用于治疗眼底和眼内疾病的凝胶药物

1.本发明涉及一种药物，特别涉及用于治疗眼底和眼内疾病的药物，尤其涉及用于治疗脉络膜新生血管性疾病的凝胶药物。


背景技术：

2.眼底脉络膜是一个高度血管化的组织，其作用主要为视网膜光感受器和视网膜色素上皮细胞提供充足的养分，并且可以起到清除视网膜的代谢废物的作用。脉络膜疾病主要表现为视网膜色素上皮细胞的进行性功能障碍，及引起脉络膜血管疾病的脉络膜血管结构和功能异常，如息肉状脉络膜血管病变(pcv)，中心性浆液性脉络膜视网膜病变以及年龄相关性黄斑变性相关的脉络膜新生血管(cnv)等疾病。大量研究表明，脉络膜血管疾病影响范围广泛，且发病率呈指数级增长。脉络膜血管疾病的病理过程主要包括血管通透性增加和新生血管形成，导致视觉功能严重受损，甚至不可逆失明。cnv是指新血管从脉络膜向黄斑下的神经视网膜生长，引起黄斑水肿、渗出、出血、光感受器损伤，最终形成终末期纤维化瘢痕目前，cnv的治疗方法包括激光光凝、玻璃体切除和玻璃体内注射抗血管内皮生长因子(vegf)。然而，激光光凝和玻璃体切除手术的效果非常有限，这些手术会损伤视网膜和血管。虽然目前抗vegf治疗有效，许多问题仍然持续存在，例如，经常玻璃体内注射抗vegf药物可能导致白内障、青光眼、眼内炎、葡萄膜炎和视网膜脱离。重要的是，频繁玻璃体内注射的负担会显著降低患者的依从性。此外，抗vegf对纤维性瘢痕没有效果，甚至可能损害脉络膜和视网膜的长期生存能力。因此，深入研究cnv的发病机制，寻找新的有效的治疗方法和解决方案，提高cnv的抗血管生成治疗水平是迫切需要的。
3.虽然的病因尚不清楚，但炎症在cnv的发生发展中起着至关重要的作用。具体来说，先前的研究表明，促炎细胞因子如白细胞介素-6(il-6)和白细胞介素-8(il-8)通常促进cnv的发生和/或进展。此外，氧化应激诱导的损伤被认为是视网膜色素上皮(rpe)变性的关键因素，rpe变性是cnv进展过程中的另一个重要因素。研究表明，过度的炎症相关活性氧(ros)和氧化脂蛋白导致蛋白质错误折叠、聚集和先天性免疫反应的慢性激活，与cnv的病理性血管生成呈正相关。此外，ros显著促进了视网膜中血管内皮生长因子(vegf)的表达。因此，抗炎治疗和有效清除ros可能是cnv治疗的关键策略。
4.雷珠单抗(商品名lucentis)是一种单克隆抗体片段(fab)，其与贝伐单抗(bevacizumab)是从相同亲本鼠抗体获得。雷珠单抗是一种典型的抗vegf药物，靶向抑制血管内皮生长因子a，通过抑制血管内皮细胞增值和新生血管形成，延缓新生血管性疾病进展。目前利用雷珠单抗治疗cnv的方式是直接向玻璃体注射雷珠单抗，雷珠单抗的用药剂量大，作用时间短,且需要每月给药一次，给药频繁。


技术实现要素：

5.有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明提供了一种用于治疗眼底和眼内疾病的药物凝胶混合物，要解决的技术问题是减少抗vegf药物的用药剂量，增加抗vegf药物的作用时
间，减少抗vegf药物给药频率。
6.为解决上述问题，本发明采取的技术方案是：一种用于治疗眼底和眼内疾病的凝胶药物，所述凝胶药物包含可注射水凝胶以及用于治疗脉络膜新生血管性疾病的药物。
7.优选地，所述的用于治疗脉络膜新生血管性疾病的药物是抗vegf药物.
8.优选地，所述的用于治疗脉络膜新生血管性疾病的药物是雷珠单抗。
9.优选地，在所述的凝胶药物中，雷珠单抗的质量含量在1％以上。
10.优选地，所述可注射水凝胶的制备方法包括：将磷酸倍他米松二钠和氯化钙混合成溶液，使得混合溶液转变成凝胶。
11.优选地，磷酸倍他米松二钠和氯化钙的摩尔浓度的比率为0.9-1.1:1.1-0.9。
12.优选地，所述的磷酸倍他米松二钠和氯化钙的摩尔浓度分别在0.01m以上。
13.优选地，所述的磷酸倍他米松二钠和氯化钙的摩尔浓度分别在0.025m以下。
14.优选地，所述的凝胶药物被配置为能用30g注射器注射，当应力撤销后，液态恢复为凝胶态。
15.本发明的有益效果为：本发明用提供了一种生物相容性好、制备简单、效力长久的治疗脉络膜新生血管疾病的药物，该药物不仅可以长期持续释放抗vegf药物抑制脉络膜新生血管(cnv)生成，还可以清除活性氧(ros)，减少局部炎症。显著延长传统抗vegf药物治疗的有效时间。该水凝胶所有成分均可采用临床批准药物可能很容易转化为脉络膜新生血管性治疗的临床应用，可取代目前的抗vegf药物的治疗。
16.以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。
附图说明
17.图1显示实施例1中，磷酸倍他米松二钠与氯化钙的摩尔浓度达到0.0125m时，形成的水凝胶(0.0125m-betp-gel)的外观照片。
18.图2显示实施例1中不同摩尔浓度(0.005m，0.01m，0.0125m，0.025，0.05m)磷酸倍他米松二钠与氯化钙形成的水凝胶的外观照片。
19.图3显示实施例1中0.0125m-betp-gel的透射电子显微镜(tem图像)。
20.图4显示实施例1中0.0125m-betp-gel的流变行为。
21.图5显示实施例1中0.0125m-betp-gel的元素映射图像。
22.图6显示实施例1中0.0125m-betp-gel与ca
2+
螯合剂乙二胺四乙酸(edta)孵育的结果照片。
23.图7显示实施例2中负载igg的磷酸倍他米松水凝胶(igg@betp-gel)的荧光图像。其中，左图为明亮的田野图像，中图为荧光图像，右图为合并后的图像。
24.图8显示实施例2中igg@betp-gel的流变行为。其中，g’：储能模量；g”：损耗模量。
25.图9显示实施例2中igg@betp-gel在pbs中37℃孵育72h后igg的累积释放谱。
26.图10显示实施例2中gg@betp-gel在pbs溶液(左)和去离子水(右)中的降解的照片。
27.图11显示实施例2中玻璃体内注射游离igg-cy5.5或igg-cy5.5@betp-gel后，不同时间点体内igg-cy5.5的滞留情况。
28.图12显示实施例4中用qpcr分析方法对脉络膜组织中zo-1、rpe65和recoverin mrna表达水平检测的结果，其中，左侧柱状数据为未处理小鼠(untreated)结果，中间柱状数据为对照cnv小鼠结果，右侧柱数据为注射了凝胶药物的cnv小鼠结果。
29.图13显示实施例4中用western blot分析方法对脉络膜组织中zo-1、rpe65和recoverin mrna表达水平检测的结果，其中，左列为未处理小鼠(untreated)结果，中列为对照cnv小鼠结果，右列为注射了凝胶药物的cnv小鼠结果。
30.图14显示实施例5中利用四种试剂对cnv小鼠进行治疗的荧光素血管造影图像，其中，代表性的红外(ir)眼底图像和fa图像显示注射前后脉络膜新生血管渗漏情况。其中，四种试剂分别为：生理盐水(saline)、实施例1制备的0.0125m-betp-gel、抗vegf的雷珠单抗(anti-vegf，10mg/ml)、实施例3制备的凝胶药物(anti-vegf@betp-gel)。
31.图15显示实施例5中四种试剂对cnv小鼠进行治疗后的rpe/脉络膜铺片的ib4(新生血管的生物标记物)染色图像，其中，不同处理的眼睛中ib4染色显示cnv区域。
32.图16显示图15所示的图像的cnv区域的定量结果。
具体实施方式
33.实施例1水凝胶的制备与表征
34.经过申请人摸索，当磷酸倍他米松二钠的摩尔浓度与氯化钙的摩尔浓度的比值为0.9-1.1:1.1-0.9时，可在几秒钟内形成水凝胶(betp-gel)。尤其是当磷酸倍他米松二钠的摩尔浓度与氯化钙的摩尔浓度的比值为1:1时，形成水凝胶的速度最快。最低的凝胶化浓度约为，磷酸倍他米松二钠与氯化钙各为0.01m；当磷酸倍他米松二钠与氯化钙的摩尔浓度达到0.0125m时，形成的凝胶便于玻璃体腔注射，对组织没有毒性作用，可达到达到凝胶缓释的目的。图1示出了，磷酸倍他米松二钠与氯化钙的摩尔浓度达到0.0125m时，形成的凝胶(0.0125m-betp-gel)的外观照片。图2示出了不同摩尔浓度(0.005m，0.01m，0.0125m，0.025，0.05m)磷酸倍他米松二钠与氯化钙形成的凝胶的外观照片。图3示出了0.0125m-betp-gel的透射电子显微镜(tem图像)，从图中可以看出，形成的水凝胶为纳米纤维结构。图4示出了0.0125m-betp-gel的流变行为，该流变学实验进一步证实了水凝胶的形成，该凝胶能用30g注射器注射，当应力撤销后，液态恢复为凝胶态。经过试验，申请人发现，当磷酸倍他米松二钠与氯化钙的摩尔浓度为0.01m-0.025m时，形成的水凝胶可以轻松地用30g注射器注射，当应力撤销后，液态恢复为凝胶态。图5示出了0.0125m-betp-gel的元素映射图像，从元素映射来看，磷酸倍他米松和钙离子均匀分布在网络结构中。
35.本技术发明人进一步通过水凝胶的ftir光谱和xrd谱图证明，该纳米纤维水凝胶的形成机理是磷酸基和ca
2+
之间形成配位键。如果将0.0125m-betp-gel与ca
2+
螯合剂乙二胺四乙酸(edta)孵育(图6)，发现betp-gel会迅速从水凝胶形态转变为溶液，进一步验证了磷酸基与ca
2+
之间的协同作用是水凝胶网络形成的原因。
36.实施例2水凝胶输送抗体的能力
37.将磷酸倍他米松二钠、igg抗体、氯化钙在溶液中进行混合，形成负载igg的磷酸倍他米松水凝胶(igg@betp-gel)。其中，磷酸倍他米松二钠与氯化钙的摩尔浓度为0.0125m，igg抗体的质量含量为1％，即10mg/g。
38.用山羊抗兔igg h&l(alexa 488)抗体染色的igg@betp-gel冷冻切片共聚
vegf@betp-gel后，虽然第2周cnv的治疗效果不如抗vegf，但4周后cnv病变的厚度和长度逐渐减少。值得注意的是，从第2周开始，anti-vegf@betp-gel的治疗效果明显优于抗vegf(结果如图16所示)。
49.以上研究结果共同证明了anti-vegf@betp-gel治疗可以显著减少血管渗漏，减弱cnv，从而有效延长激光诱导的小鼠cnv模型抗vegf治疗时间。anti-vegf@betp-gel在相当长的一段时间内取得了良好的治疗效果，具有重要的临床转化价值，因为它可以显著减少抗vegf的给药次数和剂量，从而大大降低目前抗vegf治疗cnv的副作用风险。
50.以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。