一种多通路美白组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及一种多通路美白组合物及其应用，属于化妆品领域。


背景技术：

2.随着物质生活的不断改善，亚洲女性对于皮肤白皙的需求日益强烈，也是广大中国女性关注的热点话题。目前，大多数美白剂的美白作用机制主要通过抑制酪氨酸酶活性、阻断黑色素生成、抗蓝光光毒性、抑制黑色素向角质细胞迁移、抑制炎症色素沉着等方面来改善皮肤黑色素沉着、肤色暗沉等问题。
3.而大部分美白剂的主要作用机理如下：
4.1、抑制酪氨酸酶活性
5.酪氨酸酶作为黑色素生成过程中的关键催化酶，通过控制多巴转变为多巴醌，在黑色素合成过程中起到关键作用，通过抑制酪氨酸酶活性，可以有效控制黑色素生成。
6.2、抑制黑色素转移
7.黑色素在真皮层黑素细胞中产生后，通过黑素小体从真皮层转运到表皮层，从而使肤色变黑，通过抑制黑色素转运，可以显著减少表皮层黑色素含量，有效达到皮肤白皙的效果。
8.3、抗蓝光光毒性
9.在415nm的蓝光照射到皮肤上时，会影响到黑色素细胞的细胞膜上的opsin3蛋白，通过信号传导促进黑素小体的生成，使更多黑色素被转运到皮肤表面，影响皮肤肤色，并且蓝光照射剂量与色素沉着程度呈正相关。
10.4、抑制炎症因子色素沉着：
11.前列腺素(pge2)在uv介导下，通过磷脂酰肌醇途径调整细胞骨架蛋白，使黑素细胞树突增多，pge2还通过磷脂和钙依赖性激酶刺激黑素细胞上伪足形成及黑素颗粒脱落促进黑素细胞和角质形成细胞之间的黑素转移。
12.一氧化氮(no)能够调节no/环鸟苷酸依赖的蛋白激酶信号转导通路，改变酪氨酸酶活性，也通过鸟苷酸环化酶刺激环磷酸鸟苷合成，进而诱导黑素生成。
13.内皮素(et-1)在皮肤组织中主要作为角质形成细胞和黑素细胞之间相互作用的桥梁，介导炎症发生，参与黑素细胞发育和黑素合成过程。并且，在uv介导下，角质形成细胞能够分泌et-1，以旁分泌形式作用于黑素细胞发挥色素沉着效应。在碱性成纤维细胞生长因子协同作用下，et-1刺激黑素细胞增殖和黑素生成。同时，et-1能够与黑素细胞上的g蛋白耦联的内皮素b型受体结合，增强酪氨酸酶活性，促进黑色素合成，延长树突长度及抑制黑素细胞凋亡。
14.炎症因子tnf-α、il-6可以由角质形成细胞分泌作用于黑素细胞，并参与调节uvb诱导黑素细胞增殖分化，进而刺激黑色素生成。
15.目前大多数美白剂都是通过单通路美白机理发挥美白作用，通过多通路发挥美白作用的美白产品鲜有报道。


技术实现要素：

16.针对上述问题，本发明提供了一种多通路美白组合物及其应用。本发明以聚谷氨酸钠、烟酰胺、透明质酸钠富勒烯溶液及玫红柳叶菜提取物为主要有效成分，制备成具有多通路美白功效的溶液，将其添加到护肤品中达到更好的美白护肤功效。经实验证明，该组合物对皮肤具有较强的美白作用，能够抑制黑色素生成，抵抗蓝光伤害，同时能够抑制炎症因子tnf-α、il-6及peg2活性，抑制活性因子no及et-1的活性，可以用于化妆品中改善肌肤色素沉着、肌肤暗沉、肤色不均等肌肤问题。
17.本发明的技术方案是：一种多通路美白组合物，其特征是，其组分及其重量比为：聚谷氨酸钠0.1-1.0％，烟酰胺1.0-5.0％，透明质酸钠富勒烯溶液1.0-10.0％，玫红柳叶菜提取物1.0-10.0％，1,3-丁二醇30.0-40.0％，纯化水补足100％。
18.优选配比：聚谷氨酸钠0.4％，烟酰胺2％，透明质酸钠富勒烯溶液6％，玫红柳叶菜提取物6％，1,3-丁二醇35％，纯化水补足100％。
19.其中，玫红柳叶菜提取物的主要成分为：槲皮素含量≥30％(w/w)，槲皮素-3-o-β-d-吡喃半乳糖苷含量≥10％(w/w)，番石榴苷含量≥14％(w/w)，槲皮素3-o-(6
”‑
没食子酰基)-β-d-半乳糖苷含量≥6％(w/w)。
20.其中，透明质酸钠富勒烯溶液的透明质酸钠的质量浓度为2％-6％，富勒烯的质量浓度为0.04％-0.06％，其余成分为水和1,3-丁二醇。
21.上述多通路美白组合物的制备方法，包括以下步骤：
22.s1：使用1,3-丁二醇分散聚谷氨酸钠，分散均匀后加入70-75℃的灭菌后纯化水，搅拌分散至完全溶解，然后降温至40-50℃形成均匀液体一；
23.s2：向液体一中依次加入烟酰胺、透明质酸钠富勒烯溶液和玫红柳叶菜提取物，搅拌混合均匀，然后定容至100％即可。
24.本发明还公开了上述组合物在制备多通路美白化妆品中的应用，其在化妆品中的添加量为5-10％，优选8％。所述化妆品包括但不限于精华水、乳液、面霜、面膜。
25.本发明还公开了制备多通路美白化妆品的方法，包括将美白组合物与化妆品领域常用的其他添加剂混合，并将混合物转化成美白化妆品。
26.本发明通过多通路美白，其中聚谷氨酸钠通过抑制酪氨酸酶活性，达到美白作用，烟酰胺通过抑制黑色素迁移到表皮层，达到美白作用。透明质酸钠富勒烯溶液通过抑制光毒性，达到抵抗蓝光伤害作用。玫红柳叶菜提取物通过抑制炎症因子tnf-α、il-6及pge2活性，抑制活性因子no及et-1(内皮素1)的活性，达到消炎，抑制炎症作用，从而抑制炎症性色素沉着。经实验证明，该组合物对皮肤具有较强的美白作用，可以用于化妆品中改善肌肤色素沉着、肌肤暗沉、肤色不均等肌肤问题。
27.本发明的技术效果是：本发明的组合物通过多通路美白，能够抑制黑色素生成，抵抗蓝光伤害，同时能够抑制炎症因子tnf-α、il-6及pge2活性，抑制活性因子no及et-1的活性，通过人体功效实验测试，该组合物具有很好的美白功能，功效显著。本发明的多通路美白组合物的制备方法简单易行，原料易于获取，适合大批量生产。
附图说明
28.图1不同测试样品对斑马鱼的黑色素生成抑制率检测结果，其中，**表示与阴性对
照相比，p《0.01；
29.图2不同测试样品的et-1表达量检测结果，其中，*表示与阴性对照相比，p《0.05。
具体实施方式
30.为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例，实施例不应视作对本发明保护范围的限定。
31.其中玫红柳叶菜提取物的获得方法为：1)取经干燥过后的玫红柳叶菜4kg经过浸泡、清洗表面的泥沙和盐分、然后再晾干，粉粹，过200目筛子，并采用钴60辐照灭菌处理，辐照强度为7500-8500kgy；2)将粉末浸泡在70％丙酮溶液中，反复4次，每次使用70％丙酮溶液800ml，合并滤液，减压浓缩至2000ml，分两次上diaion hp-20柱，依次采用去离子水、20％甲醇、40％甲醇、60％甲醇、70％甲醇溶液洗脱后相同流分合并浓缩成干粉，将diaion hp-20 60％meoh部位用水溶解后，上toyopearl hw-40(c)柱，依次用h2o，20％meoh，40％meoh，60％meoh，70％me2co溶剂系统洗脱。用硅胶柱层析对70％me2co洗脱部分进行分离，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，浓缩干燥得到玫红柳叶菜提取物。上述提取物中槲皮素含量为31.4-32.1％(w/w)，槲皮素-3-o-β-d-吡喃半乳糖苷含量为11.5-11.9％(w/w)，番石榴苷含量为15.4-16.2％(w/w)，槲皮素3-o-(6
”‑
没食子酰基)-β-d-半乳糖苷含量为7.2-7.6％(w/w)。
32.其中，透明质酸钠富勒烯溶液来源于赤峰福纳康生物技术有限公司，其中透明质酸钠的质量浓度为4％，富勒烯的质量浓度为5％，其余成分为水和1,3-丁二醇。
33.实施例1-5和对比例1-3：
34.实施例1-5和对比例1-3的多通路美白组合物配方如表1所示。
35.表1：实施例1-5和对比例1-3的成分列表(重量占比％)
[0036][0037]
上述多通路美白组合物的制备方法，其包括以下步骤：
[0038]
s1：使用1,3-丁二醇分散聚谷氨酸钠，分散均匀后加入70-75℃的灭菌后纯化水，搅拌分散至完全溶解，然后降温至45℃形成均匀液体一；
[0039]
s2：向液体一中依次加入烟酰胺、透明质酸钠富勒烯溶液、玫红柳叶菜提取物，搅拌混合均匀，然后定容至100％即可。
[0040]
实施例6：多通路美白精华水
[0041]
多通路美白精华水的成分如表2所示。
[0042]
表2：多通路美白精华水的成分列表
[0043][0044][0045]
精华水的制备方法：
[0046]
s1：分别加入a相中原料，加热至80～85℃搅拌溶解；
[0047]
s2：溶解完全后，开始降温，降至55～60℃时分别加入b相中成分，搅拌溶解分散均匀；
[0048]
s3：当温度降至40～45℃时，依次加入c相和d相成分，搅拌溶解分散均匀，即得精华水产品。
[0049]
实施例7：多通路美白精华乳
[0050]
多通路美白精华乳的成分如表3所示。
[0051]
表3：多通路美白精华乳的成分列表
[0052][0053]
精华乳的制备方法：
[0054]
s1：水相的制备：分别加入a相中原料，加热至80～85℃搅拌溶解；
[0055]
s2：油相的制备：分别加入b相中原料，加热至75～80℃熔解；
[0056]
s3：将a相与b相合相，开启均质(3000rpm)，均质12min，开始降温；
[0057]
s4：当温度降至65～70℃时加入c相，搅拌溶解，溶解完毕后继续降温；
[0058]
s5：当温度降至40～45℃时，加入d相成分，搅拌溶解分散均匀，即得精华乳产品。
[0059]
对比例4的制备方法同实施例7，区别点仅在于对比例4不含有多通路美白组合物，实施例7中所述多通路美白组合物所占用量加水补齐。
[0060]
实施例8：多通路美白精华霜
[0061]
多通路美白精华霜的成分列表如表4所示。
[0062]
表4：多通路美白精华霜的成分列表
[0063][0064]
精华霜的制备方法：
[0065]
s1：水相的制备：分别加入a相中原料，加热至80～85℃搅拌溶解；
[0066]
s2：油相的制备：分别加入b相中原料，加热至75～80℃熔解；
[0067]
s3：将a相与b相合相，开启均质(3000r/min)，均质12min；
[0068]
s4：均质完毕后，开始降温，当温度降至65～70℃时加入c相成分，搅拌溶解，溶解完毕后继续降温；
[0069]
s5：当温度降至40～45℃时，加入d相成分，搅拌溶解分散均匀，即得精华霜产品。
[0070]
实施例9：多通路美白面膜
[0071]
多通路美白面膜的成分列表如表5所示。
[0072]
表5：多通路美白面膜的成分列表
[0073][0074]
面膜液的制备方法：
[0075]
s1：分别加入a相中原料，加热至80～85℃搅拌溶解；
[0076]
s2：溶解完全后，开始降温，降至55～60℃时分别加入b相中成分，搅拌溶解分散均匀；
[0077]
s3：当温度降至40～45℃时，加入c相成分，搅拌溶解分散均匀，即得美白面膜产品。
[0078]
试验例1：体外斑马鱼胚胎抑制黑色素生成试验
[0079]
本实验采用t/shrh036-2021《化妆品黑色素抑制测试——斑马鱼胚胎测试方法》。
[0080]
实验原理：人体的黑色素是酪氨酸经过酪氨酸酶作用，氧化生成多巴，后者经氧化、脱羧等反应转变成吲哚醌，最后吲哚醌聚合为黑色素。斑马鱼体内的色素形成相关基因在序列和调控机制上和人类高度相似。斑马鱼胚胎个体小，通体透明，方便于显微镜下拍照，并应用软件分析定量读取黑色素含量水平，测试比较处理组和对照组的鱼胚胎黑色素水平变化，计算黑色素抑制率以评价原料或产品的黑色素抑制功效。
[0081]
实验过程：
[0082]
采用健康的受精后6-8h大的斑马鱼胚胎，随机挑选20尾鱼胚胎，转移至96孔板中，每孔含一粒鱼胚胎和0.2ml鱼胚胎培养液/溶剂溶液，为空白对照组；随机挑选20尾鱼胚胎，转移至96孔板中，每孔含一粒鱼胚胎和苯硫脲工作液(称取15mg苯硫脲溶于10ml水配制而成)，为阳性对照组；随机挑选20尾鱼胚胎，转移至96孔板中，每孔含一粒鱼胚胎和0.2ml受试物溶液(将实施例1-5，对比例1-3用鱼胚胎培养液溶解配制成3g/l测试溶液)。放置于28
±
1℃恒温箱中培养至受精后48
±
1h。
[0083]
每组测试随机挑选最少12粒鱼胚胎，于显微镜下对未孵化的鱼胚胎用镊子小心将胚胎壳剥离，请勿损伤鱼体。用2-4％甲基纤维素覆盖鱼胚胎，并将背部向上摆放。然后放到立体显微镜下进行拍照。所有鱼胚胎需要用统一的拍照参数进行拍摄。
[0084]
用分析软件image j打开照片，对每粒鱼胚胎的头和卵黄背部区域进行标记，然后
选择“测量”栏里的“测量平均强度”，选取测试结果中的“平均信号强度”作为黑色素含量指数。
[0085]
计算黑色素抑制率：
[0086]
抑制率＝(c-t)/(c-p)
×
100％
‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
(1)
[0087]
式中：
[0088]
t—受试物处理组鱼胚胎“平均信号强度”的平均值；
[0089]
c—空白对照组鱼胚胎“平均信号强度”的平均值；
[0090]
p—阳性对照组鱼胚胎“平均信号强度”的平均值。
[0091]
对受试物处理组鱼胚胎黑色素信号强度和空白对照组黑色素信号强度进行双尾t检验，取得p值。
[0092]
测试结果如图1所示，利用苯硫脲作为阳性对照，以阳性对照黑色素抑制率为100％计，实施例3斑马鱼胚胎黑色素抑制率为64％，实施例1为41％，实施例2为46％，实施例4为60％，实施例5为52％，对比例1为31％，对比例2为21％，对比例3为15％，结果均显著，以实施例3的抑制效果最为显著，由于对比例1缺少玫红柳叶菜提取物，对比例2缺少烟酰胺与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例3缺少聚谷氨酸钠与透明质酸钠富勒烯溶液，故实施例1-5对黑色素抑制率均高于对比例1-3。也从侧面说明：聚谷氨酸钠、烟酰胺、透明质酸钠富勒烯溶液和玫红柳叶菜提取物各组分之间协同增效。
[0093]
试验例2：利用蓝光照射诱导光损伤模型研究样品抗光毒性能力试验
[0094]
本实验方法按照蓝光标准gb/t 38120-2019，本测试以皮肤角质形成细胞hacat为细胞模型，首先进行不同测试样品的添加，5h后进行细胞增殖和细胞毒性检测，筛选出最大不致死浓度。之后利用蓝光照射诱导构建光损伤模型，同时最终通过检测细胞毒性明确测试样品的抗光毒性能力。
[0095]
细胞毒性检测过程：
[0096]
在96孔板中每孔加入4000个hacat细胞，每孔100μl完全培养基，培养24h。将细胞分为空白对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、对比例1组、对比例2组、对比例3组(实施例1-5、对比例1-3各加5μl)继续培养3.5小时。
[0097]
每孔添加10μl cck-8试剂，继续培养1.5h，检测450nm处吸光度值，同时检测600nm的吸光度值作为参考波长，计算相对细胞存活率。
[0098]
抗光毒性检测过程：
[0099]
在96孔板中每孔加入4000个hacat细胞，每孔100μl完全培养基，培养24h。将细胞分为空白对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、对比例1组、对比例2组、对比例3组(实施例1-5、对比例1-3各加5μl)继续培养3.5小时。
[0100]
每孔添加10μl cck-8试剂，同时蓝光照射组、实施例1-5、对比例1-3进行30j/cm2蓝光照射继续培养1.5h，空白对照组无蓝光照射。检测450nm处吸光度值，同时检测600nm的吸光度值作为参考波长，计算相对细胞存活率。
[0101]
①
相对细胞存活率(w，％)计算方式：
[0102][0103]
式中：odi：实验组的吸光度值；
[0104]
odo：空白对照组的吸光度值。
[0105]
②
样品光毒性抑制率(s，％)计算方式：
[0106][0107]
式中：wo：空白对照组的相对细胞存活率；
[0108]
wi：实验组的相对细胞存活率；
[0109]wbd
：蓝光照射组的相对细胞存活率。
[0110]
测试结果如表6所示，从表中可以看出实施例1-5均具有较高水平的抑制光毒性作用，以实施例3的抑制作用最强。对比例1缺少玫红柳叶菜提取物，对比例2缺少烟酰胺与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例3缺少聚谷氨酸钠与透明质酸钠富勒烯溶液，实施例1-5的抑制水平均高于对比例1-3。说明此多通路美白组合物具有显著抗蓝光毒性作用。
[0111]
表6蓝光诱导抗光毒性结果
[0112][0113][0114]
试验例3：体外抑制il-6、tnf-α、no及pge2因子的活性实验
[0115]
实验过程：
[0116]
采用lps(细菌脂多糖)诱导小鼠巨噬细胞raw264.7，通过elisa方法检测il-6、tnf-α、no及pge2表达量，并进一步计算抑制率，来评价受试物抑制相关细胞通路因子表达的能力。实验数据用spss21.0软件分析，计量资料用表示，两组数据间比较用t检验，多组差异比较用单因素方差，p《0.05为差异具有统计学意义。
[0117]
测试方案见表7。
[0118]
表7测试方案
[0119][0120]
测试结果如表8-表11所示。
[0121]
表8 il-6含量结果汇总表
[0122][0123][0124]
注：##表示与空白对照相比，p《0.01；**表示与阴性对照相比，p《0.01；*表示与阴性对照相比，p《0.05。
[0125]
从表8中可以看出，实施例1-5及对比例1，2，3均能显著抑制il-6的活性，实施例3的抑制效果最显著，但由于对比例1缺少玫红柳叶菜提取物，对比例2缺少烟酰胺与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例3缺少聚谷氨酸钠与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例1，2，3的抑制率均低于实施例1-5。表明该多通路美白组合物能显著抑制il-6的活性。
[0126]
表9 tnf-α含量结果汇总表
[0127][0128]
注：##表示与空白对照相比，p《0.01；**表示与阴性对照相比，p《0.01；*表示与阴性对照相比，p《0.05。
[0129]
从表9中可以看出，实施例1-5及对比例1，2，3均能显著抑制tnf-α的活性，实施例3的抑制效果最显著，但由于对比例1缺少玫红柳叶菜提取物，对比例2缺少烟酰胺与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例3缺少聚谷氨酸钠与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例1，2，3的抑制率均低于实施例1-5。表明该多通路美白组合物能显著抑制tnf-α的活性。
[0130]
表10 pge2含量结果汇总表
[0131][0132][0133]
注：##表示与空白对照相比，p《0.01；**表示与阴性对照相比，p《0.01；*表示与阴性对照相比，p《0.05。
[0134]
从表10中可以看出，实施例1-5及对比例1，2，3均能显著抑制pge2的活性，实施例3的抑制效果最显著，但由于对比例1缺少玫红柳叶菜提取物，对比例2缺少烟酰胺与透明质
酸钠富勒烯溶液，对比例3缺少聚谷氨酸钠与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例1，2，3的抑制率均低于实施例1-5。表明该多通路美白组合物能显著抑制pge2的活性。
[0135]
表11 no含量结果汇总表
[0136][0137]
注：##表示与空白对照相比，p《0.01；**表示与阴性对照相比，p《0.01；*表示与阴性对照相比，p《0.05。
[0138]
从表11中可以看出，实施例1-5及对比例1，2，3均能显著抑制no的活性，实施例3的抑制效果最显著，但由于对比例1缺少玫红柳叶菜提取物，对比例2缺少烟酰胺与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例3缺少聚谷氨酸钠与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例1，2，3的抑制率均低于实施例1-5。表明该多通路美白组合物能显著抑制no的活性。
[0139]
试验例4：体外抑制et-1表达的实验
[0140]
本次试验通过血管内皮细胞建立uvb刺激反应模型，采用酶联免疫吸附剂测定(elisa)法检测et-1表达量变化，来评价样品的功效。
[0141]
实验过程：
[0142]
将hacat细胞铺板后，uvb照射4min继续培养48h，收集培养液上清液，标记uvb-hacat培养液上清液，作为刺激物备用。
[0143]
将培养至对数生长期的人原代血管内皮细胞以1.5
×
104个/孔接种至96孔板上，培养过夜。弃去细胞培养液，于细胞板中每孔加入100μl样品、100μl 50％的uvb-hacat培养液上清液，混匀后继续培养24h。实验设置空白对照(完全培养基)、uvb照射组(25％的uvb-hacat上清液)和样品组(刺激物+实施例1-5、对比例1-3)，每个处理组均为3个复孔以上。孵育结束后，收集细胞培养上清液，根据elisa试剂盒方法进行et-1含量测定。
[0144]
et-1抑制率以uvb照射组为0％。用ttest的方法计算检测样品组与uvb照射组相比的显著性差异。计算公式如下：
[0145]
抑制率(％)＝(1-表达量
样品组
/表达量
uvb照射组
)
×
100％
[0146]
et-1表达量检测结果如图2所示，从图中可以看出：实施例1-5均能显著抑制et-1表达，相比于实施例1-5，对比例1缺少玫红柳叶菜提取物，对比例2缺少烟酰胺与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例3缺少聚谷氨酸钠与透明质酸钠富勒烯溶液，对比例1-3对et-1无显
著性抑制作用。说明该多通路美白组合物能显著抑制et-1的表达。
[0147]
试验例5：含本发明护肤组合物的化妆品对人体美白实验的测试结果
[0148]
根据实施例7中的精华乳产品，评价其在人体皮肤上的美白效果。
[0149]
测试方案如表12所示。
[0150]
表12测试基本信息表
[0151][0152]
按化妆品祛斑美白功效测试方法第一法附录i配方配制。
[0153]
受试物涂抹：由检测人员按照表12对应测试区进行受试物的涂抹，每天涂抹两次，两次涂抹间隔时间不少于4小时，涂样面积7cm2，涂样量为2.00
±
0.05mg/cm2。每个测试区之间的间隔应不小于1.0cm。
[0154]
1、检测仪器：
[0155]
日光模拟仪(型号：uv solar simulator model 601-300v2.5，厂家：美国solarlight公司)。
[0156]
皮肤颜色测试探头(型号：colorimeter cl400，厂家：德国courage and khazaka公司)。
[0157]
皮肤黑色素和红色素检测探头(型号：mexameter mx18，厂家：德国courage and khazaka公司)。
[0158]
2、指标定义
[0159]
个体类型角(individual type angle，ita
°
)：通过皮肤色度计或反射分光光度计测量皮肤l*a*b*颜色空间数据来表征人体皮肤颜色的参数，计算公式(5)如下：
[0160][0161]
黑素指数(melanin index，mi)：通过测定皮肤表面对特定波长光谱的吸收来表征皮肤中黑素含量的参数。
[0162]
皮肤色度仪测量：在各个访视时点，用皮肤色度仪分别测量各测试区域的l*、a*、b*值，每个区域测试三次，记录并计算ita
°
值，ita
°
值越大，肤色越浅，反之肤色越深。
[0163]
皮肤黑素检测仪测量：在各访视时点，用皮肤黑素检测仪分别测量各测试区域的mi值，每个测试区测试三次，并记录；mi值越小，表示皮肤黑素含量越低，反之皮肤黑素含量越高。ita
°
、mi及视觉肤色等级的测试结果如表13-16所示。
[0164]
表13任一时间点试验产品使用前后的差值与阴性对照的对比结果
[0165][0166]
表14试验产品及阴性对照ita
°
值、mi值检测结果
[0167][0168]
表15试验产品及阴性对照视觉肤色等级检测结果
[0169][0170]
表16任一时间点试验产品的回归系数(斜率k值)与阴性对照的对比结果
[0171][0172]
结果表明，相比于阴性对照区，试验产品ita
°
差值在使用后2周、使用后4周有显著改善(p《0.05)；相比于阴性对照区，试验产品mi差值在使用后2周、使用后4周有显著改善(p
《0.05)；相比于阴性对照区，试验产品视觉肤色等级差值在使用后2周、使用后4周有显著改善(p《0.05)；经回归系数分析整体判断试验产品与阴性对照相比皮肤黑化显著改善(p《0.05)。
[0173]
通过以上结果表明：含有该多通路美白组合物的产品能够达到美白皮肤的功效，用于护肤品中具有显著的效果。