副干酪乳杆菌207-27的用途的制作方法

本技术涉及副干酪乳杆菌或其后代或包含所述副干酪乳杆菌或其后代的组合物在制备药物或食品中的用途，本技术还涉及一种提高受试者胃肠道中副干酪乳杆菌的浓度的方法。

背景技术：

1、功能性便秘是临床上常见的胃肠道功能性疾病。我国成人慢性便秘的患病率为4％～6％，＞60岁的人群患病率可高达22％，在西方国家发病率约为27％。功能性便秘的发病机制主要包括以下4种：纤维素、水分摄入不足；肠道平滑肌肌张力降低，蠕动减弱；肠蠕动受机械性阻碍；排便肌群的活动障碍。国内外研究表明，除以上4种始动发病因素外，肠道菌群紊乱可参与慢性便秘的发生与进展。近年来，肠道微生态制剂作为便秘的辅助治疗，在功效性和安全性方面都表现出了独特的益处，从而受到人们越来越多的重视。

2、益生菌对润肠通便及肠道菌群调节的作用机理的研究正逐步深入，但尚不完善。部分理论包括：益生菌可以通过代谢产生多种有机酸，使肠腔内ph值下降，调节肠道蠕动；部分益生菌可诱导神经递质多巴胺、5-ht血浆浓度升高，亦可加快肠平滑肌收缩，加强肠蠕动；此外，健康的肠道微生物环境是促进肠蠕动的重要因素，益生菌的摄入可以改变宿主的的肠道菌群，从而维持健康平衡的肠道菌群，有利于肠道发挥正常的吸收和排泄功能。

3、此外，益生菌能否对机体发挥以上益生作用，还取决于菌株能否耐受机体胃肠道的防御机制，如胃液中的低ph值环境和小肠中胆汁酸等，而以活菌的状态顺利到达肠道，粘附于肠上皮细胞，并在肠道内定植，产生有益代谢产物并与宿主发生相互作用。因此，筛选能够进入肠道、具有高生存性的菌株，也是益生菌开发的首要考虑的问题。

4、根据益生菌的科学共识：目前研究表明，不同种的益生菌基因组差别较大，即便是同种益生菌的不同菌株之间也存在差异性。国际乳品联合会(international dairyfederation，idf)发布的《idf公报no.513/2021益生菌菌株水平鉴定指导文件》文件也指出，益生菌的功能性和安全性具有菌株水平特异性。由于同种益生菌的不同菌株含有或表达不同的功能基因，可发挥不同的益生功效，因此益生菌需要在微生物菌株水平上进行表征和描述。这种菌株特异性的差异也在本发明的相关实验研究结果中有所体现：即便是同一来源、种属相近的不同菌株，其生理特性和益生功效也存在显著差异。

5、因此，一种具有润肠通便功效的菌株将在益生菌生产和应用中具有广泛的应用潜能。

技术实现思路

1、本专利申请人在前期筛选到了一株益生菌—副干酪乳杆菌207-27，其微生物保藏编号为：gdmcc no.60960。在后续的研究过程中，意外的发现了该菌株在润肠通便方面具有突出的功效。例如，能够促进小肠运动，提高疾病模型下哺乳动物的排便数量及排便重量，还具有对肠道菌群正向调节的功能(即，能够使疾病状态下的肠道菌群恢复健康状态)。由此，完成了本发明。

2、因此，在第一方面，本技术提供了一种副干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)或其后代，或包含所述副干酪乳杆菌或其后代的组合物在制备药物或食品中的用途，所述药物或食品用于在受试者中维持和/或改善胃肠道健康，或者预防和/或治疗由胃肠道异常引起的疾病或症状；

3、其中，所述副干酪乳杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno.60960。

4、在某些实施方案中，所述维持和/或改善胃肠道健康包括：正向调节胃肠道微生物，和促进胃肠道运动。

5、在某些实施方案中，改善胃肠道健康是指使受试者的胃肠道状态趋近于受试者的健康状态。在此类实施方案中，所述受试者是患有便秘的受试者。

6、在某些实施方案中，维持胃肠道健康是指使受试者的胃肠道状态保持在相对稳定的状态。在此类实施方案中，所述受试者是健康或趋于健康的受试者。

7、在某些实施方案中，所述正向调节胃肠道微生物包括：刺激胃肠道中一种或多种有益胃肠道健康的微生物的生长和/或活性，抑制胃肠道中一种多种病原菌的生长和/或活性，增加非病原菌对胃肠道表面粘膜的附着，增加肠道对病原菌屏蔽能力，和/或产生有益胃肠道健康的微生物的代谢物。

8、在某些实施方案中，所述促进胃肠道运动包括：使受试者排便数量和/或排便重量趋近于受试者的健康状态。

9、如本文所使用的，术语“有益胃肠道健康的微生物”是指任何非致病的微生物，将其向宿主施用有效量时，能够对宿主的健康起到有益影响。

10、在某些实施方案中，所述有益胃肠道健康的微生物选自细菌，真菌。

11、在某些实施方案中，所述有益胃肠道健康的微生物是益生菌。

12、在某些实施方案中，所述胃肠道异常包括：由病原菌(例如，幽门螺旋杆菌)引起的胃肠道感染，结肠功能紊乱，胃肠功能紊乱。

13、在某些实施方案中，所述由胃肠道异常引起的疾病或症状包括：腹痛，腹胀，便秘，腹泻，厌食，恶心，呕吐，反酸。

14、在本文中，术语“药物”涵盖用于人类的药物以及用于动物的药物(即兽医应用)。在某些实施方案中，所述药物用于人。

15、在某些实施方案中，所述药物组合物包含副干酪乳杆菌的制剂。

16、在某些实施方案中，所述药物组合物包含药学上可接受的载体。

17、在某些实施方案中，所述药物组合物被配制用于口服施用。

18、在某些实施方案中，所述药物或食品是靶向胃肠释放的药物，或者是在胃肠中受控释放的药物。

19、在某些实施方案中，所述药物是丸剂、粉剂、胶囊剂、片剂(例如，泡腾片剂)、盖膜剂、口溶性颗粒剂、液体剂、栓剂或灌肠剂的形式。

20、在某些实施方案中，所述药物单独使用，或与其他抗真菌剂、止痛药、抗炎药、促愈合剂、或保湿剂联合使用。

21、在文本中，“食品”一词是广义的，包括人类的食物和饮物，也涵盖动物的食物和饮物(即饲料)。在某些实施方案中，所述食品适合于以及设计用于人类进食。

22、可以理解的是，根据用途、应用方式或施用方式的不同，本技术的食品可以是液体、固体、悬浮液或粉末的形式。

23、在某些实施方案中，所述食品选自固体饮料，糖果或果汁，或者，所述食品为乳制品(例如，酸奶，风味发酵乳，乳酸菌饮料，奶酪)。

24、在某些实施方案中，所述食品是膳食补充剂。

25、如本文中所使用的，术语“膳食补充剂”是指能够向消费者提供有益效果(例如，营养效果、预防效果、治疗效果或其他有益效果)的可食用的产品。在本文中，膳食补充剂涵盖保健食品、特医食品、营养品、补剂等产品。

26、在某些实施方案中，所述膳食补充剂被配制用于口服施用。

27、在某些实施方案中，食品还可包括(但不限于)下列物质中的一种或任何组合：益生菌(例如，益生细菌)，碳水化合物(例如，膳食纤维)，蛋白质(例如，酶)，脂类物质(例如，脂肪)，维生素，矿物质。

28、在某些实施方案中，食品还可包括免疫调节剂。

29、在某些实施方案中，食品还可包括植物成分(例如黄酮类、多酚类植物提取物等)，乳汁替代物，或者短双歧杆菌或其后代的代谢物或提取物。

30、在某些实施方案中，还可将本发明的菌株与不同的甜味剂或调味剂、调色物质、稳定剂、助流剂、填充剂等食品中可接受的辅料进行组合。

31、在某些实施方案中，所述食品还包含益生元。

32、在某些实施方案中，所述益生元选自低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、菊粉、螺旋藻、节旋藻、云芝多糖,胡萝含氮多糖、酪蛋白水解物、α-乳清蛋白、乳铁蛋白，或其任何组合。

33、在某些实施方案中，所述食品是丸剂、粉剂、胶囊剂、片剂(例如，泡腾片剂)、盖膜剂、口溶性颗粒剂、液体剂的形式。

34、在某些实施方案中，所述受试者为哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物选自鼠，猪，兔，猴，羊，人。

35、在某些实施方案中，所述食品中副干酪乳杆菌以106至1012cfu/剂量的量存在。

36、在某些实施方案中，所述食品中副干酪乳杆菌以108至1012cfu/剂量(例如，108cfu/剂量，109cfu/剂量，1010cfu/剂量，1011cfu/剂量，1012cfu/剂量)的量存在。

37、可以理解的是，本领域技术人员有能力根据受试者的具体情况而施用对受试者有效量的副干酪乳杆菌。

38、在某些实施方案中，所述组合物包含所述副干酪乳杆菌或其后代，以及选自以下的微生物：细菌，真菌，或其任何组合。

39、在某些实施方案中，所述微生物是益生菌。

40、在某些实施方案中，所述微生物是酵母。

41、在某些实施方案中，所述酵母选自酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)，布拉氏酵母(saccharomyces boulardii)，马克斯克鲁维酵母(kluyveromyces marxianus)，或其任何组合。

42、在某些实施方案中，所述细菌选自乳酸杆菌属(lactobacillus spp.)，双歧杆菌属(bifidobacterium spp.)，芽孢杆菌属(bacillus spp.)，丙酸杆菌属(propionibacterium spp.)，链球菌属(streptococcus spp.)，乳球菌属(lactococcusspp.)，片球菌属(pediococcus spp.)，肠球菌属(enterococcus spp.)，葡萄球菌属(staphylococcus spp.)，或其任何组合。

43、在某些实施方案中，所述乳酸杆菌属的细菌选自：副干酪乳杆菌，嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)，短乳杆菌(lactobacillus brevis)，詹氏乳杆菌(lactobacillus jensenii)，惰性乳杆菌(lactobacillus iners)，干酪乳杆菌(lactobacillus casei)，卷曲乳杆菌(lactobacillus crispatus)，弯曲乳杆菌(lactobacillus curvatus)，德氏乳杆菌(lactobacillus delbrueckii)，发酵乳杆菌(lactobacillus fermentum)，加氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)，瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus)，约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)，植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)，罗伊氏乳杆菌(lactobacillus reuteri)，鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)，清酒乳杆菌(lactobacillus sakei)，唾液乳杆菌(lactobacillus salivarius)，或其任何组合。

44、在某些实施方案中，所述双歧杆菌属的细菌选自：动物双歧杆菌(bifidobacterium animalis)，两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)，短双歧杆菌(bifidobacterium breve)，婴儿双歧杆菌(bifidobacterium infantis)，长双歧杆菌(bifidobacterium longum)，青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)，或其任何组合。

45、在某些实施方案中，所述芽孢杆菌属的细菌选自：枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)，凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)，或其任何组合。

46、在某些实施方案中，所述丙酸杆菌属的细菌选自：谢氏丙酸杆菌(propionibacterium shermanii)，费氏丙酸杆菌(propionibacterium freudenreichii),产丙酸丙酸杆菌(propionibacterium acidipropionici)，或其任何组合。

47、在某些实施方案中，所述链球菌属的细菌选自：嗜热链球菌(streptococcusthermophilus)，唾液链球菌(streptococcus salivarius)，或其任何组合。

48、在某些实施方案中，所述乳球菌属的细菌为乳酸乳球菌(lactococcus lactis)。

49、在某些实施方案中，所属肠球菌属(enterococcus spp.)的细菌选自：粪肠球菌(enterococcus faecalis)，屎肠球菌(enterococcus faecium)，蒙氏肠球菌(enterococcus mundtii)，或其任何组合。

50、在第二方面，本技术提供了一种提高受试者胃肠道中副干酪乳杆菌的浓度的方法，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的副干酪乳杆菌或其后代，或包含所述副干酪乳杆菌或其后代的组合物；

51、其中，所述副干酪乳杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno.60960。

52、在某些实施方案中，所述组合物如第一方面所定义。

53、在某些实施方案中，所述受试者为哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物选自鼠，猪，兔，猴，羊，人。

54、在第三方面，本技术提供了一种副干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)或其后代，或包含所述副干酪乳杆菌或其后代的组合物在受试者中维持和/或改善胃肠道健康，或者预防和/或治疗由胃肠道异常引起的疾病或症状的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的副干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)或其后代，或包含所述副干酪乳杆菌或其后代的组合物；

55、其中，所述副干酪乳杆菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno.60960。

56、在某些实施方案中，所述组合物如第一方面所定义。

57、在某些实施方案中，所述受试者为哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物选自鼠，猪，兔，猴，羊，人。

58、本技术的目的在于提供一株来自于中国四川健康婴儿肠道的副干酪乳杆菌207-27(lactobacillus paracasei 207-27)，其微生物保藏编号为：gdmcc no.60960。分类命名为：副干酪乳杆菌。保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心。保藏时间：2020年1月15日。保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所。

59、本技术的另一个目的是提供副干酪乳杆菌207-27作为益生菌在润肠通便方面的用途。

60、本技术的所述副干酪乳杆菌207-27对胃酸和胆盐有良好的耐受性，符合益生菌的基本要求。

61、本技术所述副干酪乳杆菌207-27能够能提高便秘模型小鼠小肠运动实验墨汁推进率，增加便秘模型小鼠排便数量和重量，调节肠道菌群。

62、副干酪乳杆菌207-27可用于针对以上功能的微生态制剂，所述制剂包括固体和液体。包括粉剂、片剂、薄膜制剂、颗粒剂、锭剂、丸剂、混悬剂、胶囊剂、液体剂或者其他适于口服给予的剂型。

63、副干酪乳杆菌207-27产品制剂的方法，其特征在于，所述方法包括：将所述副干酪乳杆菌207-27直接与其余填充物混合。其他填充物包含但不限于：麦芽糊精、抗性糊精、乳糖、淀粉、膳食纤维、微晶纤维素、糖醇(如甘露糖醇)、助流剂(如硬脂酸镁)、甜味剂、香精、色素等。对于液体剂型，如液体悬浮液，包括油，以及必要的乳化剂和悬浮助剂等。

64、以上所述制剂，所述副干酪乳杆菌207-27可以为主要成分单独使用，也可以与其它益生菌和相关功能原料一起配合使用。

65、所述副干酪乳杆菌207-27还可以用作发酵乳制品以及植物发酵制品的发酵剂。具体地，所述副干酪乳杆菌207-27可以作为乳制品发酵剂，例如可以作为发酵乳、风味发酵乳、含乳饮料或者植物基发酵制品的发酵剂。

66、除此之外，副干酪乳杆菌207-27可作为益生菌添加到各种食品。

67、术语定义

68、在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的分子遗传学、核酸化学、化学、分子生物学、生物化学、细胞培养、微生物学、细胞生物学、基因组学和重组dna等操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

69、如本文中所使用的，术语“益生元”是指能够促进至少一种益生菌菌株生长或扩增的物质。在某些实施方案中，益生元能够促进至少一种益生菌菌株在受试者体内(例如，在人体胃肠道中)生长或扩增。在某些优选的实施方案中，所述益生元能够促进副干酪乳杆菌在人体胃肠道中生长或扩增。

70、如本文所使用的，术语“有益胃肠道健康的微生物”是指任何非致病的微生物，将其向宿主施用有效量时，能够对宿主的健康起到有益影响。在某些实施方案中，所述有益胃肠道健康的微生物选自细菌，真菌。在某些实施方案中，所述有益胃肠道健康的微生物是益生菌。

71、如本文中所使用的，术语“后代”是指微生物通过生长(例如培养基中培养生长)而产生的子代细胞。可以理解的是，在微生物的培养过程中，遗传物质可能会发生变化(例如，1个或几个碱基的突变，置换或缺失)，而不同菌株在同一功能的有无会有显著的区分(参见，例如，ipainternational probiotics association)。因此，在某些实施方案中，所述后代与其所衍生自的菌株相比，具有相同的功能(例如，能够提高免疫力，改善过敏反应等)。在某些实施方案中，所述后代与其所衍生自的菌株相比，具有相同的生理生化特性(例如，菌落形态相同，具有相同的16s dna)，并且具有相同的功能(例如，促进小肠运动，提高疾病模型下哺乳动物的排便数量及排便重量，还具有对肠道菌群正向调节的功能)。在某些实施方案中，所述副干酪乳杆菌的后代为革兰阳性菌，菌落形态为杆状或棒状，棱角分明，无芽孢。在某些实施方案中，所述副干酪乳杆菌的后代具有促进小肠运动，提高疾病模型下哺乳动物的排便数量及排便重量，以及对肠道菌群正向调节的功能。

72、如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体，其是本领域公知的(参见例如remington'spharmaceutical sciences.edited by gennaro ar,19th ed.pennsylvania:mackpublishing company,1995)，并且包括但不限于：ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂。例如，ph调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液；表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如tween-80；离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。

73、如本文中所使用的，术语“膳食补充剂”是指能够向消费者提供有益效果(例如，营养效果、预防效果、治疗效果或其他有益效果)的可食用的产品。在本文中，膳食补充剂涵盖保健食品、特医食品、营养品、补剂等产品。

74、如本文中所使用的，术语“食品”包括人类的食物和饮物，也涵盖动物的食物和饮物(即饲料)。在某些实施方案中，所述食物产品适合于以及设计用于人类进食。

75、如本文中所使用的，术语“药物”涵盖了人类医学和兽医学中供人类和动物两者使用的药物，同时涵盖了用于掺入动物饲料(例如牲畜饲料和/或宠物食物)中的药物。此外，本文中所使用的术语“药物”意指提供治疗、预防和/或有益效果的任何物质。

76、如本文中所使用的，术语“cfu(colony-forming units)”是指产品中细菌、真菌、酵母等微生物的群落总数，通常用作活菌数计算。

77、如本文中所使用的，术语“cfu/剂量”意指每天或每次向受试者提供的组合物/食品/药物组合物中细菌存在的量。例如，在某些实施方案中，所述食品中副干酪乳杆菌以106至1012cfu/剂量的量存在(例如108至1012cfu/剂量)。在此种实施方案中，如果将副干酪乳杆菌施用在食品中(例如，在固体饮料、酸奶中)，则每天或每次向受试者提供的食品(例如固体饮料、酸奶)可含有约106至1012cfu的副干酪乳杆菌。当然，可替代地，这种细菌的量的可以分成多次施用，只要受试者在任何特定时间内(例如每24小时期间)接受的副干酪乳杆菌的总量是从约106至约1012cfu的细菌，即满足上述的食品中副干酪乳杆菌以106至1012cfu/剂量的量存在(例如108至1012cfu/剂量)。

78、如本文中所使用的，术语“病原菌”是指能入侵宿主引起感染的微生物，包括病毒，细菌，真菌，支原体，衣原体等。通常，它们能产生致病物质，造成宿主感染。在某些实施方案中，所述病原菌是能够引起哺乳动物(例如，小鼠，人)感染的微生物。在某些实施方案中，所述病原菌是能够引起哺乳动物(例如，小鼠，人)胃肠道感染的细菌。

79、如本文中所使用的，术语“正向调节胃肠道微生物”是指使受试者的胃肠道微生物趋近于受试者的健康状态。

80、发明的有益效果

81、本专利申请人在前期筛选到了一株益生菌—副干酪乳杆菌207-27，其具有保藏号gdmcc no.60960。在后续的研究过程中，意外的发现了该菌株，在润肠通便方向具有突出的功效。例如，能够促进小肠运动，能够提高疾病模型下哺乳动物的排便数量及排便重量，能够对肠道菌群正向调节的功能(即，能够使疾病模型下的肠道菌群恢复健康状态)。同时，在前期研究中已发现该菌株对胃酸和胆盐有良好的耐受性。因此，该菌株在维持健康受试者和/或恢复患胃肠道疾病(例如，便秘)受试者的胃肠道健康方面具有较高的潜能。

82、下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。

83、关于生物材料保藏的说明

84、副干酪乳杆菌207-27(lactobacillus paracasei 207-27)已在位于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼的广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc,guangdong microbialculture collection center)进行保藏，其具有保藏号gdmcc no.60960，且保藏时间为2020年1月15日。