一种能溶解血栓的植物提取物制剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及植物提取物技术领域，尤其涉及一种能溶解血栓的植物提取物制剂及其制备方法。


背景技术：

2.血栓性疾病是许多发达国家的主要死因，大约有50％与恶性肿瘤相关的死亡是由血栓形成引发的。在正常情况下，血管循环系统的血液损伤和外渗经常会发生，止血是维持血管完整性和血流调节的过程，正常的止血可能被病理因素所淹没，导致血管形成和血管闭塞在动脉或静脉中不受控制，从而导致血栓形成。血栓形成后的主要危害是阻塞局部血流或脱落成栓子分别伴随动静脉血流而堵塞相应的脏器，从而造成器官组织缺血和坏死，具有极高的致残率和致死率。
3.目前，血栓性疾病的治疗方法包括抗栓治疗、溶栓治疗、经皮冠状动脉介入疗法以及手术治疗。其中溶栓治疗因具有方便、快捷、易于在基层医院开展等优势逐渐成为血栓性疾病，尤其是心血管疾病治疗的首选方案。在血栓性疾病的临床溶栓治疗中，单纯地通过增加溶栓药物的服用剂量来提高治疗效果仍具有较大的弊端，主要是因为溶栓药物的半衰期短，剂量过大会引起大出血和过敏反应等一系列并发症。
4.中药在我国有上千年的使用历史，与西药相比，中医药在治疗血栓栓塞性疾病方面表现出三大优势：一、毒副作用相对较少，适合于长期应用，二、中药具有扩张冠状动脉、改善心肌缺血、抑制血小板凝聚、降压降脂、提高患者运动能力和改善生命质量的多重作用；三、明显改善患者伴随的症状。基于此，中医理论认为从整体入手的治疗方案，通过多途径，多点，作用于多个证候的组合，产生预防及治疗效果，如中药川考、当归、薯截及丹参等的提取物制剂，对防治血栓栓塞性疾病表现出明显的效果。
5.但在血栓性疾病中，植物提取物制剂虽然毒副作用小，但易受环境影响而失活，同时治疗效果不明显，而单纯地通过加大剂量以达到溶栓的目的是不可取的。随着近年来采用植物提取物治疗血栓性疾病这一手段越来越受到人们的重视，目前开发一种安全有效的植物提取物溶血栓制剂极为迫切。


技术实现要素：

6.本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种能溶解血栓的植物提取物制剂及其制备方法。
7.一种能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法，包括如下步骤：
8.(1)将黑莓籽、新疆鼠尾草、赤芍干燥后粉碎，过筛，脱脂2-4次，然后加入乙醇水溶液冷浸，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
9.(2)将乙醇浸膏萃取，将萃取液减压浓缩，向其中加入溶剂和ε-聚赖氨酸，超声分散1-2h，超声频率为5-10khz，超声功率为200-400w，过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物；
10.(3)将植物提取物分散在明胶水溶液中，搅拌状态下向其中滴加硫酸钠溶液，搅拌温度为40-60℃，搅拌状态下降温至5-10℃，搅拌状态下滴加甲醛溶液，调节体系ph值为8-9，搅拌1-2h，抽滤，冷冻干燥得到能溶解血栓的植物提取物制剂。
11.优选地，步骤(1)中，黑莓籽、新疆鼠尾草、赤芍的质量比为10-20：1-5：1-5。
12.优选地，步骤(1)中，采用石油醚冷浸脱酯。
13.优选地，步骤(1)中，乙醇水溶液的体积分数为60-80％。
14.优选地，步骤(2)中，乙醇浸膏和ε-聚赖氨酸的质量比为5-15：1-3。
15.优选地，步骤(2)中，乙醇浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，然后混合。
16.优选地，步骤(2)中，溶剂为二甲基亚砜、四氢呋喃、乙酸异丙酯、二甲基甲酰胺、丙二醇中至少一种。
17.优选地，步骤(3)中，植物提取物、明胶、硫酸钠、甲醛的质量比为10-20：0.2-2：0.05-0.24：0.01-0.2。
18.一种能溶解血栓的植物提取物制剂，采用上述能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法制得。
19.一种溶血栓植物外用制剂，包括：上述能溶解血栓的植物提取物制剂。
20.优选地，外用制剂为栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂中至少一种。
21.本发明的技术效果如下所示：
22.(1)本发明将黑莓籽、新疆鼠尾草、赤芍复配制备乙醇浸膏，依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，经过实验发现，石油醚萃取、正丁醇萃取部位具有良好的体外抗凝血活性，而乙酸乙酯部位具有体外促凝血活性，而仅使用石油醚萃取、正丁醇萃取部位，可有效溶解血栓，但易出现大出血并发症，而配合乙酸乙酯部位，可在溶解血栓的前提下，可有效减少上述副作用，但存在半衰期短，同时易受环境影响的缺陷。
23.(2)ε-聚赖氨酸呈高度分散的树枝状分子，其内部具有空腔结构，内紧外松的结构使得其可通过静电引力、范德华力和氢键等作用包封石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的萃取物，将所得植物提取物稳定分散在明胶水溶液中，由于ε-聚赖氨酸为一种多肽，而明胶的胶原分子是由三条多肽链相互缠绕所形成的螺旋体，ε-聚赖氨酸与明胶具有极佳的亲和性。本发明采用硫酸钠作为絮凝剂，通过盐析作用使明胶的溶解度降低引发相分离，明胶从体系中凝聚并包覆在植物提取物表面，然后采用甲醛交联从而形成结构稳定的纳米粒。
24.本发明所得不仅具有优异的生物相容性和生物可降解性，同时其表面带有正电荷，而血栓表面带负电荷，因此本发明制剂能够更好地渗入血栓内部，不仅具备较好的溶栓能力，还能够控制释放植物提取物，有效延长其半衰期，同时制剂不易受环境影响，具有更好的体外稳定性。
附图说明
25.图1为实施例5所得植物提取物制剂的粒径分布图。
26.图2为实施例5所得植物提取物制剂的zeta电位图。
27.图3为实施例5和对比例1所得能溶解血栓的植物提取物制剂与对比例2所得植物提取物的体外溶栓试验结果对比图。
具体实施方式
28.下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
29.实施例1
30.一种能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法，包括如下步骤：
31.(1)将10kg黑莓籽、1kg新疆鼠尾草、1kg赤芍干燥后加入至粉碎机中粉碎，过70目筛，采用石油醚冷浸脱酯2次，然后加入50kg体积分数为60％乙醇水溶液冷浸2次，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
32.(2)将5kg乙醇浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，然后混合，向其中加入溶剂和1kgε-聚赖氨酸，超声分散1h，超声频率为5khz，超声功率为200w，用0.45μm滤膜过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物；
33.(3)将10kg植物提取物分散在20kg质量分数为1％明胶水溶液中，搅拌状态下向其中滴加1kg质量分数为5％硫酸钠溶液，搅拌温度为40℃，搅拌状态下降温至5℃，搅拌状态下滴加0.1kg质量分数为10％甲醛溶液，搅拌速度为1000r/min，用浓度为0.5mol/l氢氧化钠溶液调节体系ph值为8-9，搅拌1h，抽滤，冷冻干燥得到能溶解血栓的植物提取物制剂。
34.实施例2
35.一种能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法，包括如下步骤：
36.(1)将20kg黑莓籽、5kg新疆鼠尾草、5kg赤芍干燥后加入至粉碎机中粉碎，过70目筛，采用石油醚冷浸脱酯4次，然后加入100kg体积分数为80％乙醇水溶液冷浸4次，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
37.(2)将15kg乙醇浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，然后混合，向其中加入溶剂和3kgε-聚赖氨酸，超声分散2h，超声频率为10khz，超声功率为400w，用0.45μm滤膜过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物；
38.(3)将20kg植物提取物分散在40kg质量分数为5％明胶水溶液中，搅拌状态下向其中滴加2kg质量分数为12％硫酸钠溶液，搅拌温度为60℃，搅拌状态下降温至10℃，搅拌状态下滴加1kg质量分数为20％甲醛溶液，搅拌速度为5000r/min，用浓度为1.5mol/l氢氧化钠溶液调节体系ph值为8-9，搅拌2h，抽滤，冷冻干燥得到能溶解血栓的植物提取物制剂。
39.实施例3
40.一种能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法，包括如下步骤：
41.(1)将12kg黑莓籽、4kg新疆鼠尾草、2kg赤芍干燥后加入至粉碎机中粉碎，过70目筛，采用石油醚冷浸脱酯3次，然后加入80kg体积分数为65％乙醇水溶液冷浸3次，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
42.(2)将12kg乙醇浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，然后混合，向其中加入溶剂和1.5kgε-聚赖氨酸，超声分散1.7h，超声频率为7khz，超声功率为340w，用0.45μm滤膜过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物；
43.(3)将13kg植物提取物分散在35kg质量分数为2％明胶水溶液中，搅拌状态下向其中滴加1.7kg质量分数为7％硫酸钠溶液，搅拌温度为55℃，搅拌状态下降温至6℃，搅拌状态下滴加0.8kg质量分数为13％甲醛溶液，搅拌速度为4000r/min，用浓度为0.8mol/l氢氧化钠溶液调节体系ph值为8-9，搅拌1.7h，抽滤，冷冻干燥得到能溶解血栓的植物提取物制剂。
44.实施例4
45.一种能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法，包括如下步骤：
46.(1)将18kg黑莓籽、2kg新疆鼠尾草、4kg赤芍干燥后加入至粉碎机中粉碎，过70目筛，采用石油醚冷浸脱酯3次，然后加入60kg体积分数为75％乙醇水溶液冷浸3次，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
47.(2)将8kg乙醇浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，然后混合，向其中加入溶剂和2.5kgε-聚赖氨酸，超声分散1.3h，超声频率为8khz，超声功率为260w，用0.45μm滤膜过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物；
48.(3)将17kg植物提取物分散在25kg质量分数为4％明胶水溶液中，搅拌状态下向其中滴加1.3kg质量分数为10％硫酸钠溶液，搅拌温度为45℃，搅拌状态下降温至8℃，搅拌状态下滴加0.3kg质量分数为17％甲醛溶液，搅拌速度为2000r/min，用浓度为1.2mol/l氢氧化钠溶液调节体系ph值为8-9，搅拌1.3h，抽滤，冷冻干燥得到能溶解血栓的植物提取物制剂。
49.实施例5
50.一种能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法，包括如下步骤：
51.(1)将15kg黑莓籽、3kg新疆鼠尾草、3kg赤芍干燥后加入至粉碎机中粉碎，过70目筛，采用石油醚冷浸脱酯3次，然后加入70kg体积分数为70％乙醇水溶液冷浸3次，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
52.(2)将10kg乙醇浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，然后混合，向其中加入溶剂和2kgε-聚赖氨酸，超声分散1.5h，超声频率为7.5khz，超声功率为300w，用0.45μm滤膜过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物；
53.(3)将15kg植物提取物分散在30kg质量分数为3％明胶水溶液中，搅拌状态下向其中滴加1.5kg质量分数为8.5％硫酸钠溶液，搅拌温度为50℃，搅拌状态下降温至7.5℃，搅拌状态下滴加0.55kg质量分数为15％甲醛溶液，搅拌速度为3000r/min，用浓度为1mol/l氢氧化钠溶液调节体系ph值为8-9，搅拌1.5h，抽滤，冷冻干燥得到能溶解血栓的植物提取物制剂。
54.采用dls测定实施例5所得植物提取物制剂的粒径。在25℃条件下，将5mg实施例5所得植物提取物制剂分散在10ml二次蒸馏水中，并将样品超声15分钟以避免测量时颗粒之间聚集。收集时间为10min，散射角度为90
°
，平行测定3次。
55.如图1所示，实施例5所得植物提取物制剂的平均流体力学直径约为366nm。
56.取上述超声分散好的溶液，用zeta电位分析仪测定样品的ζ电位，平行测定3次。
57.如图2所示，实施例5所得植物提取物制剂的zeta电位为+12.8mv，证实本发明所得植物提取物制剂表面带有正电荷。
58.对比例1
59.一种能溶解血栓的植物提取物制剂制备方法，包括如下步骤：
60.(1)将15kg黑莓籽、3kg新疆鼠尾草、3kg赤芍干燥后加入至粉碎机中粉碎，过70目筛，采用石油醚冷浸脱酯3次，然后加入70kg体积分数为70％乙醇水溶液冷浸3次，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
61.(2)将10kg乙醇浸膏依次采用石油醚和正丁醇萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，
然后混合，向其中加入溶剂和2kgε-聚赖氨酸，超声分散1.5h，超声频率为7.5khz，超声功率为300w，用0.45μm滤膜过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物；
62.(3)将15kg植物提取物分散在30kg质量分数为3％明胶水溶液中，搅拌状态下向其中滴加1.5kg质量分数为8.5％硫酸钠溶液，搅拌温度为50℃，搅拌状态下降温至7.5℃，搅拌状态下滴加0.55kg质量分数为15％甲醛溶液，搅拌速度为3000r/min，用浓度为1mol/l氢氧化钠溶液调节体系ph值为8-9，搅拌1.5h，抽滤，冷冻干燥得到能溶解血栓的植物提取物制剂。
63.对比例2
64.一种能溶解血栓的植物提取物制备方法，包括如下步骤：
65.(1)将15kg黑莓籽、3kg新疆鼠尾草、3kg赤芍干燥后加入至粉碎机中粉碎，过70目筛，采用石油醚冷浸脱酯3次，然后加入70kg体积分数为70％乙醇水溶液冷浸3次，过滤，减压浓缩得到乙醇浸膏；
66.(2)将10kg乙醇浸膏依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各部萃取液分别减压浓缩，然后混合，向其中加入溶剂和2kgε-聚赖氨酸，超声分散1.5h，超声频率为7.5khz，超声功率为300w，用0.45μm滤膜过滤，将滤液冷冻干燥得到植物提取物。
67.取人体静脉血，注入体外旋转圆塑料环内，在体外血栓仪上以17.5r/min转动10min，然后取下塑料环，将血栓倒在滤纸上吸干水分，得到血栓模型。测量血栓模型质量为w0。将相同质量的实施例5和对比例1所得能溶解血栓的植物提取物制剂与对比例2所得植物提取物分别置于不同的烧杯中，向各烧杯中分别加入50ml pbs缓冲液(ph＝7.4)混合均匀，再分别加入质量相近的血栓模型，随后将烧杯置于37℃恒温振荡器以150rpm速率振荡。在预定的时间点对血栓模型进行称重w1(用半湿滤纸吸去血栓模型表面多余水分)，以血栓模型剩余质量百分比对溶栓时间作图，得到体外溶栓动力学曲线。
68.血栓模型剩余质量百分比＝w1/w0×
100％
69.如图3所示，实施例5所得能溶解血栓的植物提取物制剂采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行萃取，既能有效溶解血栓，又能避免出现大出血并发症，进而通过ε-聚赖氨酸和明胶配合，使植物提取物被包覆，从而稳定存在，同时其表面带有正电荷，而血栓表面带负电荷，电荷相互结合使两组靠近，从而使其渗入血栓中，增强溶栓效果。
70.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。