工合成的单体和低聚体。

14、所述天然植物包括葡萄籽、黑枸杞、枸杞子、玫瑰花、锁阳、刺五加、桂圆、金樱子、莲房、蓝莓、沙棘籽、黑加仑、紫甘蓝、新疆沙枣、樱桃李、欧洲李、桑椹和核桃等。

15、优选的，所述原花青素为儿茶素、表儿茶素、或儿茶素和表儿茶素聚合形成的低聚体原花青素。所述低聚体原花青素具体为二聚体原花青素。

16、更优选的，所述二聚体原花青素包括互为同分异构体的原花青素b1、原花青素b2和原花青素b3，所述原花青素b1、原花青素b2和原花青素b3的化学分子式为c30h26o12。

17、最优选的，所述低聚体原花青素为原花青素b2。所述原花青素b2是原花青素单体(儿茶素和表儿茶素)聚合形成的二聚体中活性最强的异构体。

18、作为本技术的另一个实施方案，提供了用于治疗中枢神经炎性脱髓鞘疾病的药物制品，所述药物制品含有原花青素。

19、所述药物制品为单独含原花青素的制剂或含有原花青素组合物的制剂。

20、所述制剂可按本领域常规方法制备，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂。

21、优选的，所述制剂中含有0.1％～99.9％重量百分比的作为活性成分的所述原花青素。

22、所述制剂还包含药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体不会破坏本技术所述原花青素的药学活性。

23、本技术的有益效果为：

24、本技术提供了原花青素对反应性星形胶质细胞增生的调控作用，表现出了对神经炎性脱髓鞘疾病的治疗和预防能力，其机制主要为原花青素促进星形胶质细胞分泌有益于髓鞘再生的细胞因子。提供了原花青素的新用途，拓宽了原花青素的应用范围，为原花青素的应用提供更多的可能性。