小檗碱及其衍生物与维生素B12的组合的制作方法

小檗碱及其衍生物与维生素b12的组合
技术领域
1.本发明涉及用于控制血糖和体重(例如治疗糖尿病)的组合物和方法的领域，更具体地涉及一种组合、组合物或试剂盒，其包含(i)小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物(例如二氢小檗碱(dhb))和(ii)维生素b12(vb12)，用于控制血糖和体重，同时改善bbr或dhb相关的副作用，如vb12减少、胃肠不适和排便减慢。


背景技术：

2.最近的研究表明，一种名为黄连素或小檗碱(bbr，一种从具芒小檗(berberis aristata)和黄连(coptis chinensis)中提取的天然植物生物碱)的中药或二氢小檗碱(dhb，bbr的氢化衍生物)可用于控制心律失常、减肥、降低血脂、降低血压、降低血糖和治疗t2dm。参见dong,h.等人,小檗碱治疗2型糖尿病：系统评价和荟萃分析(berberine in the treatment of type 2diabetes mellitus:a systemic review and meta-analysis).《循证补充与替代医学》(evid based complement alternat med),2012.2012:p.591654.12；以及dong,h.等人,小檗碱对血脂的影响：随机对照试验的系统评价和荟萃分析(the effects of berberine on blood lipids:a systemic review and meta-analysis of randomized controlled trials).《药用植物》(planta med),2013.79(6):第437-46页。具体来说，dhb是bbr代谢物之一，是通过肠道微生物群内的硝基还原酶还原的产物。参见例如mohammad,m.等人,小檗碱和二氢小檗碱对胰脂肪酶的抑制作用：对接模拟和实验验证的研究(inhibition of pancreatic lipase by berberine and dihydroberberine:an investigation by docking simulation and experimental validation).《药物化学研究》(medicinal chemistry research),2013.22(5):第2273-2278页；以及feng,r.等人,通过肠道微生物群将小檗碱转化为肠道可吸收的形式(transforming berberine into its intestine-absorbable form by the gut microbiota).《科学报告》(scientific reports),2015.5,12155 doi:10.1038/srep12155。
3.然而，与二甲双胍类似，bbr或dhb在回肠末端和tcii受体合成处会破坏ca依赖性吸收，由于其ca依赖性回肠膜拮抗作用，vb12-if和vb12-tcii的水平可能会受影响，从而可能影响vb12水平。另外，bbr或dhb可能改变肠道平衡，如短链脂肪酸含量、肠道微生物群多样性和丰富度。也就是说，存在一些与bbr或dhb相关的副作用。因而，迫切需要找到一种有效的策略来改善不希望的副作用，包括vb12减少、胃肠不适和排便减慢。


技术实现要素：

4.提供发明内容以便以简化形式介绍概念的选择，这些概念将在下面的详细描述中进一步描述。本发明内容既不旨在标识所要求保护的主题的关键特征或基本特征，也不旨在用于限制所要求所保护的主题的范围。
5.本发明涉及一种(i)小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物(尤其是二氢小檗碱(dhb))；和(ii)维生素b12(vb12)的组合或用途，用于控制血糖或体重
或治疗糖尿病(例如2型糖尿病(t2dm))，同时改善bbr或dhb相关的副作用。具体来说，本技术的发明人发现bbr或dhb可能具有与二甲双胍相似的途径，因此也影响vb12的吸收。还发现bbr或dhb相关的副作用(例如vb12缺乏)可以通过vb12补充剂(例如人造形式的vb12，如氰钴胺素)的组合来成功减轻。根据本发明，bbr或dhb和维生素b12的组合可以通过促进转钴胺素(transcobalamin)ii受体合成、降低同型半胱氨酸水平和维持肠道平衡，如短链脂肪酸含量、肠道微生物群多样性和丰富度，来改善维生素b12减少。
6.本发明的一个方面提供了一种控制血糖或体重或治疗糖尿病(例如2型糖尿病(t2dm))的方法，包括向有需要的哺乳动物施用组合，组合包含：(i)有效量的小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物；和(ii)维生素b12(vb12)。在一些实施方案中，组合有效改善bbr或bbr衍生物相关的副作用。
7.在一些实施方案中，组合包含(i)bbr的氢化衍生物，即二氢小檗碱(dhb)；和(ii)vb12。
8.在一些实施方案中，副作用包括胃肠不适、排便减慢或vb12减少。具体来说，副作用可能包括vb12减少。
9.在一些实施方案中，组合制备为食品、饮料、补充剂或药物制剂。
10.在一些实施方案中，组合呈栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、膜剂、(微)胶囊剂、气雾剂、滋补剂、液体混悬剂、注射剂或糖浆剂的形式。
11.在一些实施方案中，组合通过选自口服、静脉内注射、肌肉内注射、腹膜内和舌下施用的一种或多种途径施用。
12.在一些实施方案中，组合可以保持回肠末端的钙依赖性膜功能，促进tcii受体合成，和/或缓和或提高哺乳动物日常的vb12-if水平和使得同型半胱氨酸水平降低。
13.在一些实施方案中，组合可维持哺乳动物日常肠道平衡，如哺乳动物短链脂肪酸(scfa)含量正常限度，以及哺乳动物肠道微生物群的多样性和丰富度。
14.在一些实施方案中，哺乳动物是人类或动物。
15.在一些实施方案中，bbr或dhb与vb12的比率为2:98至98:2。该比率优选6:94至94:6，更优选16:84至84:16，最优选32:68至68:32。
16.在一些实施方案中，bbr或dhb与vb12组合被配置为以每份20mg至600mg的剂量施用。优选地，以每份40mg至300mg的剂量施用，施用可以持续至少两周。
17.在一些实施方案中，bbr或dhb与vb12组合一天施用一次、一天施用两次或一天施用三次。
18.在一些实施方案中，bbr或dhb与vb12同时或依次施用。
19.本发明的另一方面提供了一种组合物，其包含(i)小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物；和(ii)维生素b12(vb12)的组合，组合物用于控制血糖或体重并改善bbr或bbr衍生物相关的副作用。具体来说，组合物可以包含(i)bbr的氢化衍生物，即二氢小檗碱(dhb)；和(ii)vb12。
20.在一些实施方案中，组合物用于治疗糖尿病。
21.在一些实施方案中，副作用包括胃肠不适、排便减慢或vb12减少。
22.在一些实施方案中，组合物是食物、饮料、补充剂或药物制剂。
23.在一些实施方案中，组合物呈栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、膜剂、(微)胶囊剂、
气雾剂、滋补剂、液体混悬剂、注射剂或糖浆剂的形式。
24.在一些实施方案中，组合物通过口服、静脉内注射、肌肉内注射、腹膜内或舌下途径向哺乳动物施用。
25.在一些实施方案中，组合物能够保持回肠末端的ca依赖性膜功能，促进tcii受体合成，和/或缓和或提高哺乳动物日常的vb12-if水平和使得同型半胱氨酸水平降低。
26.在一些实施方案中，组合物可维持哺乳动物日常肠道平衡，例如维持哺乳动物短链脂肪酸(scfa)含量正常限度，以及哺乳动物肠道微生物群的多样性和丰富度。
27.在一些实施方案中，bbr或dhb与vb12的比率为2:98至98:2。该比率优选6:94至94:6，更优选16:84至84:16，最优选32:68至68:32。
28.在一些实施方案中，组合物被配置为以每份20mg至600mg的剂量施用。优选地，以每份40mg至300mg的剂量施用，施用可以持续至少两周。
29.在一些实施方案中，组合物一天施用一次、一天施用两次或一天施用三次。
30.本发明的另一方面涉及一种包含小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物与维生素b12(vb12)组合的组合物的用途，其用于控制血糖或体重。在一些实施方案中，组合物用于治疗糖尿病，和/或改善bbr或bbr衍生物相关的副作用，包括胃肠不适、排便减慢或vb12减少。
31.在一些实施方案中，组合物包含bbr的氢化衍生物，即二氢小檗碱(dhb)。
32.本发明的又一方面涉及一种试剂盒，包含(i)包含至少一剂小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物的第一组分；(ii)包含至少一剂维生素b12(vb12)的第二组分，以及vb12和小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物的说明，试剂盒用于控制血糖或体重或治疗糖尿病。
33.在一些实施方案中，vb12和小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物同时或依次施用。例如，bbr或dhb与vb12的比率可以是2:98至98:2。该比率优选6:94至94:6，更优选16:84至84:16，最优选32:68至68:32。bbr或dhb与vb12组合可以被配置为以每份20mg至600mg的剂量施用。优选地，以每份40mg至300mg的剂量施用，施用可以持续至少两周。bbr或dhb与vb12组合可以一天施用一次、一天施用两次或一天施用三次。
34.在一些实施方案中，试剂盒包括bbr的氢化衍生物，即二氢小檗碱(dhb)。
35.在一些实施方案中，组合施用改善bbr或dhb相关的副作用，包括胃肠不适、排便减慢或vb12减少。
36.在又一方面，本发明提供了一种制备用于控制血糖或体重或治疗糖尿病的组合物的方法，其包括制备(i)小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物；和(ii)维生素b12(vb12)。
37.在一些实施方案中，方法包括制备bbr的氢化衍生物，即二氢小檗碱(dhb)。
38.在一些实施方案中，bbr或dhb与vb12的比率为2:98至98:2。该比率优选6:94至94:6，更优选16:84至84:16，最优选32:68至68:32。
39.在一些实施方案中，组合物以栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、膜剂、(微)胶囊剂、气雾剂、滋补剂、液体混悬剂、注射剂或糖浆剂的形式制备。
40.如本文所用，术语“或”旨在包括“和”和“或”。换句话说，术语“或”也可以被替换为“和/或”。
41.如本文所用，除非上下文另有明确指示，否则单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”旨在也包括复数形式。
42.如本文所用，术语“哺乳动物”、“动物”或“受试者”可互换使用以指代可以应用或施用本公开的方法及组合物的任何动物。动物可能患有疾病或其他疾病，但动物不需要生病才能受益于本公开的方法及组合物。因此，任何动物都可以利用所公开的组合、组合物或试剂盒或成为所公开方法的接受者。动物可以为禽鸟类、爬行动物和哺乳动物。在某些实施方案中，动物可以是包括非灵长类和灵长类的哺乳动物。典型地，本文所指的动物包括人或驯养动物。例如，驯养动物包括狗、猫或任何农场动物(包括马、牛、绵羊、山羊、猪或鸡)。更典型地，动物可以是人。
43.如本文所用，术语“包含”或“包括”或其变化形式指以下情况，其中所述术语以其非限制性含义使用，指包括该词语后的项目，但并不排除未特别提及的项目。其还包括更限制性的动词
‘
基本上由
……
组成’和
‘
由
……
组成’。
44.如本文所用，术语“施用”是指将所公开的组合、组合物或试剂盒递送给受试者的过程。组合、组合物或试剂盒可以以各种方式施用，包括口服、胃内和肠胃外(指静脉内和动脉内以及其他合适的肠胃外途径)，等等。
45.如本文所用，术语“有效量”是指实现如本文所教导的效果所需的量。本文的有效量包括但不限于，在受试者体内控制血糖或体重或治疗糖尿病所必需的量，和/或在受试者体内改善bbr或bbr衍生物相关的副作用(如胃肠不适、排便减慢或vb12减少)所必需的量；和/或保持回肠末端的ca依赖性膜功能，促进细胞表面转钴胺素ii(tcii)受体合成，和/或缓和或提高哺乳动物日常的vb12-if水平和使得同型半胱氨酸水平降低所必需的量；和/或维持哺乳动物日常肠道平衡，维持哺乳动物短链脂肪酸(scfa)含量正常限度，以及哺乳动物肠道微生物群的多样性和丰富度所必需的量。根据本公开，合适的单剂量大小是当在合适的时间段内施用一次或多次时能够达到上述效果的剂量。
46.如本文所用，术语“药学上可接受的”是指药学上、生理学上、饮食上或营养学上可接受的，是指在合理的医学判断的范围内的那些组合物或试剂、材料或组合物和/或其剂型的组合，其适用于与人类和动物的组织接触，没有过多的毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
附图说明
47.图1a是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)在第0、2、4、6、8、10和12周时的血糖水平的图。
48.图1b是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)在第0、2、4、6、8、10和12周时的血清vb12水平的图。
49.图1c是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)在第0、2、4、6、8、10和12周时的holo-tcii水平的图。
50.图1d是分别未经补充、补充dhb或补充dhb+vb12持续3个月的3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)皮下注射胰岛素后0、30和90分钟的血糖水平的图。
51.图1e是分别未经补充、补充dhb或补充dhb+vb12持续3个月的3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)的hba1c图。
52.图1f是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)在第0、2、4、6、8、10和12周时的血清同型半胱氨酸水平的图。
53.图2a是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)在第0、6和12周时粪便中乙酸含量图。
54.图2b是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)在第0、6和12周时粪便中丙酸含量图。
55.图2c是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)在第0、6和12周时粪便中丁酸含量图。
56.图2d是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)肠道微生物组的稀疏度估计图。
57.图2e是3组hfd小鼠(con；dhb；dhb+vb12)肠道微生物组的香农多样性估计图。
具体实施方式
58.现将详细参考本发明的优选实施方案，进一步说明其实施例。虽然将结合优选实施方案描述本发明，但应当理解它们并不旨在将本发明限制于这些实施方案。相反，本发明旨在覆盖替代、修改和等同方案，其可以包括在如权利要求书所限定的本发明的精神和范围之内。此外，在本发明的详细描述中，阐述了许多具体细节以便提供对本发明的透彻理解。然而，对于本领域的普通技术人员显而易见的是，可以在没有这些具体细节的情况下实践本发明。在其他情况下，没有详细描述众所周知的方法、程序、组分和其他特征，以免不必要地模糊本发明的各方面。
59.一般而言，本发明的各种实施方案提供了组合、组合药物或组合物以及组合试剂盒，其包含(i)小檗碱(bbr)或其药学上可接受的盐、酸、酯、类似物或衍生物(尤其是二氢小檗碱(dhb))；和(ii)维生素b12(vb12)，用于控制血糖或体重或预防/治疗糖尿病(例如2型糖尿病(t2dm))，同时改善bbr或dhb相关的副作用。
60.具体来说，本技术的发明人发现bbr或dhb可能具有与二甲双胍相似的途径，因此也影响vb12的吸收。
61.常规二甲双胍因其对碳水化合物代谢(如用于治疗2型糖尿病(t2dm)患者)、体重减轻和血管保护的有益作用而闻名。然而，据报道，二甲双胍具有许多严重的副作用。例如，由于二甲双胍相关的维生素b12(vb12)减少，长期二甲双胍治疗的患者被发现存在贫血和胃肠不适的风险。vb12已知为对人类健康重要的水溶性维生素，在dna合成、最佳造血和神经功能中起着非常重要的作用。vb12吸收不良的临床实验主要表现为血液学和神经认知功能障碍。此外，由于vb12可以参与同型半胱氨酸(hcy)代谢的最重要途径，vb12缺乏可能导致血浆hcy浓度升高，这与心血管疾病密切相关，在t2dm患者中尤为如此。另外，许多评估t2dm患者服用二甲双胍的研究报告称，vb12缺乏的患病率在5.8％至33％之间。虽然先前的出版物报道了与二甲双胍相关的vb12减少的许多原因，但我们认为以下两种机制特别重要。
62.首先，二甲双胍在回肠末端和转钴胺素ii受体合成处阻止钙依赖性吸收。值得注意的是，vb12内在因子(if，一种与vb12结合的糖蛋白)复合物，即vb12在胃肠道中的存在形式，在回肠末端被回肠细胞表面受体的吸收是钙(ca)依赖性的。已知二甲双胍对ca依赖性膜作用有影响。首先，二甲双胍的疏水尾部，如甲基，可以延伸到膜的烃核心，影响ca依赖性吸收，进而影响vb12-if水平。此外，二甲双胍的质子化双胍基团可以在膜表面提供正电荷，然后可以取代如ca
2+
的二价阳离子。另外，细胞表面的转钴胺素ii(tcii，一种与vb12的蛋白水解释放相互作用并被转运穿过人体细胞的受体)受体合成也依赖于ca。由于二甲双胍的
疏水性甲基和质子化双胍基团，可能干扰tcii受体的合成，抑制vb12的蛋白水解释放的结合，从而导致vb12减少。
63.其次，二甲双胍可以改变回肠形态结构。vb12-if复合物的水平还取决于回肠形态结构，而回肠形态结构依赖于肠道微生物的多样性和丰富度。据我们所知，在经二甲双胍治疗的患者中，经常观察到胃肠不良反应，因为二甲双胍可延缓葡萄糖肠道吸收、减慢小肠蠕动并刺激细菌过度生长，从而改变回肠形态结构并抑制vb12吸收。
64.最近的研究表明，一种名为黄连素或小檗碱(bbr，一种从具芒小檗和黄连中提取的天然植物生物碱)的中药或二氢小檗碱(dhb，bbr的氢化衍生物)可用于控制心律失常、减肥、降低血脂、降低血压、降低血糖和治疗t2dm。
65.根据对bbr或dhb和二甲双胍之间相似性的研究，我们发现可以控制血糖的bbr或dhb也可能影响vb12的吸收，其途径可能与二甲双胍相似。
66.首先，bbr或dhb在回肠末端和tcii受体合成处破坏了ca依赖性吸收。
67.一开始，我们认为bbr或dhb的疏水尾部，如甲基和苯基，可能延伸到膜的烃核心，这会影响ca依赖性吸收。一般来说，质子化有时发生在醚键上，bbr和dhb都有这个官能团，因此我们认为bbr或dhb可能会给膜表面带来正电荷，这可能会改变膜电位、干扰回肠末端的ca依赖性膜功能并降低vb12-if水平。此外，由于bbr或dhb的疏水尾部和质子化醚键，也可能干扰tcii受体的合成，阻止vb12的蛋白水解释放的结合，从而导致vb12水平降低。换句话说，bbr或dhb通常可以作为ca通道阻滞剂。因此，由于ca依赖性回肠膜拮抗作用，vb12-if和vb12-tcii的水平可能会受到bbr或dhb的影响，从而可能影响vb12水平。
68.其次，bbr或dhb改变肠道平衡，如短链脂肪酸含量、肠道微生物群多样性和丰富度。
69.bbr或dhb可能具有延缓葡萄糖吸收、改变小肠蠕动和促进细菌过度生长的途径。此外，bbr或dhb可产生大量产短链脂肪酸(scfa)的细菌，可能增加scfa的比例和含量，进而降低肠道微生物的丰度和构成比。因此，与二甲双胍相比，bbr或dhb可能会诱导更显著的肠道微生物变异，然后改变回肠形态结构。另外，一些患者服用具有广谱抗菌特性的bbr或dhb，可能会出现一些偶然的胃肠不适和排便减少(便秘)等不良症状。还可参见例如zhang,x.等人,小檗碱和二甲双胍在治疗高脂饮食诱导的大鼠肥胖过程中对肠道微生物群群的调节作用(modulation of gut microbiota by berberine and metformin during the treatment of high-fat diet-induced obesity in rats).《科学报告》(sci rep),2015.5:p.14405。先前在糖尿病小鼠中进行的实验表明，bbr与水苏糖(sta，一种益生元，可增强有益细菌的生长和活性)组合可改善葡萄糖代谢，但单独的bbr和bbr与sta都将肠道微生物多样性和丰富度降低到相同的程度，这归因于bbr的广谱抗菌特性。li,c.-n.等人,通过调节糖尿病小鼠的肠道微生物群和粪便代谢组学，小檗碱与水苏糖组合比单独使用小檗碱诱导更好的糖代谢(berberine combined with stachyose induces better glycometabolism than berberine alone through modulating gut microbiota and fecal metabolomics in diabetic mice).《植物疗法研究》(phytotherapy research),2020.34(5):第1166-1174页。
70.因此，我们发现，具有广谱抗菌特性的bbr或dhb可显著降低肠道微生物活性，进而改变回肠形态结构，导致vb12-if水平下降，进一步减少vb12、竞争性抑制或使vb12吸收失
活。
71.总之，迫切需要找到一种有效的策略来减轻上述与bbr或dhb相关的副作用，包括vb12减少。根据本发明，发现bbr或dhb相关的副作用(例如vb12缺乏)可以通过与vb12的组合成功地减轻。具体来说，根据本发明的bbr或dhb和维生素b12的组合可以通过促进转钴胺素ii受体合成、降低同型半胱氨酸水平和维持肠道平衡来改善维生素b12减少。值得注意的是，相信本发明是首次提出并实施dhb与vb12的组合。
72.以下实施例是对本发明的选择实施方案的说明，并不意味着限制本发明的范围。实施例
73.将8周龄的高脂饮食(hfd，以能量计含60％脂肪)小鼠分为三组：(1)非补充组(con，n＝5)；(2)dhb补充组(dhb，100mg/kg，n＝5)；(3)dhb与vb12组合补充组(dhb+vb12，dhb:vb12＝100mg/kg:200mg/kg，n＝5)。每天一次在每次主餐前通过在生理盐水溶液中管饲法向所有小鼠(2g/kg体重)施用这些物质，持续3个月。实施例1.在hfd小鼠中促进tcii受体合成并降低同型半胱氨酸水平
74.在第0、2、4、6、8、10和12周，在禁食状态下从尾尖采集血液样品以测量血清vb12、血清同型半胱氨酸、葡萄糖和血清全转钴胺素ii(holo-tcii，一种用于tcii受体合成的生物活性组分)，并称重小鼠。补充3个月后，测量糖化血红蛋白(hba1c)。此外，在补充3个月后，皮下注射胰岛素(0.4u/kg，0.05ml/10g体重)后第0、30、90分钟进行胰岛素耐量试验。一般来说，将生化vb12和holo-tcii缺乏定义为血清vb12《300pg/ml和holo-tcii《50pg/ml。升高的同型半胱氨酸定义为》15μm/l。使用免疫分析仪测量维生素b12水平和holo-tcii，以确认tcii受体合成和vb12水平的改善。使用化学发光微粒免疫测定法测量血清同型半胱氨酸水平以显示vb12水平。用自动糖化血红蛋白分析仪测定hba1c，可显示试验期间血糖控制的效果。血液分析仪使用血糖和胰岛素测量值，反映了当时血糖控制的效果。实验室重量天平记录小鼠体重的变化，以显示体重范围。图1显示了3组hfd小鼠的血糖(图1a)、血清vb12(图1b)、holo-tcii(图1c)、胰岛素耐量(图1d，血糖)、hba1c(图1e)和血清同型半胱氨酸(图1f)的结果。
75.如图1a所示，补充后dhb和dhb+vb12组的血糖水平显著降低。3个月后，第12周时，与对照组相比，dhb组和dhb+vb12组的血糖水平分别下降了约35％和甚至47％。如图1b所示，补充3个月后，dhb组的血清总vb12会显著降低，但dhb+vb12组与其他组相比基本维持在正常水平(》300pg/ml)。如图1c所示，补充3个月后，dhb+vb12组的血清holo-tcii显著增加，约增加93％。如图1d所示，皮下注射胰岛素后，3组的血糖水平均随时间下降；90分钟时，dhb组和dhb+vb12组的血糖水平分别比对照组低15％和31％，说明dhb+vb12对糖代谢的改善程度高于dhb。如图1e所示，补充3个月后，与对照组相比，dhb组和dhb+vb12组的hba1c水平分别下降了约20％和甚至30％。如图1f所示，dhb+vb12组的同型半胱氨酸水平显著降低，甚至转为正常水平(《15μm/l)。因此，dhb+vb12补充不仅有利于血糖和胰岛素的控制，而且可以促进tcii受体合成，降低hfd小鼠的同型半胱氨酸水平。实施例2.维持和改善hfd小鼠的肠道平衡，如scfa含量、肠道微生物群多样性和丰富度
76.在小鼠第0、6和12周时收集粪便样品并储存在液氮中以通过气相色谱法(gc)测试所有组中的三种主要scfa含量，包括乙酸、丙酸和丁酸。还使用粪便dna试剂盒从粪便样品
中提取肠道微生物组的总基因组细菌dna，以分析肠道微生物群的多样性和丰富度。基于16s rrna分析肠道微生物组的组成。详细过程如下：每个原始16s rrna读取都考虑以下标准：(1)至少在一端与条形码完美匹配；(2)与16s rrna基因v3-v4区引物的至少一端进行blast匹配；(3)长度在400bp到600bp之间，不包括条形码和引物；(4)不超过两个未定碱基。不符合这些要求的读数被排除在进一步分析之外。然后使用最近比对空间终止算法将高质量读数与greengenes数据库进行比对，以去除低质量序列，包括潜在的嵌合序列。共获得160,223个操作分类单元(otu)，相似度为97％。选择所有样本中每个otu最丰富的序列作为代表序列。然后使用otu定量数据计算香农多样性指数(shannon’s diversity index)和稀疏度估计(rarefaction estimate)。稀疏度和香农多样性指数分析表明，测序深度覆盖了罕见的新系统型(phylotype)和大部分多样性。图2显示了乙酸(图2a)、丙酸(图2b)、丁酸(图2c)含量以及肠道微生物组的稀疏度估计(图2d)和香农多样性(图2e)估计的结果。
77.如图2a-2c所示，dhb+vb12补充组的乙酸、丙酸和丁酸水平显著高于非补充组和dhb补充组。在第12周，dhb+vb12组乙酸、丙酸和丁酸的含量比对照组和dhb组分别高88％、74％和92％，以及82％、53％和79％。也就是说，dhb+vb12可以在一定程度上改善和恢复hfd小鼠粪便中的scfa含量。此外，与其他组相比，dhb+vb12可以增强肠道微生物组的丰富度和多样性(图2d-2e)。总体而言，dhb+vb12可以维持和改善hfd小鼠的肠道平衡，如scfa含量、肠道微生物群多样性和丰富度。
78.虽然在本技术实施例中以1:2的比率施用dhb和vb12，但该比率可视具体情况而变化。其他比率的dhb和vb12，如32:68至68:32，16:84至84:16，6:94至94:6或甚至2:98至98:2的比率等均可以。
79.尽管本文已经说明了本发明的特定实施方案和实施例，但本领域技术人员将理解，可以在不脱离本发明的原则的情况下进行任何修改和变动。上面的实施例和说明并不限制本发明的范围。本发明的实施方案的任何组合，以及其任何明显的扩展或类似物，均在本发明的范围内。此外，本发明涵盖旨在实现相同目的而存在的任何布置，以及落入所附权利要求书的范围内的所有这些变动和修改。
80.除非另有明确说明，否则本说明书中公开的所有特征(包括任何所附权利要求书、摘要和附图)可以由具有相同、等同或相似目的的替代特征代替。因此，除非另有明确说明，否则所公开的每个特征是等同或相似特征的通用系列的一个实例。其他实施方案
81.应当理解，虽然已经结合本发明的详细描述和附图描述了本发明，但前述描述和附图仅旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其他方面、优点和修改在所附权利要求书的范围之内。本文引用的所有出版物均以引用方式全文并入。