用于革兰氏阳性菌检测和治疗的链球菌属细菌噬菌体溶素

发明领域本发明一般涉及对于革兰氏阳性菌和相关状况的预防和治疗性改善和治疗有用的方法、组合物和制造物品，所述革兰氏阳性菌包括链球菌属(streptococcus)和葡萄球菌属(staphylococcus)细菌菌株，包括致病性和抗生素抗性细菌。本发明涉及掺入分离的猪链球菌(streptococcus suis)细菌噬菌体溶素的组合物和制造物品，所述细菌噬菌体溶素包括plyss2和/或plyss1裂解酶及其变体，包括其截短物，并且涉及利用溶素多肽和组合物的方法。

背景技术：

0、发明背景

1、医学中的重大问题是随着更多的抗生素用于广泛多样的疾病及其他状况，抗药细菌的发展。医院感染是美国的第8大死亡主因，大部分是由于抗药性和新出现的病原体。例如，在美国每年存在超过500,000个金黄色葡萄球菌病例，并且超过65％的菌株是多重耐药的(mrsa)。更多抗生素的使用和显示抗性的细菌数目已促使更长的治疗时间。此外，广泛非特异抗生素目前正更频繁地使用，其中一些对患者具有有害作用。与这个增加的使用有关的问题是许多抗生素无法容易地渗入粘膜衬里。另外，对抗生素过敏的人数看起来是渐增的。因此，存在关于新抗菌方法尤其是经由新模式操作或提供杀死致病菌的新手段的那些的商业需要。

2、革兰氏阳性菌由含有多肽和多糖的细胞壁包围。革兰氏阳性细胞壁作为宽的致密壁出现，所述壁是20-80nm厚的并且由众多互联肽聚糖层组成。60％-90％的革兰氏阳性细胞壁是肽聚糖，提供细胞形状、刚性结构和对渗透冲击的抗性。细胞壁不排除革兰氏染色剂结晶紫，允许细胞染成紫色，并且因此是“革兰氏阳性的”。革兰氏阳性菌包括但不限于放线菌素属(actinomyces)、芽孢杆菌属(bacillus)、李斯特菌属(listeria)、乳球菌属(lactococcus)、葡萄球菌属(staphylococcus)、链球菌属(streptococcus)、肠球菌属(enterococcus)、分枝杆菌属(mycobacterium)、棒状杆菌属(corynebacterium)和梭菌属(clostridium)。医学相关的物种包括化脓性链球菌(streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)和粪肠球菌(enterococcus faecalis)。产芽孢的芽孢杆菌属物种引起炭疽和胃肠炎。产芽孢的梭菌属物种负责食物中毒、破伤风、气性坏疽和假膜性结肠炎。棒状杆菌属物种引起白喉，并且李斯特菌属物种引起脑膜炎。

3、抑制细胞壁合成的抗菌药例如青霉素和头孢菌素干扰肽聚糖的肽间连接，且减弱革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的细胞壁。因为革兰氏阳性菌的肽聚糖是暴露的，所以革兰氏阳性菌对这些抗生素更敏感。有利地，真核细胞缺乏细胞壁并且对这些药物或其他细胞壁试剂不敏感。

4、已作出通过使用细菌噬菌体治疗细菌病的尝试。然而，细菌噬菌体直接引入动物内以阻止或对抗疾病具有某些缺点。具体地，细菌和噬菌体必须处于正确和同步的生长周期中用于噬菌体附着。另外，必须存在正确数目的噬菌体以附着至细菌；如果存在太多或太少噬菌体，则将不存在裂解酶的附着或产生。噬菌体还必须足够活跃。噬菌体还受许多事物包括来自它准备攻击的生物体的细菌碎片抑制。使细菌噬菌体直接用于治疗细菌感染进一步复杂的是免疫反应的可能性，使得噬菌体无功能。

5、新型抗微生物治疗方法包括基于酶的抗生素(“酶抗生素”)，例如细菌噬菌体溶素。噬菌体使用这些溶素消化其细菌宿主的细胞壁，通过低渗裂解释放子代病毒。当纯化的重组溶素外部加入革兰氏阳性菌中时，相似结果产生。溶素针对革兰氏阳性病原体的高致死活性使得其成为作为治疗学开发的有吸引力的候选物。细菌噬菌体溶素最初提出用于根除致病性链球菌的鼻咽携带(loeffler，j.m.等人(2001)science 294:2170-2172；nelson，d.等人(2001)proc natl acadsci usa 98:4107-4112)。溶素是由双链dna(dsdna)噬菌体使用的以使宿主裂解与病毒装配完成协调的裂解机制的部分(wang，i.n.等人(2000)annurev microbiol 54:799-825)。噬菌体编码在细菌膜中打开洞的两种穿孔素(holins)以及破坏细胞壁中的键的肽聚糖水解酶(称为溶素)[6]。在感染后期，溶素易位到细胞壁基质内，在其中它快速水解肽聚糖完整性必需的共价键，引起细菌裂解和伴随的子代噬菌体释放。

6、溶素家族成员显示出其中催化结构域融合至特异性或结合结构域的调节设计(lopez，r.等人(1997)microb drug resist 3:199-211)。溶素可以由细菌基因组内的病毒原噬菌体序列克隆并且用于治疗(beres，s.b.等人(2007)plos one 2(8):1-14)。当外部加入时，溶素能够接近革兰氏阳性细胞壁的键(图1)(fischetti，v.a.(2008)curr opinionmicrobiol 11:393-400)。溶素已显示证实针对众多革兰氏阳性病原体(尤其是它们由其克隆的细菌)的高致死活性，提出其作为治疗学开发的可能性(fischetti，v.a.(2008)curropinion microbiol 11:393-400；nelson，d.l.等人(2001)proc natlacad sci usa98:4107-4112)。

7、细菌噬菌体裂解酶已确定为通过多个施用途径在受试者中的多个感染类型的评价和特异性治疗中是有用的。例如，美国专利5,604,109(fischetti等人)涉及通过经由半纯化的c组链球菌噬菌体相关溶素酶的酶促消化，在临床样本中的a组链球菌的快速检测。这一酶工作变成另外研究的基础，导致治疗疾病的方法。fischetti和loomis专利(美国专利5,985,271、6,017,528和6,056,955)公开了通过由c1细菌噬菌体感染的c组链球菌细菌产生的溶素酶的用途。美国专利6,248,324(fischetti和loomis)公开了通过使用在适合于局部应用于皮肤组织的载体中的裂解酶用于皮肤病学感染的组合物。美国专利6,254,866(fischetti和loomis)公开了用于治疗消化道的细菌感染的方法，其包括施用对于感染细菌特异性的裂解酶。用于将至少一种裂解酶递送至消化道的载体选自栓剂灌肠剂、糖浆剂或肠溶丸剂。美国专利6,264,945(fischetti和loomis)公开了通过肠胃外引入(肌内、皮下或静脉内)至少一种裂解酶和用于将裂解酶递送到患者内的合适载体，用于治疗细菌感染的方法和组合物，所述裂解酶通过由对于那种细菌特异性的细菌噬菌体感染的细菌产生。

8、噬菌体相关裂解酶已得到鉴定且从多个细菌噬菌体中克隆，各自显示在杀死特异性细菌菌株中是有效的。美国专利7,402,309、7,638,600和公开的pct申请wo2008/018854提供了作为用于治疗或减少炭疽杆菌(bacillus anthracis)感染的抗菌剂有用的独特噬菌体相关裂解酶。美国专利7,569,223描述了用于肺炎链球菌的裂解酶。对于肠球菌属(粪肠球菌(e.faecalis)和屎肠球菌(e.faecium)，包括万古霉素抗性菌株)有用的溶素在美国专利7,582291中描述。us 2008/0221035描述了在杀死b组链球菌中高度有效的突变型plygbs溶素。具有针对葡萄球菌细菌包括金黄色葡萄球菌的活性且指定为clys的嵌合溶素在wo 2010/002959中详述。

9、猪链球菌是全世界范围内感染猪的革兰氏阳性病原体。从猪到人的动物传染病传播报道是渐增的(sriskandan s.等人(2006)plosmedicine 3(5):585-567)。猪链球菌可能在未来数年在人群中发展出长久存在。人和猪已用青霉素或庆大霉素进行治疗，但存在对这些抗生素抗性的猪链球菌分离物(cantin，m.等人(1992)j vetdiagnostic investig 4:170-174)。

10、由与目前常规抗菌剂相关的缺陷和问题而显而易见的是，本领域仍存在关于另外的特异性细菌试剂以及更广谱的试剂的需要，所述试剂特别是不含获得抗性的高风险。值得注意的是迄今为止，没有溶素已显示证实针对致病性和临床相关细菌的多个不同物种的广泛裂解活性。

11、本文参考文献的引用不应解释为这些是本发明的现有技术的承认。

技术实现思路

0、发明概述

1、在其最广泛的方面，本发明提供了针对多种细菌具有广泛杀死活性的溶素，所述细菌特别是革兰氏阳性菌，包括葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和李斯特菌属细菌菌株。本发明提供了能够杀死来自不同目的细菌的细菌噬菌体溶素。在一个方面，提供了能够杀死来自不同杆菌目，特别是芽孢杆菌目和乳杆菌目的一种或多种细菌的溶素多肽。本发明提供了能够且证实在体外和体内杀死来自两个不同目特别是芽孢杆菌目和乳杆菌目的细菌的溶素多肽。本发明的溶素能够杀死混合培养和体内混合感染中的芽孢杆菌目和乳杆菌目细菌。本发明因此考虑了细菌、培养物或感染或在这样的情况下的处理、去定殖和/或去污染，在所述情况下怀疑或存在超过一种革兰氏阳性菌，特别是葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和李斯特菌属细菌中的一种或多种。特别地，本发明考虑了细菌、培养物或感染或在这样的情况下的处理、去定殖和/或去污染，在所述情况下怀疑、存在或可能存在超过一个类型的芽孢杆菌目细菌、超过一个类型的乳杆菌目细菌、或至少一个类型的芽孢杆菌目和一个类型的乳杆菌目细菌。

2、依照本发明，提供了衍生自猪链球菌细菌的细菌噬菌体溶素。两个示例性不同和独特的溶素已得到分离和表征，特别是plyss1包括其活性截短物和plyss2。本发明的溶素多肽在证实针对多种细菌的广泛杀死活性中是独特的，所述细菌特别是革兰氏阳性菌，包括葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和李斯特菌属细菌菌株。在一个此类方面，plyss2溶素能够杀死动物模型中的金黄色葡萄球菌菌株和细菌，如本文在小鼠中证实的。plyss2有效针对抗生素抗性金黄色葡萄球菌，例如甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(mrsa)、万古霉素中度敏感性金黄色葡萄球菌(visa)和万古霉素抗性金黄色葡萄球菌(vrsa)。在进一步的此类方面，plyss1溶素能够减少金黄色葡萄球菌菌株和细菌的生长，包括抗生素抗性金黄色葡萄球菌例如甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(mrsa)、万古霉素中度敏感性金黄色葡萄球菌(visa)或万古霉素抗性金黄色葡萄球菌(vrsa)。本发明包括包含溶素多肽的组合物和制造物品，以及预防和治疗细菌生长、定殖和感染的方法。

3、在本发明的一个方面，提供了杀死革兰氏阳性菌的方法，其包括使细菌与包含一定量的有效杀死革兰氏阳性菌的分离溶素多肽的组合物接触的步骤，所述分离溶素多肽包含plyss2溶素多肽或其有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

4、因此，提供了杀死革兰氏阳性菌的方法，其包括使细菌与包含一定量的有效杀死革兰氏阳性菌的分离溶素多肽的组合物接触的步骤，所述分离溶素多肽包含seq id no:3的氨基酸序列，或其与seq id no:3的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性、95％同一性或99％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

5、在上述方法的另外方面，该组合物还包含有效量的包含seq idno:1的氨基酸序列的分离溶素多肽，所述分离溶素多肽包含seq idno:2的氨基酸序列，或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

6、本发明提供了杀死革兰氏阳性菌的方法，其包括使细菌与包含一定量的有效杀死革兰氏阳性菌的分离溶素多肽的组合物接触的步骤，所述分离溶素多肽包含plyss1溶素多肽或其有效杀死革兰氏阳性菌的截短物或变体。在这种方法的一个方面，组合物包含有效量的包含seq id no:1的氨基酸序列的分离溶素多肽、包含seq id no:2的氨基酸序列的分离的截短溶素多肽、或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性、95％同一性或99％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

7、在上述杀死革兰氏阳性菌的方法的一个方面，该方法在体外或离体执行，以便使特别是预期用于通过人或在人中使用的溶液、材料或装置灭菌或去污染。

8、本发明提供了用于减少革兰氏阳性菌群体的方法，其包括使细菌与包含一定量的有效杀死至少部分革兰氏阳性菌的分离多肽的组合物接触的步骤，所述分离多肽包含seqid no:3的氨基酸序列，或其与seq id no:3的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。在这种方法的一个实施方案中，组合物还包含有效量的包含seqid no:1的氨基酸序列的分离溶素多肽、包含seq id no:2的氨基酸序列的分离溶素多肽、或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

9、本发明还提供了用于减少革兰氏阳性菌群体的方法，其包括使细菌与包含一定量的有效杀死至少部分革兰氏阳性菌的分离多肽的组合物接触的步骤，所述分离多肽包含plyss1溶素多肽或其有效杀死革兰氏阳性菌的截短物或变体。在这种方法的一个方面，组合物包含有效量的包含seq id no:1的氨基酸序列的分离溶素多肽、包含seq id no:2的氨基酸序列的分离溶素多肽、或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

10、在上述用于减少革兰氏阳性菌群体的方法的一个方面，该方法在体外或离体执行，以便使特别是预期用于通过人或在人中使用的溶液、材料或装置灭菌或去污染。

11、本发明还提供了用于治疗人中的抗生素抗性金黄色葡萄球菌感染的方法，其包括给具有抗生素抗性金黄色葡萄球菌感染的人施用有效量的包含分离多肽的组合物的步骤，所述分离多肽包含seq id no:3的氨基酸序列或其与seq id no:3的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死金黄色葡萄球菌的变体，由此人中的金黄色葡萄球菌数目减少并且感染受到控制。

12、在这种方法的一个方面，组合物可以备选地或可以进一步包含有效量的包含seqid no:1的氨基酸序列的分离溶素多肽、包含seq idno:2的氨基酸序列的分离溶素多肽、或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死金黄色葡萄球菌的变体。

13、本发明的方法还包括用于治疗在人中由葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属或李斯特菌属细菌中的一种或多种引起的革兰氏阳性菌感染的方法，其包括给具有细菌感染的受试者施用有效量的包含分离多肽的组合物的步骤，所述分离多肽包含seq id no:3的氨基酸序列或其与seq id no:3的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体，由此人中的革兰氏阳性菌数目减少并且感染受到控制。

14、在上述方法中使用的组合物可以备选地或可以进一步包含有效量的包含seq idno:1的氨基酸序列的分离溶素多肽、包含seq id no:2的氨基酸序列的分离溶素多肽、或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

15、本发明另外包括用于治疗暴露于或处于暴露于致病性革兰氏阳性菌的危险中的人受试者的方法，其包括给受试者施用包含一定量的有效杀死革兰氏阳性菌的分离溶素多肽的组合物的步骤、包含seq idno:3的氨基酸序列的分离溶素多肽、或其与seq id no:3的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。在这种方法的特定方面，其中受试者暴露于或处于下述之一或一种或多种的危险中：葡萄球菌属(例如金黄色葡萄球菌)、链球菌属(例如化脓性链球菌)、李斯特菌属(例如单核细胞增多性李斯特菌(l.monocytogenes))或肠球菌属(例如粪肠球菌)细菌。受试者可以是人。受试者可以是成人、儿童、婴儿或胎儿。

16、在本发明的组合物和方法中使用的溶素多肽的变体可以基本上等同于本文例示的溶素多肽中的一种或多种，包括seq id no:1、2或3。与本文例示的溶素多肽包括seq idno:1、2或3相比较，在本发明的组合物和方法中使用的溶素多肽的变体可以在氨基酸序列中具有至少75％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性。

17、在任何此类上述一种或多种方法中，敏感的、杀死的或处理过的细菌可以选自金黄色葡萄球菌、单核细胞增多性李斯特菌、溶血性葡萄球菌(staphylococcus simulans)、猪链球菌、表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)、马链球菌(streptococcusequi)、马链球菌兽疫亚种(streptococcus equi zoo)、无乳链球菌(streptococcusagalactiae)(gbs)、化脓性链球菌(gas)、血链球菌(streptococcus sanguinis)、格氏链球菌(streptococcusgordonii)、停乳链球菌(streptococcus dysgalactiae)、g组链球菌、e组链球菌、粪肠球菌和肺炎链球菌。

18、依照本发明的任何方法，敏感细菌或待处理或去定殖的细菌可以是抗生素抗性细菌。细菌可以是甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(mrsa)、万古霉素中度敏感性金黄色葡萄球菌(visa)或万古霉素抗性金黄色葡萄球菌(vrsa)。敏感细菌可以是特别是对于人的临床相关细菌或致病菌。在该方法的一个方面，溶素多肽有效杀死葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和李斯特菌属细菌菌株。

19、依照本发明的任何方法，其组合物还可包含载体，包括药学可接受的载体、添加剂或稀释剂。依照本发明的任何方法，其组合物还可包含用于将多肽递送至感染部位的合适媒介物。依照本发明的任何方法，其组合物还可包含一种或多种抗生素。

20、本发明提供了包含本发明的一种或多种溶素多肽的组合物，包括治疗和药物组合物。

21、本发明因此提供了用于杀死革兰氏阳性菌的包含分离溶素多肽的药物组合物，所述分离溶素多肽包含seq id no:3的氨基酸序列或其与seq id no:3的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

22、在一个实施方案中，药物组合物可以备选地或可以进一步包含有效量的包含seqid no:1的氨基酸序列的分离溶素多肽、包含seq idno:2的氨基酸序列的分离溶素多肽、或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

23、在本发明的一个方面，提供了用于杀死革兰氏阳性菌的包含至少两种分离溶素多肽的药物组合物，其中第一种分离多肽包含seq idno:3的氨基酸序列或其与seq id no:3的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体，并且第二种分离多肽包含seq idno:1的氨基酸序列、包含seq id no:2的氨基酸序列的分离溶素多肽、或其与seq idno:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

24、在其进一步方面，组合物包括治疗或药物组合物可以包含具有伴随修饰的seq idno:2的氨基酸序列的截短溶素，由此截短的溶素仅包含选自内肽酶结构域和氨基葡糖苷酶结构域的一个催化结构域。在组合物的另外方面，截短的溶素不包括seq id no:1的氨基葡糖苷酶结构域。截短的溶素可以特别具有seq id no:2的氨基酸序列，或其与seq id no:2的多肽具有至少80％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

25、本发明包括包含容器的制造物品，所述容器含有包含分离多肽的组合物，所述分离多肽包含seq id no:3的氨基酸序列，或其与seq idno:3的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体，和在暴露于或显示出与暴露于葡萄球菌属、链球菌属或李斯特菌属细菌一致的症状的患者治疗中使用组合物的说明书，其中使用组合物的说明书指示关于使用组合物的方法，该方法包括下述步骤：

26、a)鉴定怀疑已暴露于葡萄球菌属、链球菌属或李斯特菌属细菌的患者；和

27、b)给患者施用有效量的组合物。

28、在本发明的物品的一个方面，组合物的分离多肽具有seq id no:3的氨基酸序列。在本发明的物品的另外方面，组合物备选地或进一步包含分离多肽，所述分离多肽包含seqid no:1的氨基酸序列、seq idno:2的氨基酸序列，或其与seq id no:1或seq id no:2的多肽具有至少80％同一性、85％同一性、90％同一性或95％同一性并且有效杀死革兰氏阳性菌的变体。

29、本发明的组合物可以特别证实或具有针对一个或多个细菌菌株的杀死活性，所述细菌菌株特别选自金黄色葡萄球菌、单核细胞增多性李斯特菌、溶血性葡萄球菌、猪链球菌、表皮葡萄球菌、马链球菌、马链球菌兽疫亚种、无乳链球菌(gbs)、化脓性链球菌(gas)、血链球菌、格氏链球菌、停乳链球菌、g组链球菌、e组链球菌、粪肠球菌和肺炎链球菌。

30、本发明还提供了编码本发明的溶素多肽的核酸。因此，提供了编码猪链球菌溶素plyss1、截短或完整的溶素和plyss2的核酸。示例性核酸序列在图3和图4中提供。本文提供了能够编码seq id no:1、seq id no:2或seq id no:3的多肽(包括其变体)的核酸。

31、本发明还涉及编码猪链球菌溶素或溶素多肽的重组dna分子或克隆基因，或其简并变体；优选地，编码plyss1溶素多肽、截短或完整的溶素和/或plyss2溶素多肽的核酸分子，特别是重组dna分子或克隆基因，具有图3和图4中所示的核苷酸序列或与图3和图4中所示的dna序列互补。

32、在本发明的进一步实施方案中，重组dna分子、克隆基因或编码本文的溶素多肽的核酸序列的全长dna序列可以与表达控制序列可操作地连接，所述表达控制序列可以引入合适宿主内。本发明因此延伸至由核酸序列、克隆基因或重组dna分子转化的单细胞宿主，包括细菌宿主，所述核酸序列、克隆基因或重组dna分子包含编码呈现的溶素多肽的dna序列，并且更具体地由上文以及图3和图4中所示的序列测定的完全dna序列。

33、本发明自然考虑用于制备溶素多肽的几种方法，包括如本文举例说明的已知重组技术，并且本发明因此预期在其范围内涵盖此类合成制剂。本文公开的dna的分离和氨基酸序列促进溶素多肽通过此类重组技术的繁殖，并且相应地，本发明延伸至通过重组dna技术在宿主系统中表达的由公开的dna序列制备的表达载体，和所得到的经转化的宿主。

34、根据本发明的特定实施方案的其他优选特征，提供了产生生物学活性的溶素多肽的重组表达系统。提供了用于制备多肽特别是本发明的一种或多种溶素多肽的过程，其包括培养含有表达载体的宿主细胞且回收多肽，所述表达载体编码本发明的一种或多种溶素多肽或能够表达本发明的溶素多肽。

35、本发明的诊断效用延伸至呈现的溶素多肽在测定法中的用途，以筛选革兰氏阳性菌存在，以筛选敏感的革兰氏阳性菌的存在，或测定细菌对通过本发明的一种或多种溶素多肽杀死或裂解的敏感性。

36、本发明延伸至针对溶素多肽或备选地针对溶素多肽的切割靶的抗体的开发，包括天然产生和重组制备的抗体。此类抗体可以包括通过已知遗传技术制备的多克隆和单克隆抗体，以及双特异性(嵌合)抗体，和包括与其调节溶素活性的能力结合的使其适合于另外诊断用途的其他功能性的抗体。

37、本文考虑且提供了其为经修饰的且为嵌合或融合蛋白，或标记的溶素多肽。在嵌合或融合蛋白中，本发明的溶素多肽可以共价附着至可以提供另外的功能或增强溶素多肽的用途或应用的实体，其包括例如标签、标记、靶向部分或配体、细胞结合或细胞识别基序或试剂、抗菌剂、抗体、抗生素。示例性标记包括放射性标记，例如同位素3h、14c、32p、35s、36cl、51cr、57co、58co、59fe、90y、125i、131i和186re。标记可以是酶，并且标记溶素多肽的检测可以通过本领域已知的目前利用或公认的比色、分光光度计、荧光分光光度计、安培计或气体定量技术中的任何来完成。

38、根据关于下述举例说明性附图进行的下述说明书的综述，其他目的和优点将变得对于技术人员显而易见。