一种含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物及药物的制作方法

1.本发明属于抗抑郁药物技术领域，具体涉及一种含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物及药物。


背景技术：

2.这里的陈述仅提供与本发明相关的背景技术，而不必然地构成现有技术。
3.抑郁症是一种以情绪低落、兴趣缺乏、睡眠障碍等为主要特征的情感障碍性精神类疾病，在社会竞争激烈、全球重大突发性事件频发的今天，发病率日益提高，已成为全世界主要致残原因之一，抑郁症防治已被列入全国精神卫生工作重点。现阶段用于治疗抑郁症的药物主要为单胺氧化酶再摄取抑制剂、三环类药物等，这些药物普遍存在起效慢、有效率低、不良反应多等缺点。


技术实现要素：

4.针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物及药物。
5.为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
6.第一方面，本发明提供一种含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物，包括pdrn；或pdrn和至少一种辅助成分；
7.所述辅助成分选自鱼精蛋白、羧甲基纤维素钠、干淀粉、滑石粉、γ-氨基丁酸、海参肽、胶原蛋白肽、柠檬酸、维生素c、谷胱甘肽、维生素、β-胡萝卜素、牛磺酸、超氧化物歧化酶或槲皮素的一种或多种。
8.第二方面，本发明提供一种含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁药物，其剂型为口服制剂或注射制剂，所述口服制剂为片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂或口服液。
9.第三方面，本发明提供多聚脱氧核糖核苷酸在制备抗抑郁药物中的应用。
10.上述本发明的一种或多种实施例取得的有益效果如下：
11.发明人经过试验发现，pdrn可以缓解lps刺激导致的小鼠海马脑内炎性因子的升高、可以缓解lps刺激导致的小鼠海马脑内氧化应激产物的增加、通过改变海马中神经元树突棘的数量和形态调控突触可塑性参与抗抑郁作用，同时也可以有效缓解小鼠焦虑样表现。
12.制备的抗抑郁组合物具有疗效确切、安全性高、副作用小、综合治疗能力强的优势。
附图说明
13.构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
14.图1是本发明实施例中腹腔注射pdrn对慢性lps诱导的小鼠抑郁、焦虑样行为的改
善作用，其中，a为实验流程图，b为不同药物处理对小鼠体重的影响，c为糖水偏好实验中不同药物处理对小鼠行为的影响，d为强迫游泳实验中不同药物处理对小鼠行为的影响，e为悬尾实验中不同药物处理对小鼠行为的影响，f为旷场实验中不同药物处理对小鼠运动能力的影响，g为旷场实验中不同药物处理对小鼠焦虑行为的影响。
15.图2是本发明实施例中pdrn可以缓解抑郁模型小鼠脑内致炎因子的高表达，其中，a为不同药物处理对小鼠海马内il-6基因表达的影响，b为不同药物处理对小鼠海马内il-1β基因表达的影响，c为不同药物处理对小鼠海马内tnf-α基因表达的影响。
16.图3是本发明实施例中pdrn可以缓解抑郁模型小鼠脑内氧化应激的发生，其中，a为不同药物处理对小鼠海马内mda表达的影响，b为不同药物处理对小鼠海马内sod活性的影响。
17.图4是本发明实施例中pdrn可以缓解抑郁模型小鼠脑内神经元树突棘的减少，其中，a为不同药物处理对小鼠海马内神经元树突棘形态、数量的影响。高尔基染色代表性图，从左至右依次为对照组，lps处理组以及lps+pdrn治疗组，b为不同药物处理对小鼠海马内神经元树突棘数量影响的统计图。
18.图5是本发明实施例中含pdrn组方可以显著缓小鼠的抑郁样行为，其中，a为强迫游泳实验中不同组方药物处理对小鼠行为的影响，b为糖水偏好实验中不同组方药物处理对小鼠行为的影响。
具体实施方式
19.应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
20.第一方面，本发明提供一种含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物，包括pdrn；或pdrn和至少一种辅助成分；
21.所述辅助成分选自鱼精蛋白、羧甲基纤维素钠、干淀粉、滑石粉、聚乙二醇、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙、羟丙纤维素、交联聚维酮、γ-氨基丁酸、海参肽、胶原蛋白肽、柠檬酸、维生素c、谷胱甘肽、维生素、β-胡萝卜素、牛磺酸、超氧化物歧化酶或槲皮素的一种或多种。
22.多聚脱氧核糖核苷酸(pdrn)为一种天然来源的低分子量dna衍生物，分子量介于50-1500kda之间，碱基长度在50-2000bp之间，是一种带有磷酸二酯键的脱氧核糖核苷酸的线性聚合物，在临床的应用由来已久，在组织修复、伤口愈合、抗缺血、抗炎等方面均显示出了确切的效果，并且在有些国家已经被用于治疗皮肤创伤和烧伤。但目前还未未有pdrn具有抗抑郁效果的相关报道。
23.在一些实施例中，所述辅助成分选自鱼精蛋白、羧甲基纤维素钠、干淀粉、滑石粉、聚乙二醇、γ-氨基丁酸、海参肽、胶原蛋白肽、柠檬酸、维生素c、谷胱甘肽、维生素、β-胡萝卜素、牛磺酸、超氧化物歧化酶或槲皮素的一种或多种。
24.在一些实施例中，所述含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物，按质量份计，由以下组分组成：pdrn 150-200份，鱼精蛋白150-200份，干淀粉400-450份，羧甲基纤维素钠200-300份，滑石粉100-200份。其中干淀粉、羧甲基纤维素钠和滑石粉皆为药用辅料。
25.鱼精蛋白是一种碱性蛋白质，主要在鱼类(如鲑鱼、鳟鱼、鲱鱼等)成熟精子细胞核中作为和dna结合的核精蛋白存在。鱼精蛋白具有较好的防腐性能和热稳定性，而且鱼精蛋白还具有很高的营养性和功能性，能降血压、助呼吸、促消化、抑肿瘤、抗血栓、强化肝功能、抑制血液凝固等。本发明中带有正电荷的鱼精蛋白与带负电荷的pdrn分子，通过分子间的静电吸引成为复合物，从而可增强pdrn的细胞穿透性，提高使用效果。
26.优选的，所述含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物，按质量份计，由以下组分组成：pdrn 160-190份，鱼精蛋白160-190份，干淀粉410-440份，羧甲基纤维素钠230-270份，滑石粉140-170份。
27.进一步优选的，所述含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物，按质量份计，由以下组分组成：pdrn 180份，鱼精蛋白180份，干淀粉420份，羧甲基纤维素钠260份，滑石粉150份。
28.在一些实施例中，所述含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物，按质量份计，由以下组分组成：pdrn 0.1-1份，鱼精蛋白0.1-1份，γ-氨基丁酸3-10份、海参肽3-7份，胶原蛋白肽4-7份，柠檬酸1-3份，维生素c1-3份，谷胱甘肽6-10份，维生素e1-3份，β-胡萝卜素2-4份，牛磺酸4-7份，超氧化物歧化酶为0.1-0.4份、槲皮素0.4-0.8份，食用色素和甜味剂适量，纯净水50-80份。
29.还包括适量食用色素和甜味剂。
30.γ-氨基丁酸广泛分布于动植物体内。在动物体内，几乎只存在于神经组织中，是一种重要的抑制性神经递质，对大脑的正常生理功能具有调节作用。当人体内缺乏时，会产生焦虑、不安、疲倦、抑郁等情绪。
31.海参肽具有增强机体运动耐力、促进糖原储备、加速机体的尿素氮代谢的作用，同时对免疫功能具有重要的调节作用，影响细胞生长因子和炎症因子的表达。
32.维生素c又称抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。维生素c是一种抗氧化剂，能保护身体免于氧自由基的威胁，同时作为一种辅酶参与机体多种生化反应过程。
33.谷胱甘肽由谷氨酸、半肌氨酸和甘氨酸组成的短肽，具有抗氧化、整合解毒和增强免疫功能的作用。
34.维生素e是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一。
35.β-胡萝卜素类胡萝卜素之一，是一种抗氧化剂，是维护人体健康不可缺少的营养素，在抗癌、预防心血管疾病、防止衰老引起的多种神经退行性疾病中发挥重要作用。
36.牛磺酸是动物体内一种结构简单的含硫氨基酸，在体内以游离状态存在，不参与体内蛋白的生物合成，但它却与肌氨酸、半肌氨酸的代谢密切相关。对胎儿、婴儿神经系统的发育有重要作用。也可以通过提高神经的电信号传导参与调节不良情绪。
37.超氧化物歧化酶简称sod，是生物体系中抗氧化酶系的重要组成成员，广泛分布在微生物、植物和动物体内，它能够催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢，在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用，在治疗因自由基作用而导致的炎症、自身免疫性、心脑血管疾病等有较好的疗效。
38.槲皮素是植物界分布广泛，具有多种生物活性的黄酮醇类化合物，广泛存在于许多植物的茎皮、花、叶、芽、种子、果实中，多以苷的形式存在，能够发挥清除体内自由基，抗
炎等功效。
39.上述组方可从抗炎、抗氧化应激、抗疲劳、营养神经等多方面、多层面起到复合调节情绪、抗抑郁的作用。
40.优选的，所述含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁组合物，按质量份计，由以下组分组成：pdrn 0.2份，鱼精蛋白0.2份，γ-氨基丁酸5份、海参肽5份，胶原蛋白肽5份，柠檬酸2份，维生素c 2份，谷胱甘肽8份，维生素e 2份，β-胡萝卜素3份，牛磺酸5份，超氧化物歧化酶为0.2份，槲皮素0.5份，纯净水60份。
41.进一步优选的，所述抗抑郁组合物中还包括食用色素和甜味剂。
42.第二方面，本发明提供一种含有多聚脱氧核糖核苷酸的抗抑郁药物，其剂型为口服制剂或注射制剂，所述口服制剂为片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂或口服液。
43.在一些实施例中，所述剂型为口服制剂。
44.第三方面，本发明提供多聚脱氧核糖核苷酸在制备抗抑郁药物中的应用。
45.下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
46.实施例1
47.pdrn的提取方法：
48.取新鲜或冷冻的鱼精巢组织500g粉碎处理后，按1:5(m/v)的比例加入ph为8.0的0.15m nacl/0.03m柠檬酸钠混合盐溶液，室温搅拌2h，4000rpm的转速离心15min，弃上清，再用该混合盐溶液洗涤并离心3次。
49.将上述沉淀物加入含0.05m的tris-hcl(ph7.6)、0.1m的edta(ph8.0)、0.15m的nacl和1％sds的裂解液，沉淀物与裂解液的比例为1:25(m/v)，55℃摇床中摇动4h；离心收集上清。
50.向上清中加入3倍体积的饱和nacl溶液，涡旋振荡30s；14000rpm离心25min，然后在4℃冰箱放置40min；
51.吸取上清加等体积的预冷无水乙醇，充分颠倒混匀，14000rpm离心10min；
52.倒掉液体，加入70％的乙醇洗涤dna，14000rpm离心10min；
53.加入500ul 37℃去离子水溶解管底的dna，并检测dna浓度；加入限制性内切酶sau3 ai 37℃溶液中反应1h；
54.加入两倍体积预冷的无水乙醇充分振荡，14000rpm离心10min；
55.倒掉液体，加入70％的乙醇洗涤离心3次，将得到的dna沉淀粉碎，进行冻干得到白色固体即为pdrn。
56.抑郁症造模方法：采用0.5mg/kg脂多糖(lps)腹腔注射c57bl6小鼠，(体重22-25g)连续5天。第6天开始进行行为学评价。
57.pdrn给药方法：提取的pdrn溶于生理盐水后，按照8mg/kg剂量腹腔注射到c57bl6小鼠体内，连续注射5天。
58.分组：分四组，分别是溶剂对照组，lps组，lps联合pdrn给药组，pdrn给药组。
59.体重监测：行为检测当天8：00和18：00称量小鼠体重，取平均值作为当天小鼠重量。以行为检测当天对照组小鼠平均体重值为标准值，所有小鼠的实际体重与之相减，计算体重变化值
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60.行为学检测：
61.旷场实验：在保证实验环境安静的情况下，将小鼠轻轻的放入旷场箱(40cm
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40cm
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40cm)中。利用smart v3.0分析软件录制小鼠行为学视频，并进行行为学测试分析(测试时间10min)，每只小鼠行为实验结束后，用40％酒精擦拭旷场箱底面和内壁，以消除不同小鼠之间气味影响。以总运动距离反映小鼠的运动能力，而以小鼠在中心区域(旷场箱底部正中央1/4的区域)停留时间占总时间的百分比作为衡量小鼠焦虑样行为的指标。
62.悬尾实验：用于反应小鼠的绝望程度。在保证实验环境安静的情况下，利用医用胶带缠绕离小鼠尾巴末端1～2cm处，将小鼠倒立悬挂于离地面约30cm的高度，侧边放置摄像头，利用smart v3.0分析软件录制小鼠行为学视频，并进行行为学测试分析(测试时间6min)，以小鼠放弃挣扎的不动时间作为衡量小鼠抑郁样行为的指标。
63.强迫游泳实验：强迫游泳主要通过小鼠在无法逃避的水中挣扎求生和放弃挣扎的时间长短来反应其绝望程度。首先在透明的亚克力圆柱桶(φ12cm
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30cm)中加入适量的水(水位高度15～20cm)。视频采集装备放置在侧边，以方便录制小鼠在测试过程全身的运动情况。在保证实验环境安静的情况下，将小鼠缓慢放入水中，利用smart v3.0分析软件录制小鼠行为学视频，并进行行为学测试分析(测试时间6min)，每3～5只小鼠更换一次水，以保证水温和清洁。以小鼠在水中放弃挣扎的不动时间作为衡量小鼠抑郁样行为的指标。
64.糖水偏好实验：糖水偏好主要反映小鼠对奖赏(1％糖水)的感知，通过小鼠对糖水的偏好分数来反映小鼠是否存在快感缺失。
65.糖水测试分为两个阶段：第一阶段为糖水适应阶段，即在小鼠的饲养笼架两侧各放一个糖水瓶，供小鼠自由饮食，适应4天，每天适应2h。第二阶段为测试阶段，在小鼠的饲养笼架一侧放置纯水瓶，而另一侧放置糖水瓶，放置前称量每个水瓶和水的总质量，让小鼠自由饮用，1h后更换纯水瓶和糖水瓶的位置，继续测试1h。称量2h后水瓶和剩余水的总质量。
66.以糖水偏好分数作为衡量小鼠抑郁样行为的指标：糖水偏好分数＝糖水消耗量/(糖水消耗量+纯水消耗量)
×
100％。
67.用实时荧光定量的方法检测大脑匀浆中炎性因子il-1β、tnf-α、il-6水平的变化。
68.用酶联免疫吸附试验(elisa)检测大脑匀浆中氧化应激产物丙二醛(mda)以及抗氧化应激酶超氧化物歧化酶(sod)的变化。
69.使用高尔基染色的方法观察海马神经元树突棘形态结构及数目的变化。
70.配方功能评价实验：
71.含pdrn组方1：将pdrn 180g、鱼精蛋白180g、干淀粉420g、羧甲基纤维素钠和滑石粉适量，制成颗粒，干燥，压制成1000片，每片含pdrn 180mg。
72.无pdrn组方1：除不含pdrn外，其余成分含量同含pdrn组方1。
73.含pdrn组方2：pdrn 0.2％，鱼精蛋白0.2％，γ-氨基丁酸5％，海参肽5％，胶原蛋白肽5％，柠檬酸2％，维生素c 2％，谷胱甘肽8％，维生素e 2％，β-胡萝卜素3％，牛磺酸5％，超氧化物歧化酶为0.2％，槲皮素0.5％，适量食用色素及甜味剂，余为纯净水。
74.无pdrn组方2：除不含pdrn外，其余成分含量同含pdrn组方2。
75.将含pdrn组方1和无pdrn组方1分别用100ml纯净水溶解混匀，作为小鼠的日常饮用水，随意饮用，在给予lps造模处理前2天开始适用性饮用，一直持续到造模结束。
76.含pdrn组方2和无pdrn组方2的饮料100ml也作为小鼠的日常饮用水，随意饮用，在
给予lps造模处理前2天开始适用性饮用，一直持续到造模结束。
77.对照组小鼠期间饮用纯净水。
78.结果分析
79.腹腔注射pdrn可以逆转lps刺激导致的体重减轻，如图1中b所示。
80.腹腔注射pdrn可以缓解lps刺激导致的小鼠抑郁样行为的发生。lps刺激可以导致小鼠在强迫游泳实验和悬尾试验中的不动时间明显延长、以及糖水偏好实验中的糖水偏好分数明显降低，而同时给予pdrn治疗组小鼠，上述行为表现得到明显恢复，提示lps可以导致小鼠抑郁样症状的发生，而pdrn可有效缓解该抑郁样表现，如图1c-e所示。
81.腹腔注射pdrn可以缓解lps刺激导致的小鼠焦虑样行为的发生。lps刺激可以导致小鼠在旷场实验中进入中央区的时间明显缩短、但不影响小鼠的自发活动，给予pdrn治疗可有效增加小鼠进入中央区的时间，提示lps处理可以导致小鼠焦虑样症状的发生，而pdrn可有效缓解该焦虑样表现，如图1f-g所示。
82.腹腔注射pdrn可以缓解lps刺激导致的小鼠海马脑内炎性因子的升高如图2所示。
83.腹腔注射pdrn可以缓解lps刺激导致的小鼠海马脑内氧化应激产物的增加，如图3所示。
84.腹腔注射pdrn通过改变海马中神经元树突棘的数量和形态调控突触可塑性参与抗抑郁作用，如图4所示。
85.口服含pdrn的组方可以有效减少小鼠强迫游泳中的不动时间，增加对糖水的摄取量，提示两个含pdrn的组方较对照组和无pdrn组方处理组，具有较好的缓解小鼠抑郁样行为的功效，如图5所示。
86.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。