异喹啉类生物碱在预防和治疗冠状病毒中的应用

本发明属于医药，涉及异喹啉类生物碱在医药方面的新用途，具体为异喹啉类生物碱在预防或治疗sars-cov-2病毒感染性疾病中的应用。

背景技术：

1、随着各种突变株的出现，尤其是omicron各亚型突变株(包括ba.4、ba.5、bf.7、xbb等)具有更快的传播速度以及更强的免疫逃逸能力，疫苗接种所诱导的中和抗体的保护活性似乎也在随着时间降低，新的有效药物仍然是治疗covid-19的重点。

2、covid-19包括病毒s蛋白中和抗体、瑞德西韦、洛匹那韦/利托那韦(克力芝)、i型干扰素等多种药物在体外或体内实验中表现出了抗病毒活性，但是药物的临床疗效和安全性仍存在争议。目前美国fda还批准了瑞德西韦和几款中和抗体如bamlanivimab、etesevimab、casirivimab、imdevimab用于covid-19住院患者的治疗，但是这些药物需要静脉滴注且价格昂贵，有效性和安全性也尚需进一步临床验证，限制了其进一步应用。2021年底，merck和ridgeback biotherapeutics联合开发的口服抗新冠药物莫努匹韦(molnupiravir)以及辉瑞公司研发的奈玛特韦片/利托那韦片(paxlovid)有条件获批上市，这两种药物分别针对病毒的rdrp(rna依赖rna聚合酶)和3clpro，但存在耐药性的威胁，且莫努匹韦可能引起dna突变，安全性尚待进一步研究。奈玛特韦片/利托那韦片的联合用药和药物相互作用尚需进一步研究，而且这两种药物在疫苗接种人群中的临床效果还未可知。近期，阿兹夫定作为我国首款自主研发、具有完全自主知识产权的口服小分子新冠治疗药物附条件获批，其作用靶点与莫努匹韦相似，针对病毒的rdrp，同样的，其作为核苷类似物的安全性仍然需要进一步研究。

3、疫苗接种是预防和控制covid-19的长期策略中最有效的方法。不同的sars-cov-2疫苗已被开发，截至2022年3月28日，已有153种疫苗获批进行临床试验，196种疫苗处于临床前试验阶段，10种疫苗(含3种印度疫苗)获世卫组织批准紧急使用，目前国内已有4款自主研发的新冠疫苗获批上市(https://vac-lshtm.shinyapps.io/ncov_vaccine_landscape/)。这些疫苗主要包括灭活疫苗(占总数的14％)、减毒活疫苗(1％)、病毒载体疫苗(复制和非复制；占总数的17％)、rna疫苗(18％)、dna疫苗(11％)、蛋白质亚单位疫苗(34％)和vlp疫苗(4％)。然而随着世界多地报道sars-cov-2的突变体，目前研究显示疫苗所产生的抗体对sars-cov-2突变株的中和能力表现出不同程度的下降甚至完全丧失。由于新冠病毒不断升级，新冠疫苗和“特效药”不断“失效”，因此迫切需要开发针对不同靶点的抗病毒新药物，或者使用联合疗法从多方面抑制病毒感染，一方面针对新冠病毒本身开发阻断病毒感染或抑制病毒复制的药物，同时考虑联合用药；另一方面针对新冠病毒与宿主的相互作用，阻断新冠引起的一系列临床症状和并发症，降低病死率。因此，研发安全有效且具有广谱性的抗病毒药物意义重大。

4、生物碱是存在于自然界的一类含氮的碱性有机化合物，大多有较复杂的环状结构，氮原子结合在环内。其中异喹啉生物碱的种类最多，异喹啉生物碱来源于苯丙氨酸和酪氨酸系，在植物中分布广泛，数目较多，具有多方面的生物活性。异喹啉生物碱根据连接基团的不同可分为：简单异喹啉类、苄基异喹啉类、阿朴菲类、双苄基异喹啉类、小檗碱类、普罗托品类、吗啡类和苯菲啶类。当苯基连接在异喹啉的骨架上时该衍生物便称为苄基异喹啉生物碱，单苄基异喹啉类为异喹啉母核1位连有苄基，罂粟属中具解痉作用的罂粟碱即属此类。双苄基异喹啉则为两个苄基异喹啉通过1～3个醚键相连接的一类生物碱，如存在于防己科北豆根中的主要酚性生物碱蝙蝠葛碱，汉防己中的汉防己甲素和汉防己乙素。

5、异喹啉生物碱广泛分布于罂粟科、巴比特科、毛茛科和防己科中。异喹啉及异喹啉衍生物是一类重要的医药化工中间体，广泛应用于一系列重要药物的合成过程，异喹啉骨架常用于设计药物分子中的活性结构基团，如阿曲库铵、诺米芬辛、莫沙维林、地莫昔林(甲基罂粟碱)、异喹卡因等。同时，异喹啉生物碱类药物具有多方面的生物活性，包括抗肿瘤、抗菌、镇痛、调节免疫功能、抗血小板凝聚、抗心律失常、降压等。大部分的异喹啉类生物碱药物都存在着异喹啉或异喹啉衍生物等基本结构，此类药物基本可以从简单的异喹啉衍生物进一步合成而衍生出来。

6、但异喹啉类生物碱是否可用于治疗新型冠状病毒感染，还有待进一步研究。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供sars-cov-2的有效抑制剂，其可以预防，缓解和/或治疗新型冠状病毒所致感染。

2、本发明首先提供了异喹啉类生物碱及其药学上可接受的盐作为新型冠状病毒抑制剂，在制备预防、缓解和/或治疗冠状病毒所致感染的产品中的应用；

3、所述异喹啉类生物碱选自轮环藤宁、蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱、峨眉唐松草碱、唐松明灵碱、6-丙酮基二氢白屈菜红碱(22864-92-2)中的至少一种。

4、根据本发明的实施方案，所述药学上可接受的盐选自异喹啉类生物碱结构中具有足够碱性的氮原子的酸加成盐，所述酸加成盐包括异喹啉类生物碱与无机酸如盐酸、氢氟酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸或硝酸；有机酸如甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、己二酸、藻酸、马来酸、富马酸、d-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸所形成的盐。

5、根据本发明的实施方案，所述产品为药品、食品、护肤品、化妆品、日用品和保健品，优选为药品。

6、根据本发明的实施方案，其中冠状病毒为2019新型冠状病毒(sars-cov-2)。

7、根据本发明的实施方案，冠状病毒感染为新型冠状病毒感染。

8、根据本发明的实施方案，如上所述异喹啉类生物碱及其药学上可接受的盐可以配置成各种适合的药物制剂形式。可以单独使用，或者将其与药物辅料(例如赋形剂、稀释剂等)混合，配置成口服给药的片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂等或注射给药的粉针剂、溶液剂，以及研制为功能食品，功能饮品、药酒，滴鼻液及漱口水等。

9、本发明还提供一种可预防，缓解和/或治疗冠状病毒所致感染的药物组合物，其包括轮环藤宁、蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱、峨眉唐松草碱、唐松明灵碱、6-丙酮基二氢白屈菜红碱(22864-92-2)中的至少一种。

10、本发明还提供一种预防，缓解和/或治疗冠状病毒所致感染的方法，包括将异喹啉类生物碱及其药学上可接受的盐中的至少一种施用于有此需要的个体。

11、所述异喹啉类生物碱选自轮环藤宁、蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱、峨眉唐松草碱、唐松明灵碱或6-丙酮基二氢白屈菜红碱(22864-92-2)中的至少一种。

12、本发明人经过大量研究发现异喹啉类生物碱的新用途，通过利用新冠病毒药物筛选替代模型gx_p2v、sars-cov-2病毒样颗粒(trvlp)模型及vsv假病毒模型对异喹啉类生物碱进行抗sars-cov-2病毒活性评价。结果表明本发明的异喹啉类生物碱能有效抑制穿山甲冠状病毒毒株gx_p2v、sars-cov-2病毒样颗粒(trvlp)及vsv假病毒的感染和复制，并且在gx_p2v、sars-cov-2病毒样颗粒(trvlp)入胞前和入胞后、全时段均能发挥抑制作用。

13、其中，在新冠病毒药物筛选替代模型gx_p2v上，轮环藤宁在细胞水平的ec50＝1.37μm，cc50>50μm，si>36.50；蝙蝠葛碱在细胞水平的ec50＝17.04μm，cc50>50μm，si>2.93；蝙蝠葛苏林碱在细胞水平的ec50＝14.08μm，cc50>50μm，si>3.55；峨眉唐松草碱在细胞水平的ec50＝3.31μm，cc50＝49.85μm，si＝15.06；唐松明灵碱在细胞水平的ec50＝1.29μm，cc50>50μm，si>38.76；6-丙酮基二氢白屈菜红碱在细胞水平的ec50＝2.47μm，cc50>50μm，si>24.24。在sars-cov-2病毒样颗粒(trvlp)模型上，轮环藤宁在细胞水平的ec50＝1.64μm，cc50>50μm，si>30.49；蝙蝠葛碱在细胞水平的ec50＝2.84μm，cc50>50μm，si>17.61；蝙蝠葛苏林碱在细胞水平的ec50＝～1.52μm，cc50>50μm，si>～32.89；峨眉唐松草碱在细胞水平的ec50＝～25.29μm，cc50>50μm，si>～1.98；唐松明灵碱在细胞水平的ec50＝6.20μm，cc50>50μm，si>8.06；6-丙酮基二氢白屈菜红碱在细胞水平的ec50＝2.25μm，cc50>50μm，si>22.22。在vsv假病毒模型上，轮环藤宁在细胞水平的ec50＝6.54μm；蝙蝠葛碱在细胞水平的ec50＝5.91μm；蝙蝠葛苏林碱在细胞水平的ec50＝8.48μm；峨眉唐松草碱在细胞水平的ec50＝2.83μm；唐松明灵碱在细胞水平的ec50＝2.73μm；6-丙酮基二氢白屈菜红碱在细胞水平的ec50＝11.76μm。因此，发明人认为轮环藤宁、蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱、峨眉唐松草碱、唐松明灵碱、6-丙酮基二氢白屈菜红碱可应用于针对covid-19感染的预防，缓解和/或治疗。

14、与现有技术相比，本发明的技术效果如下：

15、本技术发明人发现异喹啉类生物碱轮环藤宁、蝙蝠葛碱、蝙蝠葛苏林碱、峨眉唐松草碱、唐松明灵碱、6-丙酮基二氢白屈菜红碱在细胞水平能够阻断冠状病毒进入细胞，也具有有效抑制冠状病毒的复制从而达到预防，缓解和/或治疗covid-19的效果。