地美硝唑在制备治疗猫腹泻药物中的应用、一种用于治疗猫腹泻的地美硝唑制剂的制作方法

1.本发明涉及兽用药物领域，特别涉及地美硝唑在制备治疗猫腹泻药物中的应用。


背景技术：

2.地美硝唑，化学名称为：1,2-二甲基-5-硝基咪唑，分子式为c5h7n3o2，分子量为141.13，其结构式为：该化合物为类白色或微黄色粉末，光照不稳定，遇光渐变黑，无臭或基本无臭，溶于氯仿、乙醇、稀碱和稀酸，不溶于水和乙醚。
3.地美硝唑获批适应症为：预防螺旋体引起的猪下痢，防治禽类的组织滴虫病及六鞭虫病。其已知可以用于治疗禽弧菌性肝炎、坏死性组织、火鸡组织滴虫病。经查询，并无其在制备治疗猫腹泻药物中应用的相关报道。
4.猪三毛滴虫病是近些年来新发现的一种猪原虫病，在临床上以小猪顽固性腹泻较为常见，是导致小猪腹泻的重要原因之一。为了筛选治疗该病的理想药物，《不同药物对猪三毛滴虫病的治疗效果观察》一文展开了相关研究，其按每1000kg饲料添加20%地美硝唑1500g对患猪进行治疗，研究结果表明，由于耐药性问题以及感染猪三毛滴虫后并发感染其他肠道细菌（如大肠杆菌、沙门氏菌）问题导致单纯使用地美硝唑不能完全治愈患猪，尽管粪检中未检出三毛滴虫，但仍有部分患猪存在腹泻现象，治疗效果并不理想。


技术实现要素：

5.本发明的第一目的在于提出地美硝唑在制备治疗猫腹泻药物中的新应用；本发明的第二目的在于提供一种用于治疗猫腹泻的地美硝唑制剂；本发明的第三目的在于提供地美硝唑咀嚼片的制备方法；本发明的第四目的在于提出地美硝唑制剂或地美硝唑咀嚼片在制备治疗猫腹泻药物中的应用。
6.为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：本发明首先提出了化合物地美硝唑在制备治疗猫腹泻药物中的应用。
7.地美硝唑获批适应症为：预防螺旋体引起的猪下痢，防治禽类的组织滴虫病及六
in four different management models for unowned cats in the southeast united states. vet j 236:49
–
55.）报道，39%产生腹泻症状的猫与毛滴虫感染有关，而目前报道罗硝唑是治疗猫胎儿三毛滴虫的唯一有效药物，其治疗周期长达两周以上，且由于罗硝唑具有明显的毒性作用，可导致神经毒性（《plumb's veterinary drug handbook(2008)》807页），嗜睡，呕吐等，具有较强的致畸性，被列入禁药，因此开发用于猫胎儿三毛滴虫的安全、高效的药物具有强烈需求，本发明使用地美硝唑治疗猫胎儿三毛滴虫引起的腹泻具有意想不到的效果。
17.本发明使用地美硝唑治疗猫胎儿三毛滴虫引起的腹泻的过程中，通过剂量把控，解决了耐药性问题，实现短期一次性杀灭滴虫的作用，效果极好。具体的，对因猫胎儿三毛滴虫引起的猫腹泻的地美硝唑疗效考察表明，经一周的给药治疗，9只患猫大便全部恢复正常状态，且患猫的猫胎儿三毛滴虫检测全部呈现阴性，药物有效率高达100%，治愈率100%。
18.本发明提供了一种用于治疗猫腹泻的地美硝唑制剂，以地美硝唑为有效成分，还包含有其他的药学上可接受的辅料。
19.作为优选，所述药学上可接受的辅料包括：填充剂、甜味剂、润滑剂、助流剂、着色剂和诱食剂中的一种或几种。
20.作为进一步优选，所述制剂为咀嚼片。
21.现有地美硝唑药物为地美硝唑预混剂，但其具有以下缺点：（1）现有地美硝唑预混剂的使用方法为将一定剂量的预混剂搅拌于日粮中或溶于饮水中，由于地美硝唑产品本身存在稳定性差、见光变黑等问题，使得其治疗实际利用率不高，且不易储存和使用，容易造成浪费；（2）现有的地美硝唑预混剂味苦，适口性差，这会引起动物采食量减少，最终导致药物摄取剂量不足，从而影响药物的临床疗效；（3）现有地美硝唑预混剂对呼吸道粘膜具有一定的刺激性，副作用明显；（4）现有地美硝唑预混剂在体内吸收过程中易受各种酸碱和酶类的影响，导致药效降低。
22.本发明提供的一种用于治疗猫腹泻的地美硝唑咀嚼片，通过更改剂型、添加着色剂，减少光接触面积和制剂的光透过率，极大的提高了药物的光照稳定性。经比对，现有的地美硝唑预混剂在光照30天后的最大单杂约达到了同等光照条件下本发明的地美硝唑咀嚼片最大单杂的37倍，总杂则达到了约7.4倍，可见本发明的地美硝唑咀嚼片的光照稳定性明显优于地美硝唑预混剂，更容易储藏。其次，本发明提供的一种地美硝唑咀嚼片通过添加甜味剂、诱食剂等对地美硝唑的苦味进行矫正，咀嚼片口味佳且适口性好，猫服从性高，因此药物利用率更高，且与地美硝唑预混剂相比，喂食的剂量更容易控制，不容易造成浪费。此外，本发明的地美硝唑咀嚼片经咀嚼后可以直接在舌下毛细血管吸收，吸收速度快，生物利用度高，且不经过肠胃，肝肠循环，副作用小，不会对肠胃造成负担，不会对肝脏造成伤害，而且不会有首过效应，体内药物血浓度高。
23.作为进一步优选，所述地美硝唑制剂的各组分的质量份为：地美硝唑25~35，填充剂35~55，甜味剂5~25，润滑剂1~3，助流剂1~3，着色剂2~5及诱食剂2~10。
24.作为进一步优选，所述填充剂包括直压乳糖、微晶纤维素、预胶化淀粉、甘露醇、山梨醇和木糖醇中的一种或几种。
25.作为进一步优选，所述甜味剂包括阿斯巴甜、三氯蔗糖、糖精钠和山梨醇中的一种或几种。
26.作为进一步优选，所述润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉和聚乙二醇6000中的一种或几种。
27.作为进一步优选，所述助流剂包括胶态二氧化硅。
28.作为进一步优选，所述着色剂包括日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、果绿、靛蓝、β-胡萝卜素和葡萄紫中的一种或几种。
29.作为进一步优选，所述诱食剂包括牛肉香精、鸡肉香精、鱼肉香精和虾肉香精中的一种或几种。
30.一种用于治疗猫腹泻的地美硝唑咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：（s.1）将地美硝唑、填充剂、甜味剂、润滑剂、助流剂、着色剂和诱食剂充分混合均匀，得到混合粉；（s.2）将所述混合粉进行压片得到地美硝唑咀嚼片。
31.作为进一步优选，所述（s.1）包括以下步骤：a.将填充剂与着色剂共同过筛，混合均匀；b.将步骤a所得混合物与地美硝唑、诱食剂共同过筛，混合均匀；c.将步骤b制得的混合物与甜味剂、润滑剂、助流剂共同过筛，混合均匀，得到混合粉。
32.所述地美硝唑制剂或地美硝唑咀嚼片在制备治疗猫腹泻药物中应用。
33.经验证，本发明的地美硝唑咀嚼片对猫腹泻进行治疗效果较好，如在剂量40mg/kg，每日两次的给药治疗下，给药第1天的治愈率即达到55.6%，在给药第6天的患猫全部被治愈，治愈率高达100%。
34.作为进一步优选，所述猫腹泻为因原虫引起的猫腹泻。
35.作为进一步优选，所述原虫为猫胎儿三毛滴虫。
36.因猫胎儿三毛滴虫引起的猫腹泻具有难诊断性、顽固性、易复发性、易传染性，对猫的健康存在一定威胁，目前兽医临床上使用最有效的药物是罗硝唑，但其最短治疗周期长达两周，且由于罗硝唑具有明显的毒性作用，因此副作用较大。
37.经验证，本发明的地美硝唑咀嚼片在治疗猫胎儿三毛滴虫引起的腹泻中，疗效较好，9只患猫经一周给药治疗后，未发现试验猫持续软便、便血现象，大便全部恢复正常状态，且患猫的猫胎儿三毛滴虫检测全部呈现阴性，药物有效率高达100%，治愈率100%，极大地缩短了猫腹泻治疗周期，且整个治疗过程没有发现明显副作用。
38.本发明与现有技术相比有以下优点：（1）本发明对已知化合物1,2-二甲基-5-硝基咪唑发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域，药用前景较好；（2）本发明的地美硝唑咀嚼片治疗猫腹泻疗效十分显著，药物药理作用强，腹泻治愈率高，治疗周期短；（3）本发明提供的一种地美硝唑咀嚼片通过更改剂型、添加着色剂，减少光接触面积，极大的提高了药物的光照稳定性，利于存放，药品的安全性高；（4）本发明提供的一种地美硝唑咀嚼片通过添加甜味剂、诱食剂等对地美硝唑的
苦味进行矫正，咀嚼片口味佳且适口性好，猫服从性高，药物利用率更高，且与地美硝唑预混剂相比，喂食的剂量更容易控制，不容易造成浪费；（5）本发明的地美硝唑咀嚼片经咀嚼可以直接在舌下毛细血管吸收，吸收速度快，生物利用度高，且因不经过肠胃，肝脏循环，副作用小，不会对肠胃造成负担，不会对肝脏造成伤害，亦不会有首过效应，体内药物血浓度高；（6）本发明的用于治疗猫腹泻的地美硝唑咀嚼片制备方法简单，操作方便，无需复杂设备和制备步骤。
具体实施方式
39.下面结合具体实施例对本发明做进一步描述。本领域普通技术人员在基于这些说明的情况下将能够实现本发明。此外，下述说明中涉及到的本发明的实施例通常仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。因此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
40.下述实施例中所述的地美硝唑咀嚼片的统一制备方法如下：（s．1）将地美硝唑、着色剂和诱食剂分别过100目筛，备用；（s．2）称取处方量的填充剂与着色剂共同过30目筛，混合均匀；（s．3）将（s．2）所得混合物与处方量的地美硝唑、诱食剂共同过30目筛，混合均匀；（s．4）将（s．3）制得的混合物与处方量的甜味剂、润滑剂、助流剂共同过30目筛，混合均匀，得到混合粉；（s．5）将所述混合粉进行压片，得到地美硝唑咀嚼片，所述地美硝唑咀嚼片每片质量为200mg。
41.实施例1一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：30份；直压乳糖：52份；山梨醇：10份；硬脂酸镁：2份；日落黄：1份；牛肉香精：5份。
42.实施例2一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：30份；直压乳糖：32份；山梨醇：15份；硬脂酸镁：1份；胶态二氧化硅：1份；果绿：3份；鱼肉香精：18份。
43.实施例3一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：35份；预胶化淀粉：35份；阿斯巴甜：9份；滑石粉：3份；胶态二氧化硅：3份；胭脂红：5份；虾肉香精：10份。
44.实施例4一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：25份；甘露醇：55份；三氯蔗糖：5份；滑石粉：1份；胶态二氧化硅：2份；苋菜红：2份，鸡肉香精：10份。
45.实施例5
一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：30份；木糖醇：40份；糖精钠：19份；聚乙二醇6000：2份；胶态二氧化硅：1份；靛蓝：3份；鸡肉香精：5份。
46.实施例6一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：28份；山梨醇：45份；三氯蔗糖：15份；聚乙二醇6000：3份；胶态二氧化硅：3份；β-胡萝卜素：4份；虾肉香精：2份。
47.实施例7一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：32份；微晶纤维素：37份；阿斯巴甜：25份；滑石粉：1份；胶态二氧化硅：1份；柠檬黄：2份；鱼肉香精：2份。
48.实施例8一种地美硝唑咀嚼片，各组分及其质量份如下：地美硝唑：30份；直压乳糖：34份；山梨醇：16份；硬脂酸镁：1份；胶态二氧化硅：1份；葡萄紫：3份；鸡肉香精：15份。
49.为了测试本发明制得的地美硝唑咀嚼片的光照稳定性、溶出度及治疗效果，进行如下验证试验：验证试验1：光照稳定性试验（1）试验样品：实施例2制得的地美硝唑咀嚼片；（2）对比样品：地美硝唑预混剂（生产厂家：合肥中龙神力动物药业有限公司；批准文号：兽药字120151143）；（3）测定方法：《中国药典》2020年版四部通则0512高效液相色谱法，具体如下：a.溶液的制备供试品溶液的配制：分别取试验样品、对比样品适量置于不同的棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg样品的试验样品供试品溶液和对比样品供试品溶液。
50.对照溶液的制备：分别精密量取试验样品供试品溶液和对比样品供试品溶液0.5ml，置于不同的100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀得试验样品对照溶液、对比样品对照溶液。
51.系统适用性溶液的配制：取地美硝唑系统适用性对照品（含杂质1）适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml溶液中含0.5mg地美硝唑、2.5μg杂质1的溶液。
52.b.色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-甲醇（80：20）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为310nm；柱温为30℃。
53.c.测定法分别精密量取上述试验样品供试品溶液和试验样品对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。同样方法对对比样品进行测定。为减小误差，供试品溶液色谱图中如有与系统适用性溶液中杂质1保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于自身对照溶液中地美硝唑峰面积；其他未知杂质峰面积不得大于自身对照溶液中地美硝唑峰面积。
54.（4）将相同试验样品、对比样品放置在光照强度为4500
±
500lx的条件下，光照10天和30天，使用上述测定方法再次对有关物质的含量进行检测。
55.（5）按外标法以峰面积计算，得有关物质的含量如下：（6）上述试验结果表明：在放置条件为0天时，试验样品杂质1、最大单杂与总杂均小于对比样品，可见本发明的地美硝唑咀嚼片略优于现有的地美硝唑预混剂。经10天的光照处理后，对比样品的有关杂质含量发生了较大的变化，特别是最大单杂含量，最大单杂含量达到了初次检测的24倍，总杂含量则是达到了初次检测的3.8倍，30天后最大单杂约达到初次检测的37倍，总杂约达到初次检测的7.9倍，可见对比样品地美硝唑预混剂的光照稳定性较差，难以长期进行储存。然而，试验样品在10天和30天光处理后，杂质含量变化极小，且就最大单杂而言，30天光照后其含量约为同等光照条件下地美硝唑预混剂最大单杂的1/37，可见本发明的地美硝唑咀嚼片的光照稳定性明显优于地美硝唑预混剂，更容易储藏。
56.验证试验2：溶出度检测试验（1）试验样品：取实施例1所制得的地美硝唑咀嚼片12片；（2）溶出度测定方法：《中国药典》2020年版四部通则0931第一法，以ph1.0盐酸溶液为溶出介质，体积900ml，转速50r/min，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液作为溶出度母液，精密量取溶出度母液2ml，置于10ml棕色量瓶中，加溶出介质稀释定容，摇匀，即得供试品溶液，取上述供试品溶液用紫外可见光光度仪测量其在275nm与439nm下的吸光度，用双波长等吸收差值法计算溶出度；（3）溶出度结果如下：
（4）上述试验结果表明：本发明实施例1所制备的地美硝唑咀嚼片在30min的平均溶出度高达96.9%，远远超出片剂溶出标准，且溶出情况良好，生物利用率较高。
57.验证实验3：对猫腹泻的疗效考察（1）选取试验对象：临床入组患有腹泻的猫54只，分为6组，每一组编号分别为1~10、11~20、21~29、30~38、39~46、47~54，其中第一组到第四组的治疗药物为实施例1制得的地美硝唑咀嚼片，第五组和第六组为阳性对照组，分别给与恩诺沙星片和甲硝唑片；（2）具体给药参数：第一组，给药剂量30mg/kg，每日一次；第二组，给药剂量40mg/kg，每日一次；第三组，给药剂量30mg/kg，每日两次；第四组，给药剂量40mg/kg，每日两次；第五组，恩诺沙星给药剂量5mg/kg，每日两次；第六组，甲硝唑给药剂量15mg/kg，每日一次；（3）临床疗效观察：连续给药一周，观察患猫腹泻情况，制作猫腹泻情况观察表，其中“√”表示大便恢复正常，
“×”
表示大便未恢复正常，持续腹泻，“√a”表示大便未恢复正常，转为软便。d0表示给药第一天，d1表示给药第二天，d2表示给药第三天，依此类推。临床疗效观察结果如下：
（4）数据总结：总结上述实验数据表，计算相关药物的治愈率，其中治愈率计算公式为：药物治愈率=本组大便恢复正常猫数/本组总猫数。总结治愈率表如下：
（5）上述试验结果表明：采用本发明实施例1制得的地美硝唑咀嚼片对猫腹泻进行治疗，试验结果表明，经一周给药治疗，绝大多数猫咪都会被治愈，其中在40mg/kg，每日两次的给药剂量下，给药第一天（d0）的患猫平均治愈率即达到55.6%，在给药第六天（d5），全组9只患猫大便全部恢复正常状态，治愈率高达100%。然而，在采用恩诺沙星、甲硝唑对患猫腹泻进行治疗的小组，经一周给药，仅有7只患猫大便变为软便状态，治愈率为0%。
58.验证试验4：对因猫胎儿三毛滴虫引起的猫腹泻的疗效考察（1）选取试验对象：临床入组患有因胎儿毛滴虫引起腹泻的猫共9只，编号为1~9号；（2）具体给药参数：采用实施例1制得的地美硝唑咀嚼片，按照20mg/kg剂量给药，每天一次，连续一周，观察腹泻情况；（3）临床疗效观察：观察患猫腹泻情况，制作对因猫胎儿三毛滴虫引起的猫腹泻疗效考察表，其中“√”表示大便恢复正常，
“×”
表示大便未恢复正常，持续腹泻。经一周给药治疗后，对患猫进行猫胎儿三毛滴虫便检，其中“阴性”表示未检出，“阳性”表示患猫持续感染猫胎儿三毛滴虫。试验结果如下：（4）上述试验结果表明：经一周地美硝唑咀嚼片给药治疗，9只患猫大便全部恢复正常状态，且患猫的猫胎儿三毛滴虫检测全部呈现阴性，药物有效率100%，治愈率100%，具体的，在给药3天（d2）有效率为55.6%，给药4天（d3）有效率为66.7%，给药5天（d4）有效率为
88.9%，给药7天（d6）有效率达到100%。相比已知当前治疗猫胎儿三毛滴虫引起猫腹泻的首选治疗药物罗硝唑，治疗周期缩短了一半，且整个治疗过程没有发现明显副作用，安全可靠。