一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织与流程

本发明涉及医疗设备，特别涉及一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织。

背景技术：

1、目前，临床上常用的生物瓣膜，以及生物补片，如牛心包、小肠粘膜下层等所用动物源性胶原纤维组织材料通常使用化学试剂如戊二醛和/或甲醛贮存或用所述化学试剂进行交联固定处理。该类固定方法通常会导致生物假体组织存在残余醛基，大量研究显示经甲醛/戊二醛固定处理的生物假体组织在植入后会引起体内钙化。

2、现有技术中已报道过的生物假体组织抗钙化的处理方法有：脱细胞处理、醇处理、表面活性剂处理、金属离子竞争等方法。虽然上述方法具有一定的抗钙化效果，但在实际应用中并不理想，脱细胞处理的方法可以去除生物组织大多数的抗原和dna，但会使生物组织变得疏松，导致生物假体组织的机械性能因此而下降。醇类处理的方法在短期抗钙化效果上良好，但无法清除生物假体组织上的残余醛基，因残留醛基存在，生物假体组织的远期钙化风险仍然很高。表面活性剂处理的方法可以去除生物假体组织中的磷脂，起到一定的抗钙化效果，但醛基作为钙化诱导因素仍然存在，导致生物假体组织的抗钙化效果不佳。金属离子竞争的方法可以结合生物假体组织现有的结合位点，起到一定的抗钙化效果，但同样并不能完全解决醛基长期钙化的诱导作用。

3、现有技术中公开了一种2-氨基油酸处理生物假体组织预防生物假体组织钙化的方法。该方案中，将经戊二醛固定的牛心包放进含有2-氨基油酸钠的硼酸钠缓冲溶液(ph11)中，标准温度下孵育过夜。体内植入显示，处理过的组织与未经处理的组织相比，其改善钙化效果明显。但gott jp等采用幼羊模型进行换瓣研究发现，该方法改善瓣膜钙化的同时，容易导致组织疏松，心包毛面血肿等情况。

4、现有技术中还公开了一种对生物假体组织进行加帽处理减少钙化的方法。将经戊二醛固定的生物假体组织用20％乙醇漂洗，室温下暴露于含有乙醇胺和硼氢化钠的加帽溶液中4h，漂洗掉过量加帽溶液。小动物模型植入结果显示，与热固定生物假体组织相比，加帽处理可以减少生物假体组织的体内钙化；但该方法采用的加帽试剂具有强碱性，在强碱条件下，还原剂硼氢化钠极易产生气体，气体会充盈于生物假体组织内，破坏组织内部纤维结构，降低组织性能。

5、现有技术中另外还公开了一种双交联工艺，可以改善生物假体组织的抗钙化效果。其技术方案中将生物假体组织进行戊二醛热固定，对固定后的生物假体组织进行jeffamine交联和硼氢化钠还原，然后对生物假体组织进行表面活性剂处理，可对组织进行保存和灭菌。小动物模型植入结果显示，与热固定生物假体组织相比，双交联工艺处理可以减少生物假体组织的体内钙化；但该工艺处理的生物假体组织同样具有强碱性，在强碱条件下，还原剂硼氢化钠极易产生气体，气体会充盈于生物假体组织内，破坏组织内部纤维结构，降低组织性能。

6、现有的生物假体组织抗钙化方法存在抗钙化效果不理想，以及处理后降低假体组织性能的风险，在抗钙化处理工艺上有很大的改善提高空间，以进一步满足生物假体组织性能与相容性的需求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织，以解决现有技术中存在的抗钙化方法抗钙化效果不理想、抗钙化处理后导致组织性能下降的问题。

2、为解决上述技术问题，本发明提供一种生物假体组织的抗钙化方法，包括：

3、将至少被部分交联固定的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，所述脱脂溶液包括含表面活性剂的醇溶液；

4、将脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理。

5、进一步，本发明提供的生物假体组织的抗钙化方法包括：

6、s1：选取至少被部分交联固定的生物假体组织进行清洗；

7、s2：将所述步骤s1中清洗后的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理；

8、s3：将所述步骤s2中脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理；

9、s4：对所述步骤s3中经过还原处理后的生物假体组织进行清洗。

10、进一步的，生物假体组织的组织来源选自牛心包、猪心包、猪组织瓣膜、血管、皮肤、小肠粘膜下层、脑脊膜、膀胱内膜、韧带或肌腱。

11、进一步的，所述s1中对所述生物假体组织进行清洗采用的清洗液为无菌生理盐水或磷酸盐缓冲溶液。其中，磷酸盐缓冲溶液中磷酸盐的浓度可以为0.05-0.2mol/l，ph值为6.8-8.6。

12、进一步的，所述脱脂溶液中，表面活性剂的质量浓度为0.1％-10％。

13、进一步的，所述脱脂溶液中，醇的质量浓度为10％-90％。

14、进一步的，所述脱脂溶液为包含表面活性剂和醇的磷酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.2mol/l，溶液的ph值为6-8。

15、进一步的，所述s2中，对生物假体组织进行脱脂处理后，采用ph值为6.8-8.6浓度为0.05-0.2mol/l的磷酸盐缓冲溶液或无菌生理盐水对脱脂后的生物假体组织进行清洗。

16、进一步的，所述脱脂溶液中，醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇和山梨醇中的一种或几种组合。

17、进一步的，所述脱脂溶液中，表面活性剂选自非离子型表面活性剂、离子型表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或几种组合。

18、进一步的，所述非离子型表面活性剂选自tritonx-100、吐温、葡糖苷类、甲基葡糖胺、n-十二烷基葡萄糖胺、糖基石胆酸酯两亲分子、糖酵素、洋地黄皂苷、烷基葡萄糖酰胺和椰油酰单乙醇酰胺中的一种或几种组合；

19、所述离子型表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠，脱氧胆酸钠、胆酸钠、肌氨酸、十二烷基聚氧乙烯醚硫酸酯钠和葡萄糖脂季铵盐中的一种或几种组合；

20、所述两性离子表面活性剂选自3-(3-(胆酰胺丙基)二甲氨基)丙磺酸内盐、磺基甜菜碱类、羧酸基甜菜碱、油酸基硫酸酯盐型咪唑啉、十二烷基氨基丙酸和氨基酸类表面活性剂中的一种或几种组合。

21、进一步的，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.01％-10％。

22、进一步的，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.02％-5％。

23、进一步的，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.02％-2％。

24、进一步的，所述含有还原剂的溶液为包含还原剂的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的浓度大于等于0.05mol/l，ph值为3.8-10.0。

25、进一步的，所述含有还原剂的溶液为包含还原剂的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.5mol/l，ph值为6.8-8.6。

26、进一步的，所述s3中对所述生物假体组织进行还原处理时，进行一次或多次还原处理。

27、进一步的，所述s3中对所述生物假体组织进行还原处理时，进行2-6次还原处理。

28、进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自硼氢化物和/或硼烷类。

29、进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化锌、三乙酰基硼氢化钠、硼氢化锂、乙硼烷、二甲胺基硼烷和硼烷叔丁胺中的一种或几种组合。

30、进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自还原性金属和/或其氢化物。

31、进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自氢化铝钠、二甲氧基乙氧基氢化铝、二异丁基氢化铝、锌粉和镁粉中的一种或几种组合。

32、进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自含硫还原剂或三乙基硅烷。

33、进一步的，所述含有还原剂的溶液中，所述含硫还原剂选自连二亚硫酸钠和/或亚硫酸氢钠。

34、进一步的，所述s4中，使用磷酸盐缓冲溶液或醇类溶液对还原处理后的生物假体组织进行清洗。其中，磷酸盐缓冲溶液的ph值为6.8-8.6，磷酸盐的浓度可以为0.05-0.2mol/l；醇类溶液中醇的体积分数可以为10％-50％。

35、本发明还提供了一种生物假体组织，采用如上所述的生物假体组织的抗钙化方法处理后制备得到。

36、综上所述，与现有技术相比，本发明提供的生物假体组织的抗钙化方法具有以下优点：

37、本发明创新性的采用了脱脂工艺结合还原剂还原的方法对生物假体组织进行抗钙化处理，其中脱脂工艺中使用的表面活性剂具有亲油亲水的性能，醇能够溶解材料内磷脂等小分子脂质，最终更好的去除生物材料中含有的脂质，还原工艺可以还原固定过程产生的席夫碱和残余的醛基，起稳定化学键的作用，不易水解，植入体内更加安全，两步法结合使得最终材料磷脂含量和残余醛基显著降低，具有更良好的抗钙化效果，且两步反应相互独立，工艺上易实现。

38、本发明采用的脱脂工艺中，选用的脱脂试剂水溶性良好，易渗透，可有效溶解组织中的磷脂，具有抗钙化效果好，对组织损伤小等优点。

39、进一步的，本发明中还原处理采用低浓度还原剂，可对生物假体组织进行多次还原处理，一方面降低还原剂浓度(还原剂比较活泼，易产生气体)，有利于减少气体产生速率，从而保护生物假体组织的结构免被气体损伤，对生物假体组织结构影响和破坏小，使还原处理过程更加温和；另一方面进行多次还原处理也保证了还原处理的效果可靠性。

40、本发明的抗钙化的处理方法工艺适应性强，对生物假体组织的性能影响较小，经处理的生物假体组织适用范围更广，既可以进行脱水干燥，eo灭菌，也可以进行液体存储和液体灭菌，组织可用于制造干态膜。