一种治疗猫淋证的中兽药组合物

1.本发明属于中药制剂技术领域，特别是涉及一种治疗猫淋证的中兽药组合物及其制备方法。


背景技术：

2.猫下泌尿道综合征(feline lower urinary tract disease，flutd)是猫的一种常见疾病，严重影响猫的生活质量和健康。据统计，到宠物医院就诊的猫有3％-5％都是因为flutd，并且有大约30％-70％的flutd患猫会复发该病。flutd是一系列具有相似临床症状的异质性下泌尿道疾病的总称，患猫主要的临床症状包括排尿困难、排尿疼痛、尿频、尿淋漓、异位排尿等，flutd主要可分为猫特发性膀胱炎(feline idiopathic cystitis，fic)、细菌性尿路感染、尿路结石、尿路栓子、泌尿系统解剖结构异常、肿瘤等。其中，被诊断为fic的患猫最多，占所有flutd病例的55％-65％。多项研究表明，10岁以下，特别是2-7岁的青壮年猫更易患fic。另外，超重、低活动量、生活在多猫家庭、饮水不足等因素可能与fic有关。fic的病因复杂且不明确，很多研究提出fic可能与猫遭受各种压力导致的神经内分泌系统异常有关。最近，有文献提出用“潘多拉综合征”这个新术语来代替猫特发性膀胱炎，旨在避免使用特定器官命名带来的误解，以及更多地关注与之相关的全身多系统的并发症。公猫因为尿道较为狭窄，容易发生尿闭，若不及时进行医治，容易形成尿毒症和急性肾衰竭，最终导致患猫死亡。flutd患猫的死亡率为6％-36％。此外，因为宠物主人不愿意重复为出现下泌尿道症状和尿闭的患猫支付昂贵的诊断、治疗和住院护理费用，许多复发flutd的猫都会被安乐死，这进一步提高了死亡率。
3.目前，临床上基本没有治疗fic的特效药。在fic急性发作期，常用的治疗药物包括：抗生素、抗炎、解痉、镇痛类药物。但是，抗生素已被证明对治疗fic无效，非甾体抗炎药美洛昔康在两项临床试验中被发现对减轻下泌尿道症状无效，解痉药奥昔布宁和丙胺太林虽然能够缓解有些患猫的尿频症状，但随机对照研究表明，70％以上的fic患猫使用安慰剂(乳糖、小麦粉)治疗也有效，这说明用药和症状改善之间并不一定存在因果关系。此外，为减少fic的复发率，或延长fic发作的间隔期，三环类抗抑郁药阿米替林和情绪舒缓剂费洛蒙被推荐长期使用，以降低猫的应激。另外，粘多糖作为膀胱黏膜层替代物被推荐使用，以修护fic患猫受损的膀胱黏膜。但是，这些药物的有效性没有经过临床试验验证。而且，国外文献中推荐使用的很多药物在国内还没有被批准用于宠物临床。在国内市场上，有一些猫泌尿系统的保健品，成分包括海藻硫酸多糖、蔓越莓提取物、复合维生素等，但其有效性也没有经实验验证，大多数是给宠物主人的心理安慰剂。随着我国宠物行业的发展，养猫人群逐步增加，宠物猫的基数增大，使得flutd患猫的数量越来越多，给患猫带来痛苦的同时，也给广大宠物主人带来经济负担及精神压力。所以，研究治疗flutd的新药具有一定的现实意义。
4.在中兽医学中，flutd隶属于“淋证”范畴，故可被称为猫淋证。猫淋证的主要病因可分为外感湿热、饮食不节、情志失调、禀赋不足或年老久病等。参考淋证的中医分型，中兽
医中根据病机，可将猫淋证分为热淋(膀胱湿热型)、气淋(肝郁气滞型)、劳淋(久淋不愈型)三种，前两种多属于实证，而劳淋多属于虚证。热淋多是由于猫长期过食膏梁厚味，加上饮水不足、运动不够，导致湿热内生而成，或是由于外感湿热邪气注入下焦而成的。气淋多是由于现在的宠物猫常被圈养在室内，其活动范围和享有的资源有限，使它们不能充分表达自己的天性，加上生活中潜在的压力源，比如环境的变化、与家庭其他成员的关系不和谐等，使天性敏感猫感到焦虑、害怕，长期处于这种环境的猫肝气不舒，一但被刺激后应激，容易气结肝郁，发生气淋。劳淋则是由于久病不愈，或淋证反复发作，导致正气虚衰而成的。由于应激因素与fic的相关性，临床常见的fic患猫更倾向为中兽医分型中的气淋。另外，猫淋证根据临床症状又可分为血淋、石淋和膏淋三种，分别表现为为尿中带血，尿带细砂石，以及尿色浑浊、尿液粘稠。如《金匮要略》中所描述的“淋之为病，小便如粟状，小腹弦急，痛引脐中”一样，淋证患猫发病的初级阶段会以尿淋漓、尿频、尿痛为主证。此后，若病情进一步发展，热灼血络，则会出现血淋；湿热煎熬尿液成石，则会出现石淋；湿热下注，膀胱不能泌别清浊，则尿如米泔或脂膏，会出现膏淋。此外，如《元亨疗马集》中所描述的“胞经无入气通传，分利阴阳似涌泉，清气不升浊气闭，积而盈满不通宣”一样，如果热结膀胱，气滞不利，有部分淋证患猫会发生“胞转”，即尿闭。
5.中药治疗淋证具有安全、毒副作用小，短期和长期疗效均显著，价格便宜等优势。但是，传统中药多为水煎服的汤剂，存在操作不便、口感差、药物有效成分散失、不利于推广等不足。本发明中石韦、车前子、淡竹叶清热渗湿、利尿通淋，沉香、白芍、炙甘草行气止痛、柔肝养阴。诸药合用，标本兼治，扶正祛邪，可以避免西药引发的不良反应，明显提高疗效，降低复发率。本发明的目的是提供一种服用方便、可充分保留药物有效成分、质量稳定可控，能满足临床需求的一种治疗猫淋证的中兽药组合物。


技术实现要素：

6.本发明的一种具有镇痛、抗炎、利尿作用的中兽药组合物是在中兽医理论指导下，结合研制者的临床经验，参照现代药理学研究成果组方，并经药效学研究制成的。
7.本发明的目的是提供一种服用方便、可充分保留药物有效成分、质量稳定可控，能满足临床需求的一种治疗猫淋证的中兽药组合物。本发明的另一目的是提供该药物的制备方法。
8.本发明是通过以下技术方案实现的：
9.本发明提供一种治疗猫淋证的中兽药组合物，其主要由如下原料药制成：
10.石韦 20份 车前子 20份 淡竹叶 20份
11.沉香 20份 白芍 20份 炙甘草 20份
12.本发明提供的上述中兽药组合物的制备方法是通过以下技术方案来实现的：
13.1)取石韦，微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，用低温破壁机打粉，使之成为细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，备用。
14.2)取车前子，微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，用低温破壁机打粉，使之成为细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，备用。
15.3)取淡竹叶，微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，用低温破壁机打粉，使之成为细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，备用。
16.4)取沉香，微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，用低温破壁机打粉，使之成为细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，备用。
17.5)取白芍，微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，用低温破壁机打粉，使之成为细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，备用。
18.6)取炙甘草，微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，用低温破壁机打粉，使之成为细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，备用。
19.7)将1)、2)、3)、4)、5)、6)中所得六味中药超微粉混匀，即得到一种具有镇痛、抗炎、利尿作用的中兽药组合物，加入相应的可药用的载体，制成口服药物。
20.所述的口服药物可以是任何一种药剂学上所说的口服剂型。
21.所述的口服药物包括但不限于散剂、胶囊剂。
22.所述的口服散剂可采用下述方法制得：取120份所制得的中兽药组合物，用小型电动磨粉机进一步研磨、搅拌、混匀，平均分成10袋，每袋含12份中兽药组合物，热压塑封包装即得。
23.所述的口服胶囊剂可采用下述方法制得：取300份所制到的中兽药组合物，用小型电动电动磨粉机进一步研磨、搅拌、混匀，使用100孔0号胶囊板，将中兽药组合物平均分装到100粒0号胶囊体中，每粒含3份中兽药组合物，盖上胶囊帽即得。
24.本发明药物具有清热渗湿、利尿通淋、柔肝养阴、行气止痛的功效，具有抗炎、镇痛、利尿的作用。本发明药物服用方便、可充分保留药物有效成分、质量稳定可控，无不良反应，疗效显著。
25.下面通过具体实施例和药效学试验结果对本发明做进一步说明。
具体实施方式
26.下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，而并非对发明的限定，依照本领域公知的现有技术，本发明的实施方式并不限于此，因此凡依照本公开内容所做出的本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
27.实施例1：
28.处方：
29.石韦 2g 车前子 2g 淡竹叶 2g
30.沉香 2g 白芍 2g 炙甘草 2g
31.制成10袋散剂
32.制备方法：
33.按处方取石韦、车前子、淡竹叶、沉香、白芍、炙甘草，分别微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，分别用低温破壁机打粉，制成细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，混匀制得中兽药组合物，用小型电动磨粉机进一步研磨、搅拌、混匀，平均分成10袋，每袋含1.2g中兽药组合物，热压塑封包装即得。
34.实施例2：
35.处方：
36.石韦 5g 车前子 5g 淡竹叶 5g
37.沉香 5g 白芍 5g 炙甘草 5g
38.制成100粒胶囊
39.制备方法：
40.按处方取石韦、车前子、淡竹叶、沉香、白芍、炙甘草，分别微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，分别用低温破壁机打粉，制成细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，混匀制得中兽药组合物，用小型电动磨粉机进一步研磨、搅拌、混匀，使用100孔0号胶囊板，将中兽药组合物平均分装到100粒0号胶囊体中，每粒胶囊含0.3g中兽药组合物，盖上胶囊帽即得。
41.实施例3：
42.处方：
43.石韦 1g 车前子 1g 淡竹叶 1g
44.沉香 1g 白芍 1g 炙甘草 1g
45.制成0.2g/ml的混悬液
46.制备方法：
47.按处方取石韦、车前子、淡竹叶、沉香、白芍、炙甘草，分别微波低温干燥脱水，使中药材水分含量在5％以下，分别用低温破壁机打粉，制成细胞破壁率在95％以上，粉体粒径在5μm以下的中药超微粉，混匀制得中兽药组合物，加入30ml蒸馏水，制成0.2g/ml的混悬液。
48.实施例4：药效学试验
49.本发明提供的是一种具有抗炎、镇痛、利尿的中兽药组合物，为证明其治疗效果，发明者使用按实施例3中提供的方法制备得到的混悬剂进行了药效学试验，研究结果如下：
50.1、抗炎作用
51.1)试验材料
52.本发明所述实施例3中制备的中兽药组合物混悬剂，浓度为0.2g/ml。
53.2)试验方法
54.取4周龄大，体重为25
±
2g的健康spf级昆明系小鼠18只，随机均分为3组，每组6只，雌雄各半。分别为阴性对照(蒸馏水)组，阳性对照(2.5mg/ml吲哚美辛)组，实验组(0.2g/ml中兽药组合物)组。适应性饲养3天后灌胃给药，每日一次，每次0.2ml，连续给药3天。末次给药30min后，于每只小鼠右耳耳廓前后两面均匀涂布二甲苯50μl，左耳为对照。致炎30min后，将小鼠颈椎脱臼致死，沿耳廓基线剪下两耳，用6mm直径的打孔器在两耳同一部位打下圆耳片，在万分之一精密电子天平上准确称重。肿胀程度用左、右两侧耳片重量之差表示，抗炎作用强度用抑制率表示。肿胀程度(mg)＝致炎侧耳片重(mg)-非致炎侧耳片重(mg)，抑制率(％)＝(阴性对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/阴性对照组平均肿胀度
×
100％。实验数据用表示，实验结果采用spss 26.0统计软件进行处理。各组间比较采用单因素方差分析，其中方差齐者用lsd法，方差不齐者用dunnett's t3法检验，p＜0.05表示存在显著性差异。具体结果见表1。
55.表1不同药物制备物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(n＝6)
[0056][0057]
注：*代表各给药组与阴性对照组相比，p《0.05。
△
代表实验组与阳性对照组相比，p》0.05。
[0058]
由表1可知，阳性对照组、实验组的耳廓肿胀度明显小于阴性对照组，差异具有显著性(p《0.05)。实验组的耳廓肿胀度与阳性对照组差异不显著(p》0.05)。
[0059]
该结果表明，阳性对照组、实验组均对二甲苯所致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，且实验组中兽药组合物与阳性对照药物效果相当，说明本发明的中兽药组合物具有明显的抗炎效果。
[0060]
2、镇痛作用
[0061]
2.1不同药物制备物对小鼠热刺激痛阈的影响
[0062]
1)试验材料
[0063]
本发明所述实施例3中制备的中兽药组合物混悬剂，浓度为0.2g/ml。
[0064]
2)试验方法
[0065]
取4周龄大，体重为25
±
2g的健康雌性spf级昆明系小鼠若干只，适应性饲养3天。使用智能热板仪测定小鼠在55.0
±
0.5℃热板上的基础痛阈值，即小鼠出现舔后足所需时间，重复3次，每次间隔5min，计算平均数，选取基础痛阈值在5s～30s之间，不呈跳跃反应的18只小鼠，随机均分为3组，每组6只。分别为阴性对照组(蒸馏水)，阳性对照组(2.5mg/ml吲哚美辛)，实验组(0.2g/ml中兽药组合物)。灌胃给药，每日一次，每次0.2ml，连续给药3天。分别在末次给药15min、30min、60min、90min后使用智能热板仪在55.0
±
0.5℃热板上测定每只小鼠的痛阈值，如痛阈值至60s则停止实验取出小鼠，以免烫伤小鼠足掌，该小鼠的痛阈值以60s计算。镇痛作用强度用痛阈值提高率表示。痛阈值提高率(％)＝(给药后痛阈值-基础痛阈值)/基础痛阈值
×
100％。实验数据用表示，实验结果采用spss 26.0统计软件进行处理。各组间比较采用单因素方差分析，其中方差齐者用lsd法，方差不齐者用dunnett's t3法检验，p＜0.05表示存在显著性差异。具体结果见表2。
[0066]
表2不同药物制备物对对小鼠热刺激痛阈的影响(n＝6)
[0067]
[0068][0069]
注：*代表各给药组与阴性对照组相比，p《0.05。
○
代表实验组与阳性对照组相比，p《0.05，
△
代表实验组与阳性对照组相比，p》0.05。
[0070]
由表2可知，阳性对照组、实验组给药后15min、30min、60min、90min的痛阈值提高率均明显大于阴性对照组，差异具有显著性(p《0.05)。给药后15min、30min实验组的痛阈值提高率小于阳性对照组，差异具有显著性(p《0.05)。给药后60min实验组的痛阈值提高率大于阳性对照组，差异具有显著性(p《0.05)。给药后90min实验组的痛阈值提高率与阳性对照组差异不显著(p》0.05)。
[0071]
该结果表明，阳性对照组、实验组在给药后不同时间段均可以显著提高小鼠热刺激的痛阈值，阳性对照药物相比实验组中兽药组合物在给药后15min、30min的效果相对更显著，但实验组中兽药组合物相比阳性对照药物在给药后60min的效果更显著，且实验组中兽药组合物和阳性对照药物在给药后90min效果相当，说明本发明的中兽药组合物具有明显的镇痛效果，且长效镇痛效果更好。
[0072]
2.2不同药物制备物对小鼠醋酸扭体反应的影响
[0073]
1)试验材料
[0074]
本发明所述实施例3中制备的中兽药组合物混悬剂，浓度为0.2g/ml。
[0075]
2)试验方法
[0076]
取4周龄大，体重为25
±
2g的健康spf级昆明系小鼠18只，随机均分为3组，每组6只，雌雄各半。分别为阴性对照组(蒸馏水)，阳性对照组(2.5mg/ml吲哚美辛)，实验组(0.2g/ml中兽药组合物)。适应性饲养3天后灌胃给药，每日一次，每次0.2ml，连续给药3天。末次给药30min后，各小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸0.1ml/10g，记录各小鼠首次出现扭体的时间(潜伏期)及20min内小鼠扭体次数。镇痛作用强度用延长率和镇痛率表示。延长率(％)＝[(给药组潜伏期-阴性对照组潜伏期)/阴性对照组潜伏期
×
100％。镇痛率(％)＝(阴性对照组平均扭体次数-给药组平均扭体次数)/阴性对照组平均扭体次数
×
100％。实验数据用表示，实验结果采用spss 26.0统计软件进行处理。各组间比较采用单因素方差分析，其中方差齐者用lsd法，方差不齐者用dunnett's t3法检验，p＜0.05表示存在显著性差异。具体结果见表3。
[0077]
表3不同药物制备物对小鼠醋酸扭体反应的影响(n＝6)
[0078][0079]
注：*代表各给药组与阴性对照组相比，p《0.05。
○
代表实验组与阳性对照组相比，p《0.05，
△
代表实验组与阳性对照组相比，p》0.05。
[0080]
由表3可知，与阴性对照组比较，各给药组的扭体次数、潜伏期均具有显著性差异(p＜0.05)，说明本实验造模成功。实验组的潜伏期与阳性对照组差异不显著(p》0.05)。实验组的扭体次数与阳性对照组差异具有显著性(p《0.05)。
[0081]
该结果表明，阳性对照组、实验组均可以显著延长小鼠醋酸扭体的潜伏期，显著减少小鼠醋酸扭体反应的次数，虽然阳性对照药物相比实验组中兽药组合物在减少小鼠扭体次数的效果相对更显著，但实验组中兽药组合物和阳性对照药物在延长小鼠潜伏期的效果相当，说明本发明的中兽药组合物具有明显的镇痛效果。
[0082]
3、利尿作用
[0083]
1)试验材料
[0084]
本发明所述实施例3中制备的中兽药组合物混悬剂，浓度为0.2g/ml。
[0085]
2)试验方法
[0086]
取4周龄大，体重为25
±
2g的健康spf级昆明系小鼠若干只，置于小鼠代谢笼中适应性饲养3天，待其自由饮水饮食、尿量稳定后进行筛选。筛选前12h禁食不禁水，操作前轻压小鼠下腹，排尽余尿，按0.2ml/10g灌胃给予蒸馏水，收集2h尿液，选取尿量超过给予量40％的18只小鼠纳入正式实验，随机均分为3组，每组6只，雌雄各半。分别为阴性对照组(蒸馏水)，阳性对照组(2.5mg/ml氢氯噻嗪)，实验组(0.2g/ml中兽药组合物)。灌胃给药，每日一次，每次0.2ml，连续给药3天。末次给药前12h禁食不禁水，实验前轻压动物下腹，排尽余尿，各小鼠腹腔注射生理盐水0.2ml/10g，立即灌胃给药。末次给药后1h、2h、3h、4h、5h、6h、24h分别测定各小鼠的尿量并记录，计算出每kg体重的尿量。实验数据用表示，实验结果采用spss 26.0统计软件进行处理。各组间比较采用单因素方差分析，其中方差齐者用lsd法，方差不齐者用dunnett's t3法检验，p＜0.05表示存在显著性差异。具体结果见表4。
[0087]
表4不同药物制备物对小鼠的利尿作用(n＝6)
[0088][0089]
注：*代表各给药组与阴性对照组相比，p《0.05。
○
代表实验组与阳性对照组相比，p《0.05，
△
代表实验组与阳性对照组相比，p》0.05。
[0090]
由表4可知，阳性对照组、实验组给药后不同时间段的尿量均明显大于阴性对照组，说明本实验造模成功。除在给药后2h，实验组和阳性对照组的尿量差异具有显著性(p《0.05)，其余时间段实验组和阳性对照组差异均不显著(p》0.05)。
[0091]
该结果表明，阳性对照组、实验组均可以小鼠给药后不同时间段的尿量，且实验组中兽药组合物与阳性对照药物效果相当，说明本发明的中兽药组合物具有明显的利尿效果。
[0092]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。