一种菌剂在制备增强溶瘤病毒疗效制剂上的应用的制作方法

本发明涉及溶瘤病毒肿瘤免疫治疗领域，尤其是利用抗生素调节肠道菌群之后收集的粪便得到的粪菌制剂来调控溶瘤病毒的治疗效果，具体涉及通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，利用该粪菌制剂制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂。

背景技术：

1、肿瘤是威胁人类健康和生命的主要疾病之一，2020年全球新确诊的癌症病例达到了1930万例，造成死亡接近1000万人，预计未来几年将出现晚期癌症患者的发病率和死亡率的明显提升。而且未来20年，癌症病例逐年增加的趋势将不可避免，预计到2040年全球癌症确诊病例预计将达到2840万例，比2020年增加47％。因此，肿瘤的预防和治疗已经成为全球性的最为棘手的难点和热点问题之一。肿瘤治疗包括化疗、放疗、手术治疗和免疫治疗等方法，随着医学的发展与进步，这些方法都取得了了不起的成就和进步。

2、一、肿瘤免疫治疗应用前景喜人

3、肿瘤免疫治疗是目前肿瘤治疗领域发展得最快的一个方向，目前主要的肿瘤免疫治疗包括免疫检查点抑制剂治疗、过继性细胞免疫治疗、新生抗原肿瘤疫苗治疗和溶瘤病毒治疗等方式。目前仅fda就已经批准了超过50多种用于人类癌症治疗的免疫检查点抑制剂，其适应症已经扩展到许多不同的肿瘤类型。过继性细胞免疫治疗方面，特别是car-t细胞疗法在血液系统恶性肿瘤和转移性黑色素瘤患者中显示出出色的治疗效果。另外，基于现代生物信息技术发展起来的新生抗原肿瘤疫苗治疗已经在严格的ⅰ、ⅱ期临床试验中证明了其对黑色素瘤、胶质瘤等病人的临床治疗价值。这些研究结果都向世人展示了肿瘤免疫治疗的巨大应用价值。但是，大量的研究表明，肿瘤免疫治疗应用于不同患者的实体肿瘤治疗会产生不同的治疗结果，有的患者病情会获得显著而持久的改善，但部分患者则完全没有效果。由此可见，肿瘤免疫治疗在实体瘤上存在个体响应差异性大(总体响应率不高)的问题。

4、二、肿瘤免疫检查点抑制剂治疗、过继性细胞免疫治疗、新生抗原肿瘤疫苗治疗在实体瘤上的个体响应差异性大(总体响应率不高)与患者的肠道菌群存在关联

5、影响实体肿瘤免疫治疗个体差异性和总体响应率的因素是多样的，越来越多的证据表明宿主因素，包括宿主的肠道菌群可能影响了肿瘤对免疫治疗的反应。lee sh et al分析了近百名接受不同肿瘤治疗方法的nsclc患者，将他们归类为应答者和非应答者，对这两类群体的粪便样本进行16s rrna测序后发现，与非应答患者相比，应答患者粪便中的两歧双歧杆菌显著富集。在另一组针对nsclc和rcc患者粪便的宏基因组测序也发现对靶向pd-1的免疫治疗效果较好的病人群体与较差的群体，其肠道菌群成具有显著差异。在临床前小鼠模型中，多项研究发现不同品系小鼠的肠道菌群成不同，其肿瘤免疫治疗的效果也存在显著差异。因此，肿瘤免疫治疗的个体响应差异性(总体响应率不高)与患者肠道菌群存在关联。但是，到目前为止，溶瘤病毒介导的肿瘤免疫治疗的个体差异性与患者肠道菌群的关联性尚未被揭示。

6、三、溶瘤病毒介导的肿瘤免疫治疗

7、作为肿瘤免疫治疗重要分支之一的溶瘤病毒治疗，近年来受到越来越多的关注。溶瘤病毒是利用某些病毒可以选择性地感染和破坏癌变组织而不损害正常组织的特性，开发出的具有抗肿瘤作用的病毒。目前溶瘤病毒抗肿瘤的机制包括两方面，首先是病毒感染进入靶细胞后，其基因组“篡夺”靶细胞的生物合成途径，制造子代病毒，达到一定程度后受感染的细胞溶解，引起肿瘤细胞死亡。此外，溶瘤病毒还可以通过破坏肿瘤血管、表达修饰基因编码蛋白、诱导系统性抗肿瘤免疫反应等机制对肿瘤细胞产生抑制作用。2015年，fda批准经基因修饰后的溶瘤单纯疱疹病毒t-vec上市，突显了溶瘤病毒在临床应用上的价值。目前已有多种类型的溶瘤病毒进入临床研究阶段，包括腺病毒，疱疹病毒，痘苗病毒和呼肠孤病毒等。目前，复制型溶瘤腺病毒在开发中的溶瘤病毒当中占据着前二的位置。

8、与其他免疫治疗在实体瘤上的表现相似，溶瘤病毒的治疗效果也存在很强的个体响应差异性。已有多项临床研究显示，患者个体的免疫细胞活化状态和细胞因子的分泌，以及相关蛋白的表达对于溶瘤病毒在不同患者个体间治疗效果的差异具有相关性，尚未有公开报道揭示在溶瘤病毒介导的肿瘤免疫治疗中患者肠道菌群与个体间治疗效果的差异存在相关性。也没有通过经消化道给予粪菌制剂调节肠道菌群的组成来增强溶瘤病毒免疫治疗效果的报道。

9、因此，本发明希望通过我们的研究实现突破，通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，通过动物模型看看这样的粪菌制剂经消化道给药是否会影响溶瘤病毒的免疫治疗效果。那么本发明的粪菌制剂是否能增强溶瘤病毒免疫治疗效果呢？

技术实现思路

1、本发明中，我们展示通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，通过动物模型发现这样的粪菌制剂经消化道给药能提升溶瘤病毒的免疫治疗效果。

2、本发明所公开的调节肠道菌群来增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂是粪菌制剂，这样的制剂是来自动物体内的，而且这样的粪便制剂通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成之后手机得到的粪便，抗生素是已经上市销售的抗生素或者其组合，因此安全性和实用性得到保障。

3、在结直肠癌肿瘤模型上，使用抗生素或者抗生素组合，通过消化道给药改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，通过动物模型发现这样的粪菌制剂经过消化道给予显著减小了结直肠癌荷瘤小鼠模型的肿瘤体积大小，显著延长了结直肠癌荷瘤小鼠的生存期。

4、因此，本发明的具体内容为：

5、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用。

6、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为氨苄青霉素。

7、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为链霉素。

8、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为粘菌素。

9、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为氨苄青霉素与链霉素的组合。

10、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为氨苄青霉素与粘菌素的组合。

11、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为链霉素与粘菌素的组合。

12、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为氨苄青霉素、链霉素与粘菌素的组合。

13、通过饮用含抗生素的饮水改变肠道菌群的组成，然后收集粪便制备得到粪菌制剂，所得到的粪菌制剂在制备增强溶瘤病毒免疫治疗效果的制剂中的应用，所述抗生素为氨苄青霉素、链霉素或者粘菌素中的一种或者几种，所述溶瘤病毒为腺病毒。