一种全植物源复配防腐剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种全植物源复配防腐剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.防腐剂是指天然或合成的化学成分，用于加入食品、药品、颜料、生物标本等，以延迟微生物生长或化学变化引起的腐败。目前，市场上的化妆品都添加了各种防腐剂，主要有山梨酸及其钾盐，苯甲酸及其钠盐，丙酸及其盐，尼泊金酯类等，这些均为化学防腐剂，在发挥防腐作用的同时可能会导致皮肤潜在危害，如影响皮肤屏障，皮肤松弛，过敏，角质层增厚等问题。
3.而植物中含有大量的防腐剂，要把它提取出来，可以应用于食品工业和化妆品行业等领域。但纯植物源防腐剂存在以下几大弊端：1、防腐能力低于化学合成有机物；2、长时间就容易氧化变质；3、传统提取法来提取天然植物的防腐剂，低效率、低纯度、低含量，而且费时和步骤复杂。
4.cn108498399a公开了一种具有防腐效果的复配植物提取物及其在化妆品防腐中的应用，该复配植物提取物由绿茶提取物和玫瑰花精油组成，绿茶提取物和玫瑰花精油的重量比为3～7:3～7。该发明的复配植物提取物的原料均为来源于天然植物，该复配植物提取物可应用于化妆品中起到抑制细菌、霉菌和真菌的效果，但抗氧化能力一般。
5.cn107522682a公开了一种具有抗炎防腐活性的紫花地丁香豆素及其制备方法和应用，包含以下步骤：(1)将紫花地丁残渣，置于45℃烘干，粉碎后得到紫花地丁残渣粉末；(2)将紫花地丁残渣粉末利用紫外线辐照灭菌30min；(3)将灭菌后的紫花地丁残渣粉末，加入3倍重量份蒸馏水，加复合酶，混匀，置于55℃恒温水浴内保温1.5h；(4)往紫花地丁残渣粉末中加入有机提取剂后，50℃条件下回流提取2次，每次35min，减压真空抽滤，浓缩，真空干燥，得紫花地丁香豆素。该发明制备得到的单一的紫花地丁香豆素，其防腐的持效性有待提高，且同样存在抗氧化能力一般的问题。
6.cn105777822a公开了一种含多穗石柯提取物的美白保湿霜及其制备方法。美白护肤品的制备方法：其特征是：配方含有根皮苷、透明质酸钠、硬脂醇、已二酸二异辛酯、聚二甲基硅氧烷、甘油、植物油、羟苯甲酯、苯氧乙醇、卡波姆、羟苯丙酯、氨甲基丙醇和去离子。该方法通过从多穗石柯中提取根皮苷达到抑菌、抗氧化的目的，但仅依靠多穗石柯中的根皮苷，其防腐的持效性有待提高。
7.因此，亟待开发一种完全来源于天然植物，安全性高，无刺激，且该复配植物提取物需要具有更好地抑制细菌、霉菌和真菌的效果及持效性。


技术实现要素：

8.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种全植物源复配防腐剂及其制备方法和应用。本发明所述防腐剂配方的高效性和生物兼容性，该防腐剂仅含苹果皮根皮苷
和甘蔗渣香豆素两种主效成分，可添加到液状和膏状化妆品产品中，抑菌防腐效果显著。
9.为达此目的，本发明采用以下技术方案：
10.第一方面，本发明提供一种全植物源复配防腐剂，所述全植物源复配防腐剂包括苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素。
11.在本发明中，所述全植物源复配防腐剂两种主效成分来源植物的特定性，根皮苷来源于苹果皮，香豆素来源于甘蔗渣；两种主效成分提制方法的高效性，苹果皮根皮苷提取基于乙醇提取和乙酸乙酯萃取，甘蔗渣香豆素提取基于超声辅助乙醇提取；防腐剂配方的高效性和生物兼容性，该防腐剂仅含苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素两种主效成分，无需添加佐剂或仅需添加少量佐剂，即可添加到液状和膏状化妆品产品中，抑菌防腐能力效果显著。
12.优选地，所述甘蔗渣香豆素和苹果皮根皮苷的质量比为(2-3):(1-2)；
13.其中，“2-3”例如可以是2、2.2、2.4、2.6、2.8、3等；
14.其中，“1-2”例如可以是1、1.2、1.4、1.6、1.8、2等。
15.优选地，所述全植物源复配防腐剂中还包括佐剂。
16.优选地，所述佐剂包括丙二醇、1,2-己二醇、戊二醇或甘油中的任意一种或至少两种的组合。
17.优选地，所述甘蔗渣香豆素、苹果皮根皮苷和佐剂的质量比为(2-3):(1-2):(0.5-1)；
18.其中，“2-3”例如可以是2、2.2、2.4、2.6、2.8、3等；
19.其中，“1-2”例如可以是1、1.2、1.4、1.6、1.8、2等；
20.其中，“0.5-1”例如可以是0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1等。
21.第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述全植物源复配防腐剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
22.从苹果皮中提取得到苹果皮根皮苷，从甘蔗渣中提取得到甘蔗渣香豆素后，再将所述苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
23.优选地，如图1所示，所述苹果皮根皮苷通过由以下步骤提取得到：
24.(a)将苹果皮干燥后，再进行粉碎，得到粗粉；
25.(b)将步骤(a)得到的粗粉采用乙醇水溶液进行浸提，得到提取液；
26.(c)将步骤(b)得到的提取液采用乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液；
27.(d)将步骤(c)得到的萃取液浓缩，得到苹果皮根皮苷。
28.在本发明中，所述苹果皮根皮苷提取基于乙醇提取和乙酸乙酯萃取，采用上述提取及处理方法，得到的苹果皮根皮苷，收率高，纯度高，且耗时短步骤简单。
29.优选地，步骤(a)中，所述干燥的温度为63-66℃，例如可以是63℃、64℃、65℃、66℃等，干燥的时间为1.8-2.2h，例如可以是1.8h、1.9h、2.0h、2.1h、2.2h等。
30.优选地，步骤(a)中，所述粗粉的粒径为10-20目，例如可以是10目、12目、14目、16目、18目、20目等。
31.优选地，步骤(b)中，所述粗粉和乙醇水溶液的质量体积比为1g:(5-15)ml，例如可以是1g:5ml、1g:6ml、1g:8ml、1g:9ml、1g:10ml、1g:11ml、1g:12ml、1g:14ml、1g:15ml等。
32.优选地，步骤(b)中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70-90％，例如可以
是70％、72％、74％、76％、78％、80％、82％、84％、86％、88％、90％等。
33.优选地，步骤(b)中，所述浸提的温度为0-10℃，例如可以是0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃等，浸提的时间为8-20h，例如可以是8h、9h、10h、12h、14h、16h、18h、20h等。
34.优选地，步骤(c)中所述乙酸乙酯和步骤(b)中所述乙醇水溶液的体积比为1:(0.5-2)，例如可以是1:0.5、1:0.6、1:0.8、1:1、1:1.2、1:1.4、1:1.6、1:1.8、1:2等。
35.优选地，步骤(c)中，所述萃取的次数为2次以上，例如可以是2次、3次、4次、5次、6次等。
36.优选地，步骤(d)中，所述浓缩为真空浓缩，浓缩的温度为40-43℃，浓缩的压力为0.09-0.10mpa，例如可以是0.09mpa、0.092mpa、0.094mpa、0.096mpa、0.098mpa、0.1mpa等。
37.优选地，如图2所示，所述甘蔗渣香豆素通过由以下步骤提取得到：
38.(a)将甘蔗渣干燥后，再进行粉碎，得到粗粉；
39.(b)将步骤(a)得到的粗粉采用乙醇水溶液进行超声提取后，过滤，得到提取液；
40.(c)将步骤(b)得到的提取液浓缩，得到甘蔗渣香豆素。
41.优选地，步骤(a)中，所述干燥的温度为103-107℃，例如可以是103℃、104℃、105℃、106℃、107℃等，干燥的时间为2.9-3.1h，例如可以是2.9h、2.95h、3.0h、3.05h、3.1h等。
42.优选地，步骤(a)中，所述粗粉的粒径为20-30目，例如可以是20目、22目、24目、26目、28目、30目等。
43.优选地，步骤(b)中，所述粗粉和乙醇水溶液的质量体积比为1g:(5-15)ml，例如可以是1g:5ml、1g:6ml、1g:8ml、1g:9ml、1g:10ml、1g:11ml、1g:12ml、1g:14ml、1g:15ml等。
44.优选地，步骤(b)中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为92-98％，例如可以是92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％等。
45.优选地，步骤(b)中，所述超声提取的功率为100-250w，例如可以是100w、120w、140w、160w、180w、200w、220w、250w等，超声提取的温度为50-80℃，例如可以是50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃等国，超声提取的时间为50-65min，例如可以是50min、52min、54min、56min、58min、60min、62min、65min等。
46.优选地，步骤(b)中，所述过滤采用孔径为0.4-0.45μm的滤膜，例如可以是0.4μm、0.41μm、0.42μm、0.43μm、0.44μm、0.45μm等。
47.优选地，步骤(c)中，所述浓缩为真空浓缩，浓缩的温度为67-72℃，浓缩的压力为0.09-0.1mpa，例如可以是0.09mpa、0.092mpa、0.094mpa、0.096mpa、0.098mpa、0.1mpa等。
48.第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的全植物源复配防腐剂在制备化妆品中的应用。
49.第四方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品中包括如第一方面所述的全植物源复配防腐剂。
50.优选地，所述的全植物源复配防腐剂的添加量占所述化妆品总质量的0.001-10％，例如可以是0.001％、0.005％、0.1％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％、2％、4％、8％、10％等。
51.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
52.(1)本发明配制化妆品防腐剂的主效成分为从苹果皮和甘蔗渣中高效提取根皮苷
和香豆素；通过组合有机溶剂、萃取和超声辅助提取等方法实现高效提取；采用响应面方法优选配方；原料丰富易得，可大规模生产，成本低廉；
53.(2)本发明配制防腐剂含有苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素两种主效成分，配方简单，生物兼容性好，可添加到液状和膏状化妆品产品中用于抑菌防腐，抑菌作用显著；
54.(3)本发明创新性地复配根皮苷香豆素两个植物来源成分，并采用两个成分最优配比，发挥二者的协同增效作用，进一步地提高了其抑菌防腐的能力；
55.(4)本发明所述全植物源复配防腐剂包括苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素，二者相互配合，协同增效，还能够进一步地提高组合物的抗氧化和抗糖化效果；
56.(5)主效成分为全植物源成分，安全性高；提取主效成分的植物原料来自农业废弃物苹果皮和甘蔗渣；在化妆品防腐剂研制中首次利用全植物源主效成分，绿色环保。
附图说明
57.图1为苹果皮根皮苷的提取工艺流程图。
58.图2为甘蔗渣香豆素的提取工艺流程图。
具体实施方式
59.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
60.实施例1
61.本实施例提供一种全植物源复配防腐剂，所述全植物源复配防腐剂由以下方法制备得到：
62.(1)取苹果皮适量，65℃下干燥2h后，粉碎成15目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 80vol％乙醇水溶液在4℃下提取12h，用20ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(42℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到苹果皮根皮苷；
63.取甘蔗渣适量，105℃下干燥3h后，粉碎成25目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 95vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为100w，温度80℃，时间60min)，最后采用0.45μm的滤膜过滤，用真空冷冻(70℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到甘蔗渣香豆素。
64.(2)将6mg的甘蔗渣香豆素、3mg苹果皮根皮苷的和1mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
65.实施例2
66.本实施例提供一种全植物源复配防腐剂，所述全植物源复配防腐剂由以下方法制备得到：
67.(1)取苹果皮适量，63℃下干燥2.0h后，粉碎成10目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入18ml 85vol％乙醇水溶液在4℃下提取8h，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(40℃，0.1mpa)浓缩系统冻干，得到苹果皮根皮苷；
68.取甘蔗渣适量，103℃下干燥3.1h后，粉碎成20目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入25ml 92vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为200w，温度70℃，时间55min)，最后采用0.4μm的滤膜过滤，用真空冷冻(67℃，0.1mpa)浓缩系统冻干，得
到甘蔗渣香豆素。
69.(2)将4.5mg的甘蔗渣香豆素、4mg的苹果皮根皮苷和1.5mg的佐剂(甘油)混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
70.实施例3
71.本实施例提供一种全植物源复配防腐剂，所述全植物源复配防腐剂由以下方法制备得到：
72.(1)取苹果皮适量，66℃下干燥1.8h后，粉碎成20目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入25ml 75vol％乙醇水溶液在4℃下提取10h，用25ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(43℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到苹果皮根皮苷；
73.取甘蔗渣适量，107℃下干燥2.9h后，粉碎成目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入18ml 96vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为250w，温度50℃，时间50min)，最后采用0.45μm的滤膜过滤，用真空冷冻(72℃，0.1mpa)浓缩系统冻干，得到甘蔗渣香豆素。
74.(2)将4mg的苹果皮根皮苷、4mg的甘蔗渣香豆素和2mg的佐剂(丙二醇)混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
75.实施例4
76.本实施例提供一种所述的全植物源复配防腐剂，与实施例1的区别仅在于，不添加佐剂，步骤(2)为：将6.5mg的甘蔗渣香豆素和3.5mg的苹果皮根皮苷混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
77.实施例5
78.本实施例提供一种所述的全植物源复配防腐剂，与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为：将4mg的甘蔗渣香豆素、6mg的苹果皮根皮苷和1mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
79.实施例6
80.本实施例提供一种所述的全植物源复配防腐剂，与实施例1的区别仅在于，步骤(2)为：将3mg的甘蔗渣香豆素、6mg的苹果皮根皮苷和1mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
81.实施例7
82.本实施例提供一种全植物源复配防腐剂，与实施例1的区别仅在于，所述苹果皮根皮苷由以下方法制备得到：取苹果皮适量，105℃下干燥3h后，粉碎成25目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 95vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为100w，温度80℃，时间60min)，最后采用0.45μm的滤膜过滤，用真空冷冻(70℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到苹果皮根皮苷。
83.实施例8
84.本实施例提供一种全植物源复配防腐剂，与实施例1的区别仅在于，所述甘蔗渣香豆素由以下方法制备得到：取甘蔗渣适量，65℃下干燥2h后，粉碎成15目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 80vol％乙醇水溶液在4℃下提取12h，用20ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(42℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到甘蔗渣香豆素。
85.对比例1
86.本对比例提供一种含苹果皮根皮苷的防腐剂，所述含苹果皮根皮苷的防腐剂由以下方法制备得到：
87.(1)取苹果皮适量，65℃下干燥2h后，粉碎成15目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 80vol％乙醇水溶液在4℃下提取12h，用20ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(42℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到苹果皮根皮苷；
88.(2)将9mg的苹果皮根皮苷和1mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述含苹果皮根皮苷的防腐剂。
89.对比例2
90.本对比例提供一种含甘蔗渣香豆素的防腐剂，所述含甘蔗渣香豆素的防腐剂由以下方法制备得到：
91.(1)取甘蔗渣适量，105℃下干燥3h后，粉碎成25目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 95vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为100w，温度80℃，时间60min)，最后采用0.45μm的滤膜过滤，用真空冷冻(70℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到甘蔗渣香豆素。
92.(2)将9mg的甘蔗渣香豆素和1mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述含甘蔗渣香豆素的防腐剂。
93.对比例3
94.本对比例提供一种全植物源复配防腐剂，所述全植物源复配防腐剂由以下方法制备得到：
95.(1)取多穗柯叶片适量，65℃下干燥2h后，粉碎成15目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 80vol％乙醇水溶液在4℃下提取12h，用20ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(42℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到多穗柯叶片根皮苷；
96.取甘蔗渣适量，105℃下干燥3h后，粉碎成25目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 95vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为100w，温度80℃，时间60min)，最后采用0.45μm的滤膜过滤，用真空冷冻(70℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到甘蔗渣香豆素。
97.(2)将6mg的甘蔗渣香豆素、3mg的多穗柯叶片根皮苷和1mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述全植物源复配防腐剂。
98.对比例4
99.本对比例提供一种全植物源复配防腐剂，所述全植物源复配防腐剂由以下方法制备得到：
100.(1)取苹果皮适量，65℃下干燥2h后，粉碎成15目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 80vol％乙醇水溶液在4℃下提取12h，用20ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(42℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到苹果皮根皮苷；
101.取紫花地丁适量，105℃下干燥3h后，粉碎成25目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 95vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为100w，温度80℃，时间60min)，最后采用0.45μm的滤膜过滤，用真空冷冻(70℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到紫花地丁香豆素。
102.(2)将6mg的紫花地丁香豆素、3mg的苹果皮根皮苷和1mg的佐剂(1,2-己二醇)混
合，得到所述全植物源复配防腐剂。
103.对比例5
104.本对比例提供一种含苹果皮根皮苷的防腐剂，所述含苹果皮根皮苷的防腐剂由以下方法制备得到：
105.(1)取苹果皮适量，65℃下干燥2h后，粉碎成15目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 80vol％乙醇水溶液在4℃下提取12h，用20ml乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，用真空冷冻(42℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到苹果皮根皮苷；
106.(2)将6mg的苹果皮根皮苷、2.5mg的大黄提取物和1.5mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述含苹果皮根皮苷的防腐剂。
107.对比例6
108.本对比例提供一种含甘蔗渣香豆素的防腐剂，所述含甘蔗渣香豆素的防腐剂由以下方法制备得到：
109.(1)取甘蔗渣适量，105℃下干燥3h后，粉碎成25目的粗粉，准确称取干粉2.0g，置于锥形瓶中，加入20ml 95vol％乙醇水溶液，置超声波水浴中辅助提取(功率为100w，温度80℃，时间60min)，最后采用0.45μm的滤膜过滤，用真空冷冻(70℃，0.09mpa)浓缩系统冻干，得到甘蔗渣香豆素。
110.(2)将6mg的绿茶提取物、2.5mg的甘蔗渣香豆素和1.5mg的佐剂(1,2-己二醇)混合，得到所述含苹果皮根皮苷的防腐剂。
111.试验例1
112.提取与测定
113.测试样品：实施例1-3提供的苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素、实施例7提供的苹果皮根皮苷、实施例8提供的甘蔗渣香豆素、对比例3提供的多穗柯叶片根皮苷、对比例4提供的紫花地丁香豆素；
114.测试方法：
115.(1)根皮苷的测定采用紫外分光光度法测定：称取提取物干粉0.1g，以80％甲醇50ml为溶剂溶解定容至100ml为待测样品溶液。用根皮苷标样0.1g，以80％甲醇为溶剂溶解定容至10ml为标样储存液。再用80％甲醇稀释，配成1:100、1:80、1:60、1:40、1:20、1:1倍的系列浓度标样溶液。紫外分光光度法测定时在240～400nm间扫描最大紫外吸收峰(约为284nm)，然后测定吸光度，用80％甲醇调零，再根据标准曲线计算出根皮苷含量；
116.(2)香豆素的测定采用紫外分光光度法测定：称取提取物干粉0.1g，以无水乙醇为溶剂溶解定容至10ml为待测样品溶液。用根皮苷标样0.1g，以无水乙醇为溶剂溶解定容至10ml为标样储存液。再用无水乙醇稀释，配成1:100、1:80、1:60、1:40、1:20、1:1倍的系列浓度标样溶液。紫外可见分光光度法测定时在200～400nm间扫描最大紫外吸收峰(约为313nm)，用无水乙醇调零，然后测定吸光度，再根据标准曲线计算出香豆素含量；
117.具体测试结果如下表1所示：
118.表1
[0119][0120]
由表1测试数据可知，本发明中根皮苷来源于苹果皮，香豆素来源于甘蔗渣；两种主效成分提制方法的高效性，苹果皮根皮苷提取基于乙醇提取和乙酸乙酯萃取，提取率高达80％以上，甘蔗渣香豆素提取基于超声辅助乙醇提取，提取率高达90％以上。
[0121]
试验例2
[0122]
物理化学性质测试
[0123]
测试样品：实施例1-8提供的全植物源复配防腐剂；
[0124]
测试方法：取上述全植物源复配防腐剂，分别测定1wt％水溶液ph值、粘度，以及1wt％乙醇的ph、粘度；
[0125]
具体测试结果如下表2所示：
[0126]
表2
[0127][0128]
由表2测试数据可知，本发明制备得到的根皮苷和香豆素的防腐剂，粉状、且易溶于水和乙醇，其1wt％的水溶液的ph值为7-8，粘度为1-30mpa
·
s；其1wt％的乙醇ph值为8-9，粘度为6-45mpa
·
s。
[0129]
试验例3
[0130]
防腐抑菌试验
[0131]
测试样品：实施例1-8提供的全植物源复配防腐剂，以及对比例1-6提供的防腐剂；将上述各样品分别溶于丙二醇，得到1wt％的防腐剂溶液，并用以下方法测定其防腐能力；
[0132]
测试方法：
[0133]
(1)菌液的制备
[0134]
①
白色假丝酵母菌菌液的制备：用无菌生理盐水将其稀释成约1
×
107cfu/ml的菌悬液；
[0135]
②
黑曲霉孢子悬液的制备：用生理盐水将其稀释成约1
×
107cfu/ml的菌悬液；
[0136]
③
铜绿假单胞菌\金黄色葡萄球菌\大肠杆菌菌液的制备：从用无菌生理盐水将其稀释成约1
×
108cfu/ml的菌悬液；
[0137]
(2)防腐挑战试验
[0138]
挑战试验前应该先按照《化妆品安全技术规范》(2015版)的节菌落总数检验方法对样品进行菌落总数检测；
[0139]
接种：取0.3ml上述菌液，加入到装有30g或30ml样品.空白对照(不加防腐剂的样品)样品以及阳性对照(浓度为100μg/ml的卡那霉素)样品的无菌三角瓶中，彻底混合均匀。
接种后的样品置于室温避光培养，分别在2、7、14、28天计数；
[0140]
计数：培养至特定时间后(2、7、14、28天)，取1ml或1g接种后的样品，加入含有9ml无菌生理盐水的试管中，充分涡旋混匀。分别吸取0.2ml样液于2个无菌平皿中进行平板计数。如平板上生长菌落数较多，可进行10倍系列稀释，选择合适的稀释度进行平板计数。每个稀释度至少设置1个平行实验进行计数。黑曲霉菌和白假丝酵母在28℃
±
2℃培养2-3天；铜绿假单胞菌\金黄色葡葡球菌\大肠杆菌在37℃
±
2℃培养18-24h。
[0141]
菌落计数：分别在2、7、14、28天分离计算样品中活的细菌、真菌，每次计算完细菌总数、霉菌总数后将样品放回原处放置，以待下次观察用。
[0142]
具体测试结果如下表3所示：
[0143]
表3
[0144]
[0145][0146]
由表3测试数据可知，本发明提供的防腐剂配方的高效性和生物兼容性，该防腐剂仅含苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素两种主效成分和少量佐剂，可添加到液状和膏状化妆品产品中，抑菌防腐效果显著，且抑菌效果稳定，28天后细菌和真菌的菌落数量基本菌不超过10cfu/g。
[0147]
试验例4
[0148]
mic实验
[0149]
测试样品：实施例1-8提供的全植物源复配防腐剂，以及对比例1-6提供的防腐剂；
[0150]
测试方法：最小抑菌浓度mic值：以灭菌后的营养肉汤、沙氏培养基为稀释液，利用二倍稀释法对测试样品进行稀释，后向稀释液中接种，接种的菌液浓度分别为：大肠埃希氏菌1
×
108cfu/ml、金黄色葡萄球菌1
×
108cfu/ml、铜绿假单胞菌1
×
107cfu/ml、白色念珠菌1
×
106cfu/ml、黑曲霉1
×
105cfu/ml。35℃培养36h(细菌)、28℃培养48h(真菌)后观察结果。其中，细菌采用微量液体稀释法，在培养终点前3h，加入ttc试剂，继续培养，若培养液变红，
则认定此浓度不能抑制微生物生长，若培养液未变红，则认定为未变红的培养液中的最小药剂浓度为此抑菌剂对此微生物的最小抑菌浓度；
[0151]
具体测试结果如下表4所示：
[0152]
表4
[0153][0154][0155]
由表4测试数据可知，本发明提供的防腐剂配方对大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度为1.00μg/ml以下，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.50μg/ml以下，对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为0.50μg/ml以下，对白色念珠菌的最小抑菌浓度为0.50μg/ml以下，对黑曲霉的最小抑菌浓度为0.50μg/ml以下。说明本发明所述苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素的防腐剂在较低的浓度下即具有较高的防腐抑菌能力。
[0156]
试验例5
[0157]
抑菌圈实验
[0158]
测试样品：实施例1-8提供的全植物源复配防腐剂，以及对比例1-6提供的防腐剂；
[0159]
测试方法：将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌分别接种mh液体培养基上，在37℃下培养24h；白色念珠菌接种沙保弱液体培养基，在25℃下培养5d。用生理盐水将四种细菌培养物分别稀释成浓度为1.0
×
106cfu/ml的菌悬液。
[0160]
用无菌棉签分别将上述四种菌悬液涂布在营养琼脂平板上制成菌苔，然后取直径为3cm的灭菌滤液圆片。分别取实施例以及对比例的样品，再分别贴在四种不同菌悬液制成的平板上。细菌培养24h，真菌培养5d，观察结果。纸片法抑菌直径≥10mm为有效，抑菌直径≤10mm为无效；
[0161]
具体测试结果如下表5所示：
[0162]
表5
[0163]
[0164][0165]
由表5测试数据可知，本发明提供的防腐剂配方对大肠杆菌的抑菌圈直径为15～21mm，金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为13～23mm，绿脓杆菌的抑菌圈直径为13～24mm，白色念珠菌的抑菌圈直径为16～24mm说明本发明所述防腐剂配方的高效性和生物兼容性，该防腐剂仅含苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素两种主效成分相互配合，具有协同增效的作用，能够进一步提高抑菌防腐效果。
[0166]
试验例6
[0167]
功效测试
[0168]
测试样品：实施例1-8提供的全植物源复配防腐剂，以及对比例1-6提供的防腐剂；
[0169]
测试方法：
[0170]
i.抗氧化能力测试——dpph
·
清除实验
[0171]
(1)实验原理
[0172]
dpph
·
又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代dpph
·
，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
[0173]
(2)试剂配制
[0174]
配制0.2mmol/l的dpph
·
乙醇溶液；配制0.1％各样品水溶液及1mg/ml的vc溶液作为阳性对照样品。
[0175]
(3)实验步骤
[0176]
2ml样品溶液+2mldpph
·
溶液于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值a1；2ml样品溶液+2ml乙醇于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值a2；2mldpph
·
溶液+2ml乙醇于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值a0；
[0177][0178]
ii.晚期糖基化终产物清除实验测试抗老化
[0179]
样品测试：
[0180]
(1)精密吸取上述不同浓度防腐剂溶液(对照用缓冲液代替)各5ml，分别加入牛血清白蛋白20mg和葡萄糖90.1mg，震荡均匀，作为供试品。
[0181]
(2)阴性对照：精密称取牛血清白蛋白20mg和葡萄糖90.1mg，加入磷酸缓冲液5ml，震荡均匀，作为阴性对照。
[0182]
(3)将上述各待测样品放置于恒温恒湿培养箱中，在60℃条件下孵育40h。40h后取
出各样品，用酶标仪对其进行检测，荧光激发/发射波长为370/440nm，记录荧光吸收值。
[0183]
抑制率的计算公式如下：
[0184][0185]
具体测试结果如下表6所示：
[0186]
表6
[0187][0188]
由表6测试结果可知，本发明提供的防腐剂dpph自由基清除率达到65％以上，ages
的抑制率达到60％以上，说明本发明所述防腐剂含有苹果皮根皮苷和甘蔗渣香豆素两种主效成分除能进一步提高防腐的能力和持效性，还具有抗氧化抗糖化的功效性能。
[0189]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的全植物源复配防腐剂及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。