对寨卡病毒具有交叉反应性的抗登革热病毒抗体及使用方法与流程

本发明涉及抗寨卡病毒抗体及其使用方法。

背景技术：

1、登革热是世界上最常见的节肢动物传播的病毒性疾病。引起登革热的病毒(或在本文中称为denv)可分为四种不同的感染性血清型，诸如denv-1、denv-2、denv-3和denv-4。登革热感染的症状包括发烧、肌肉疼痛、头痛、低血小板数和低白细胞数、凝血紊乱、出血和血管渗漏，其可导致登革热休克综合征。当一个人在之前的登革热感染后暴露于登革热病毒时，抗病毒抗体可以增强病毒进入宿主细胞的摄取，并且患者发生严重形式的登革热的风险更高。然而，严重形式的登革热也可在第一次感染期间发生。

2、虽然是迄今为止最常见的节肢动物传播的病毒性疾病，但却没有可用于治疗登革热的药物。关于登革热作为疾病的方法主要是针对感染的预防和/或治疗以缓解症状。

3、疫苗和抗体治疗剂目前正在开发中以预防和治疗病毒感染。然而，基于抗体的治疗并非没有风险。一种这样的风险是抗体依赖性增强(ade)，其发生在非中和抗病毒抗体促进病毒进入宿主细胞时，导致细胞中的感染性增加(expert rev anti infect ther(2013)11,1147-1157)。针对ade的最常见的机制是病毒-抗体复合物通过抗体的fc部分与细胞表面上的fc受体(fcr)的相互作用。ade可以增强正常轻微的病毒感染，成为危及生命的疾病。据报道，在fc区中具有突变以防止与fcγr结合的抗denv抗体未能增强denv感染(wo2010/043977)。然而，仍然需要不增加感染的抗体依赖性增强的风险的抗体治疗。

4、denv-特异性抗体对寨卡病毒的交叉反应性已有报道于文献[jci insight.2017；2(8).doi:10.1172/jci.insight.92428.]。也已证明denv-特异性abs可增强寨卡感染[nature.2016；536(7614):48-53.doi:10.1038/nature18938,nat immunol.2016；17(9):1102-8.]。

技术实现思路

1、本发明提供抗denv抗体、含有变体fc区的多肽及其使用方法。

2、在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体结合至denv e蛋白。在一些实施方案中，本发明的抗denv抗体包含：

3、(a)(i)hvr-h3，其包含氨基酸序列ggx1alfydsyttpx2dx3gswwfdp，其中x1为r或e，x2为r或f，x3为g,d或l(seq id no:42)，(ii)hvr-l3，其包含氨基酸序列qqfx1x2lpit，其中x1为d，s或e，x2为d或a(seq id no:45)，及(iii)hvr-h2，其包含氨基酸序列vinprggsx1x2saqkfqg，其中x1为t或r，x2为a或r(seq id no:41)；

4、(b)(i)hvr-h1，其包含氨基酸序列sx1yx2h，其中x1为n或y，x2为i或m(seq id no:40)，(ii)hvr-h2，其包含氨基酸序列vinprggsx1x2saqkfqg，其中x1为t或r，x2为a或r(seqid no:41)，及(iii)hvr-h3，其包含氨基酸序列ggx1alfydsyttpx2dx3gswwfdp，其中x1为r或e，x2为r或f，x3为g,d或l(seq id no:42)；

5、(c)(i)hvr-h1，其包含氨基酸序列sx1yx2h，其中x1为n或y，x2为i或m(seq id no:40)，(ii)hvr-h2，其包含氨基酸序列vinprggsx1x2saqkfqg，其中x1为t或r，x2为a或r(seqid no:41)，(iii)hvr-h3，其包含氨基酸序列ggx1alfydsyttpx2dx3gswwfdp，其中x1为r或e，x2为r或f，x3为g,d或l(seq id no:42)，(iv)hvr-l1，其包含氨基酸序列qasqx1irx2yln，其中x1为d或e，x2为k或q(seq id no:43)；(v)hvr-l2，其包含氨基酸序列dasx1lkx2，其中x1为n或e，x2为t或f(seq id no:44)；及(vi)hvr-l3，其包含氨基酸序列qqfx1x2lpit，其中x1为d,s或e，x2为d或a(seq id no:45)；或

6、(d)(i)hvr-l1，其包含氨基酸序列qasqx1irx2yln，其中x1为d或e，x2为k或q(seqid no:43)；(ii)hvr-l2，其包含氨基酸序列dasx1lkx2，其中x1为n或e，x2为t或f(seq idno:44)；及(iii)hvr-l3，其包含氨基酸序列qqfx1x2lpit，其中x1为d，s或e，x2为d或a(seqid no:45)。在一些实施方案中，本发明的抗体不是包含以下各项的抗体：(i)hvr-h1，其包含seq id no:11的氨基酸序列，(ii)hvr-h2，其包含seq id no:13的氨基酸序列，(iii)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列，(iv)hvr-l1，其包含seq id no:21的氨基酸序列，(v)hvr-l2，其包含seq id no:24的氨基酸序列，及(vi)hvr-l3，其包含seq id no:27的氨基酸序列。

7、在一些实施方案中，本发明的分离的抗-dnve抗体包含：

8、(a)(i)hvr-h3，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列，(ii)hvr-l3，其来自seqid no:8-10中任一个的vl序列，及(iii)hvr-h2，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列；

9、(b)(i)hvr-h1，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列，(ii)hvr-h2，其来自seqid no:2-6中任一个的vh序列，及(iii)hvr-h3，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列；

10、(c)(i)hvr-h1，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列，(ii)hvr-h2，其来自seqid no:2-6中任一个的vh序列，(iii)hvr-h3，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列，(iv)hvr-l1，其来自seq idno:8-10中任一个的vl序列；(v)hvr-l2，其来自seq id no:8-10中任一个的vl序列；及(vi)hvr-l3，其来自seq id no:8-10中任一个的vl序列；

11、(d)(i)hvr-l1，其来自seq id no:8-10中任一个的vl序列；(ii)hvr-l2，其来自seq id no:8-10中任一个的vl序列；及(iii)hvr-l3，其来自seq id no:8-10中任一个的vl序列；或

12、(e)(i)hvr-h1，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列，(ii)hvr-h2，其来自seqid no:2-6中任一个的vh序列，(iii)hvr-h3，其来自seq id no:2-6中任一个的vh序列，(iv)hvr-l1，其来自seq id no:7中任一个的vl序列；(v)hvr-l2，其来自seq id no:7中任一个的vl序列；及(vi)hvr-l3，其来自seq id no:7中任一个的vl序列。

13、在一些实施方案中，本发明的抗体不是包含以下各项的抗体：(i)hvr-h1，其来自seq id no:1的vh序列，(ii)hvr-h2，其来自seq idno:1的vh序列，(iii)hvr-h3，其来自seqid no:1的vh序列，(iv)hvr-l1，其来自seq id no:7的vl序列，(v)hvr-l2，其来自seq idno:7的vl序列，及(vi)hvr-l3，其来自seq id no:7的vl序列。

14、在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体进一步包含重链可变结构域框架：包含seq id no:31的氨基酸序列的fr1，包含seq id no:32的氨基酸序列的fr2，包含seq id no:33或34的氨基酸序列的fr3，包含seq id no:35的氨基酸序列的fr4。在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体进一步包含轻链可变结构域框架：包含seq id no:36的氨基酸序列的fr1，包含seq id no:37的氨基酸序列的fr2，包含seq id no:38的氨基酸序列的fr3，包含seq id no:39的氨基酸序列的fr4。

15、在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体包含(a)与seq idno:2-6中任一个的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列；(b)与seq id no:8-10中任一个的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；(c)seq id no:2-6中任一个的vh序列及seqid no:8-10中任一个的vl序列；或(d)seq id no:2-6中任一个的vh序列及seq idno:7中任一个的vl序列。

16、在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体为人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体为结合至denv或denv e蛋白的抗体片段。在一些实施方案中，本发明的分离的抗denv抗体为全长igg抗体。

17、在一些实施方案中，本发明的抗denv抗体的fc区包含根据eu编号的位置234处的ala及位置235处的ala。在一些实施方案中，本发明的抗denv抗体的fc区可选自本文所描述的变体fc区。

18、本发明还提供编码本发明的抗denv抗体的分离的核酸。本发明还提供包含本发明的核酸的宿主细胞。本发明还提供制备抗体的方法，包含培养本发明的宿主细胞以便制备抗体。

19、本发明还提供包含本发明的抗denv抗体及药学上可接受载体的药物制剂。

20、本发明的抗denv抗体可用作药物。在一些实施方案中，本发明的抗denv抗体可用于治疗denv感染。

21、本发明的抗denv抗体可用于制备药物。在一些实施方案中，该药物用于治疗denv感染。

22、本发明还提供治疗患有denv感染的个体的方法。在一些实施方案中，该方法包含向该个体施用有效量之本发明的抗denv抗体。在一些实施方案中，该方法进一步包含向该个体施用另外的治疗剂，例如下文所述。

23、在一些实施方案中，本发明的变体fc区包含亲本fc区中的至少一个氨基酸改变。在进一步的实施方案中，当与亲本fc区比较时，变体fc区具有实质性降低的fcγr-结合活性。在进一步的实施方案中，当与亲本fc区比较时，变体fc区不具有实质性降低的c1q-结合活性。

24、在一些实施方案中，根据eu编号，本发明的变体fc区包含位置234处的ala，位置235处的ala。进一步的实施方案中，根据eu编号，变体fc区包含下述(a)-(c)中任一个的氨基酸改变：(a)位置267、268及324，(b)位置236、267、268、324及332，以及(c)位置326及333；。

25、在一些实施方案中，根据eu编号，本发明的变体fc区包含选自由以下各项组成的组的氨基酸：(a)位置267处的glu，(b)位置268处的phe，(c)位置324处的thr，(d)位置236处的ala，(e)位置332处的glu，(f)位置326处的ala、asp、glu、met或trp，及(g)位置333处的ser。

26、在一些实施方案中，根据eu编号，本发明的变体fc区进一步包含选自由以下各项组成的组的氨基酸:(a)位置434处的ala，(b)位置434处的ala，位置436处的thr，位置438处的arg，及位置440处的glu，(c)位置428处的leu，位置434处的ala，位置436处的thr，位置438处的arg，及位置440处的glu，及(d)位置428处的leu，位置434处的ala，位置438处的arg，及位置440处的glu。

27、在一些实施方案中，本发明的变体fc区包含单独或组合地任何氨基酸改变，如表4所述。在一些实施方案中，本发明所述的亲本fc区衍生自人类igg1。本发明提供多肽，其包含seq id no:51-59任一个的氨基酸序列。

28、在一些实施方案中，包含本发明的变体fc区的多肽为抗体。进一步的实施方案中，抗体为抗病毒抗体。在进一步的实施方案中，抗体包含衍生自本文所述的抗denv抗体的可变区。

29、在进一步的实施方案中，抗体包含：

30、(a)(i)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列，(ii)hvr-l3，其包含seq idno:27的氨基酸序列，及(iii)hvr-h2，其包含seq id no:13的氨基酸序列；

31、(b)(i)hvr-h1，其包含seq id no:11的氨基酸序列，(ii)hvr-h2，其包含seq idno:13的氨基酸序列，及(iii)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列；

32、(c)(i)hvr-h1，其包含seq id no:11的氨基酸序列，(ii)hvr-h2，其包含seq idno:13的氨基酸序列，(iii)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列，(iv)hvr-l1，其包含seq id no:21的氨基酸序列；(v)hvr-l2，其包含seq id no:24的氨基酸序列；及(vi)hvr-l3，其包含seq id no:27的氨基酸序列；或

33、(d)(i)hvr-l1，其包含seq id no:21的氨基酸序列；(ii)hvr-l2，其包含seq idno:24的氨基酸序列；及(iii)hvr-l3，其包含seq id no:27的氨基酸序列。

34、在进一步的实施方案中，抗体包含：

35、(a)(i)hvr-h3，其来自seq id no:6的vh序列，(ii)hvr-l3，其来自seq id no:10的vl序列，及(iii)hvr-h2，其来自seq id no:6的vh序列；

36、(b)(i)hvr-h1，其来自seq id no:6的vh序列，(ii)hvr-h2，其来自seq id no:6的vh序列，及(iii)hvr-h3，其来自seq id no:6的vh序列；

37、(c)(i)hvr-h1，其来自seq id no:6的vh序列，(ii)hvr-h2，其来自seq id no:6的vh序列，(iii)hvr-h3，其来自seq id no:6的vh序列，(iv)hvr-l1，其来自seq id no:10的vl序列；(v)hvr-l2，其来自seq id no:10的vl序列；及(vi)hvr-l3，其来自seq id no:10的vl序列；

38、(d)(i)hvr-l1，其来自seq id no:10的vl序列；(ii)hvr-l2，其来自seq id no:10的vl序列；及(iii)hvr-l3，其来自seq id no:10的vl序列；或

39、(e)(i)hvr-h1，其来自seq id no:6的vh序列，(ii)hvr-h2，其来自seq id no:6的vh序列，(iii)hvr-h3，其来自seq id no:6的vh序列，(iv)hvr-l1，其来自seq id no:7的vl序列；(v)hvr-l2，其来自seq id no:7的vl序列；及(vi)hvr-l3，其来自seq id no:7的vl序列。

40、本发明还提供编码包含本发明的变体fc区的多肽的分离的核酸。本发明还提供包含本发明的核酸的宿主细胞。本发明还提供制备包含变体fc区的多肽的方法，该方法包含培养本发明的宿主以便制备该多肽。

41、本发明还提供包含多肽及药学上可接受载体的药物制剂，该多肽包含本发明的变体fc区。

42、本发明的包含变体fc区的多肽可用作药物。在一些实施方案中，本发明的包含变体fc区的多肽可用于治疗病毒感染。

43、本发明的包含变体fc区的多肽可用于制备药物。在一些实施方案中，该药物用于治疗病毒感染。

44、本发明还提供治疗患有病毒感染的个体的方法。在一些实施方案中，该方法包含向该个体施用有效量的包含本发明的变体fc区的多肽。

45、本发明还提供本文所描述的抗denv抗体，进一步包含含有本发明的变体fc区的多肽。

46、在一方面，本发明提供用于治疗或预防寨卡病毒感染的方法。

47、在一些实施方案中，本发明的用于治疗或预防寨卡病毒感染的方法包含施用结合寨卡病毒的抗体。

48、在一些实施方案中，本发明的结合寨卡病毒的抗体包含：

49、(a)(i)hvr-h3，其包含氨基酸序列ggx1alfydsyttpx2dx3gswwfdp，其中x1为r或e，x2为r或f，x3为g,d或l(seq id no:42)，(ii)hvr-l3，其包含氨基酸序列qqfx1x2lpit，其中x1为d,s或e，x2为d或a(seq id no:45)，及(iii)hvr-h2，其包含氨基酸序列vinprggsx1x2saqkfqg，其中x1为t或r，x2为a或r(seq id no:41)；

50、(b)(i)hvr-h1，其包含氨基酸序列sx1yx2h，其中x1为n或y，x2为i或m(seq id no:40)，(ii)hvr-h2，其包含氨基酸序列vinprggsx1x2saqkfqg，其中x1为t或r，x2为a或r(seqid no:41)，及(iii)hvr-h3，其包含氨基酸序列ggx1alfydsyttpx2dx3gswwfdp，其中x1为r或e，x2为r或f，x3为g,d或l(seq id no:42)；

51、(c)(i)hvr-h1，其包含氨基酸序列sx1yx2h，其中x1为n或y，x2为i或m(seq id no:40)，(ii)hvr-h2，其包含氨基酸序列vinprggsx1x2saqkfqg，其中x1为t或r，x2为a或r(seqid no:41)，(iii)hvr-h3，其包含氨基酸序列ggx1alfydsyttpx2dx3gswwfdp，其中x1为r或e，x2为r或f，x3为g,d或l(seq id no:42)，(iv)hvr-l1，其包含氨基酸序列qasqx1irx2yln，其中x1为d或e，x2为k或q(seq id no:43)；(v)hvr-l2，其包含氨基酸序列dasx1lkx2，其中x1为n或e，x2为t或f(seq id no:44)；及(vi)hvr-l3，其包含氨基酸序列qqfx1x2lpit，其中x1为d,s或e，x2为d或a(seq id no:45)；或

52、(d)(i)hvr-l1，其包含氨基酸序列qasqx1irx2yln，其中x1为d或e，x2为k或q(seqid no:43)；(ii)hvr-l2，其包含氨基酸序列dasx1lkx2，其中x1为n或e，x2为t或f(seq idno:44)；及(iii)hvr-l3，其包含氨基酸序列qqfx1x2lpit，其中x1为d,s或e，x2为d或a(seqid no:45)。在一些实施方案中，本发明的抗体不为包含以下各项的抗体:(i)hvr-h1，其包含seq id no:11的氨基酸序列，(ii)hvr-h2，其包含seq id no:13的氨基酸序列，(iii)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列，(iv)hvr-l1，其包含seq id no:21的氨基酸序列，(v)hvr-l2，其包含seq id no:24的氨基酸序列，及(vi)hvr-l3，其包含seq id no:27的氨基酸序列。

53、在一些实施方案中，本发明的结合寨卡病毒的抗体进一步包含重链可变结构域框架：包含seq id no:31的氨基酸序列的fr1，包含seq id no:32的氨基酸序列的fr2，包含seq id no:33或34的氨基酸序列的fr3，包含seq id no:35的氨基酸序列的fr4。在一些实施方案中，本发明的结合寨卡病毒的抗体进一步包含轻链可变结构域框架：包含seq idno:36的氨基酸序列的fr1，包含seq id no:37的氨基酸序列的fr2，包含seq id no:38的氨基酸序列的fr3，包含seq id no:39的氨基酸序列的fr4。

54、在一些实施方案中，本发明的结合寨卡病毒的抗体包含(a)与seq idno:2-6中任一个的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vh序列；(b)与seq id no:8-10中任一个的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的vl序列；(c)seq id no:2-6中任一个的vh序列及seq id no:8-10中任一个的vl序列；或(d)seq id no:2-6中任一个的vl序列。

55、本发明还提供治疗寨卡感染的方法。在一些实施方案中，该方法包含向个体施用有效量的本发明的抗寨卡抗体。

56、在一些实施方案中，根据eu编号，本发明的结合寨卡病毒的抗体的变体fc区包含位置234处的ala、位置235处的ala。进一步的实施方案中，变体fc区包含下述(a)至(c)中任一个的氨基酸改变：(a)位置267、268及324，(b)位置236、267、268、324及332，及(c)位置326及333。

57、在一些实施方案中，根据eu编号，本发明的结合寨卡病毒的抗体的变体fc区包含选自由以下各项组成的组的氨基酸：(a)位置267处的glu，(b)位置268处的phe，(c)位置324处的thr，(d)位置236处的ala，(e)位置332处的glu，(f)位置326处的ala、asp、glu、met或trp，及(g)位置333处的ser。

58、在一些实施方案中，根据eu编号，本发明的结合寨卡病毒的抗体的变体fc区进一步包含选自由以下各项组成的组的氨基酸：(a)位置434处的ala，(b)位置434处的ala、位置436处的thr、位置438处的arg及位置440处的glu，(c)位置428处的leu、位置434处的ala、位置436处的thr、位置438处的arg及位置440处的glu，及(d)位置428处的leu、位置434处的ala、位置438处的arg及位置440处的glu。

59、本发明提供多肽，其包含seq id no:51-59中任一个的氨基酸序列。

60、进一步的实施方案中，本发明的结合寨卡病毒的抗体包含：

61、(a)(i)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列，(ii)hvr-l3，其包含seq idno:27的氨基酸序列，及(iii)hvr-h2，其包含seq id no:13的氨基酸序列；

62、(b)(i)hvr-h1，其包含seq id no:11的氨基酸序列，(ii)hvr-h2，其包含seq idno:13的氨基酸序列，及(iii)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列；

63、(c)(i)hvr-h1，其包含seq id no:11的氨基酸序列，(ii)hvr-h2，其包含seq idno:13的氨基酸序列，(iii)hvr-h3，其包含seq id no:16的氨基酸序列，(iv)hvr-l1，其包含seq id no:21的氨基酸序列；(v)hvr-l2，其包含seq id no:24的氨基酸序列；及(vi)hvr-l3，其包含seq id no:27的氨基酸序列；或

64、(d)(i)hvr-l1，其包含seq id no:21的氨基酸序列；(ii)hvr-l2，其包含seq idno:24的氨基酸序列；及(iii)hvr-l3，其包含seq id no:27的氨基酸序列。

65、在进一步的实施方案中，本发明的结合寨卡病毒的抗体包含：选自由3ch1047(seqid no:6)和3ch1049(seq id no:95)组成的组的vh变体序列，并具有选自由sg182(seq idno:46)、sg1095(seq id no:54)和sg1106(seq id no:59)组成的组的人igg1 ch序列；和选自由3cl(seq id no:7)和3cl633(seq id no:98)组成的组的vl变体序列，并具有人cl序列sk1(seq id no:60)。