三尖杉提取物在化妆品或制备药品中的应用

1.本发明属于化妆品和药品技术领域，具体涉及三尖杉提取物在化妆品或制备药品中的应用。


背景技术：

2.皮肤是人体的主要屏障，其功能是保护身体器官免受外部环境的刺激(例如温度和湿度的变化、紫外线和污染物)。由于多种内在和外在因素，人的皮肤随着时间逐渐衰老，其中皱纹是皮肤老化的标志之一。具体地，内因主要包括遗传物质的改变、自由基对细胞的损伤、机体代谢紊乱等因素。外因主要包括光照、物理、化学、机械等因素；其中光照尤其是慢性紫外线照射可使皮肤自由基和活性氧类增多，胶原蛋白减少，真皮结构发生改变，表皮出现角质损伤，引起光老化，是导致皱纹形成的主要原因之一。
3.同时，由于多种物理、化学和环境因素(例如体内酶系统、还原代谢、化学品、污染物和光化学反应)而产生活性氧类。已知所产生的活性氧类通过破坏细胞组分(例如脂质、蛋白质、糖类和dna)而引起细胞衰老和多种疾病(包括癌症)。此外，通过这些活性氧类引起的脂质过氧化产生的多种体内过氧化物(包括脂质过氧化物)通过对细胞的氧化损伤来诱导功能性障碍而引起多种疾病。
4.但现有的化妆品或药品中很大一部分仅能通过物理遮盖起到抗光老化、抗氧化或抗皱的作用，保护作用有限，不能有效实现皮肤的抗光老化、抗氧化和抗皱。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供三尖杉提取物在化妆品或制备药品中的应用，本发明提供的三尖杉提取物具有优异的抗皮肤光老化、抗皱、抗氧化作用，应用于具有抗皮肤光老化、抗皮肤氧化和抗皱作用的化妆品或药品中效果显著。
6.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.本发明提供了三尖杉提取物在化妆品或制备药品中的应用，所述化妆品包括抗皮肤光老化化妆品、抗皮肤氧化化妆品和抗皱化妆品中的一种或多种；所述药品包括抗皮肤光老化药物、抗皮肤氧化药物和抗皱药物中的一种或多种。
8.优选的，所述三尖杉提取物的制备方法包括以下步骤：
9.将三尖杉浸渍于乙醇-水溶剂中，超声提取得到三尖杉提取液；所述乙醇-水溶剂中乙醇的质量百分含量为90～97％；
10.将所述三尖杉提取液除溶剂，得到所述三尖杉提取物。
11.优选的，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述除溶剂后还包括以下步骤：
12.将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液；
13.将所述三尖杉粗提物水溶液加热后加入有机萃取剂萃取，得到萃取有机相；所述有机萃取剂为乙酸乙酯；
14.将所述萃取有机相除溶剂，得到所述三尖杉提取物的纯品。
15.优选的，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述除溶剂后还包括以下步骤：
16.将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液；
17.将所述三尖杉粗提物水溶液加热后加入有机萃取剂萃取，得到萃余水相；所述有机萃取剂为乙酸乙酯；
18.将所述萃余水相除溶剂，得到所述三尖杉提取物。
19.优选的，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述除溶剂后还包括以下步骤：
20.将所述三尖杉粗提物溶解于热稀酸溶液中进行酸化，得到三尖杉粗提物酸水混合液，所述三尖杉粗提物溶解于热稀酸溶液形成的混合溶液的ph值为2～3；
21.将所述三尖杉粗提物酸水混合液固液分离，取固相产物，得到所述三尖杉提取物。
22.优选的，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述除溶剂后还包括以下步骤：
23.将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液；
24.将所述三尖杉粗提物水溶液进行柱层析分离，采用丙酮进行洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液除溶剂，得到所述三尖杉提取物。
25.优选的，所述三尖杉的质量与乙醇-水溶剂的体积之比为1g:(3～5)ml；所述超声提取的功率为60～80w。
26.本发明提供了一种含三尖杉提取物的化妆品或药品，所述含三尖杉提取物的化妆品包括三尖杉提取物和化妆品基质，所述含三尖杉提取物的药品包括三尖杉提取物和药物辅料；
27.所述含三尖杉提取物的化妆品或药品中，所述三尖杉提取物的有效浓度为10μg/ml～100mg/ml。
28.优选的，所述含三尖杉提取物的化妆品的剂型包括霜、乳液、化妆水或精华液中的任意一种。
29.优选的，所述含三尖杉提取物的药品的剂型包括外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂或贴剂。
30.本发明提供了三尖杉提取物在化妆品或药品中的应用，所述化妆品包括抗皮肤光老化化妆品、抗皮肤氧化化妆品和抗皱化妆品中的一种或多种；所述药品包括抗皮肤光老化药物、抗皮肤氧化药物和抗皱药物中的一种或多种。本发明中三尖杉提取物应用于具有抗皮肤光老化、抗皮肤氧化和抗皱化妆品或药品中效果显著。本发明通过dpph自由基清除率测试表明：本发明提供的三尖杉提取物具有清除dpph自由基的效果，有抗氧化活性。在抗uvb诱导的细胞损伤实验中，三尖杉提取物具有优异的抗uvb诱导的细胞损伤效果。本发明通过动物模型实验表明：暴露于强度为0.12～0.20mw/cm2的uvb下，28天后，对模型组和给药组进行背部皮肤拍照及取皮进行病理组织分析，通过对比可以看出模型组小鼠皮肤损伤老化严重，而给药组损伤老化明显较轻。
附图说明
31.图1为为实施例1～5制备的三尖杉提取物抗uvb诱导的细胞损伤测试结果；
32.图2为实施例5制备的三尖杉提取物抗uvb诱导的小鼠皮肤光老化测试照片；
33.图3为实施例5制备的三尖杉提取物抗uvb诱导的小鼠皮肤光老化测试组织分析图。
具体实施方式
34.本发明提供了三尖杉提取物在化妆品或制备药品中的应用，所述化妆品包括抗皮肤光老化化妆品、抗皮肤氧化化妆品和抗皱化妆品中的一种或多种；所述药品包括抗皮肤光老化药物、抗皮肤氧化药物和抗皱药物中的一种或多种。
35.在本发明中，若无特殊说明，所有制备原料/组分均为本领域技术人员熟知的市售产品。
36.在本发明中，所述三尖杉提取物由三尖杉为原料提取得到。其中，中草药三尖杉为三尖杉科植物三尖杉(cephalotaxus fortunei hooker)的全草。三尖杉分布于浙江、安徽南部、福建、江西、湖南、湖北、河南南部、陕西南部、甘肃南部、四川、云南、贵州、广西及广东等省区。本发明提供了三尖杉提取物在抗uvb诱导的皮肤光老化、抗氧化以及抗皱功能化妆品或药品中的应用。
37.在本发明中，所述三尖杉提取物的制备方法优选包括以下步骤：
38.将三尖杉浸渍于乙醇-水溶剂中，超声提取得到三尖杉提取液；所述乙醇-水溶剂中乙醇的质量百分含量为90～97％；
39.将所述三尖杉提取液除溶剂，得到所述三尖杉提取物。
40.本发明将三尖杉浸渍于乙醇-水溶剂中，超声提取得到三尖杉提取液；所述乙醇-水溶剂中乙醇的质量百分含量为90～97％。在本发明中，所述浸渍之前，本发明优选对所述三尖杉进行前处理，在本发明中，所述前处理优选包括：将所述三尖杉依次进行干燥和粉碎，本发明对所述干燥好粉碎的具体实施过程没有特殊要求。
41.在本发明中，所述三尖杉的质量与所述乙醇-水溶剂的体积之比优选为1g:(3～5)ml；所述超声提取的功率优选为60～80w。所述超声提取的次数优选为3次，本发明优选合并每次超声提取得到的提取液得到所述三尖杉提取液。
42.得到三尖杉提取液后，本发明将所述三尖杉提取液除溶剂，得到所述三尖杉提取物。在本发明中，所述除溶剂优选采用水浴旋蒸的方式进行，所述除溶剂的温度优选为57℃。
43.在本发明中，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述除溶剂后优选还包括以下步骤：
44.将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液；
45.将所述三尖杉粗提物水溶液加热后加入有机萃取剂萃取，得到萃取有机相；所述有机萃取剂为乙酸乙酯；
46.将所述萃取有机相除溶剂，得到所述三尖杉提取物的纯品。
47.本发明将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液。在本发明中，所述水优选为纯水。所述三尖杉粗提物的质量和所述水的体积之比优选为5g:100ml。
48.得到三尖杉粗提物水溶液后，本发明将所述三尖杉粗提物水溶液加热后加入有机萃取剂萃取，得到萃取有机相；所述有机萃取剂为乙酸乙酯。在本发明中，所述加热后三尖杉粗提物水溶液的温度优选为57℃。所述乙酸乙酯优选为工业乙酸乙酯。在本发明中，所述水与所述有机萃取剂的体积比优选为10:8。在本发明中，所述萃取的次数优选为3次，本发明优选合并每次萃取的有机相，得到所述萃取有机相。
49.得到所述萃取有机相后，本发明将所述萃取有机相除溶剂，得到所述三尖杉提取物。在本发明中，所述除溶剂的方法优选为蒸干。
50.在本发明中，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述除溶剂后优选还包括以下步骤：
51.将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液；
52.将所述三尖杉粗提物水溶液加热后加入有机萃取剂萃取，得到萃余水相；所述有机萃取剂为乙酸乙酯；
53.将所述萃余水相除溶剂，得到所述三尖杉提取物。
54.本发明将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液。在本发明中，所述水优选为纯水。所述三尖杉粗提物的质量和所述水的体积之比优选为5g:100ml。
55.得到三尖杉粗提物水溶液后，本发明将所述三尖杉粗提物水溶液加热后加入有机萃取剂萃取，得到萃取有机相；所述有机萃取剂为乙酸乙酯。在本发明中，所述加热后三尖杉粗提物水溶液的温度优选为57℃。所述乙酸乙酯优选为工业乙酸乙酯。在本发明中，所述水与所述有机萃取剂的体积比优选为10:8。在本发明中，所述萃取的次数优选为3次，本发明优选合并每次萃取的萃余相，得到所述萃余水相。
56.得到所述萃余水相后，本发明将所述萃余水相除溶剂，得到所述三尖杉提取物。在本发明中，所述除溶剂的方法优选为蒸干。
57.在本发明中，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述除溶剂后优选还包括以下步骤：
58.将所述三尖杉粗提物溶解于热稀酸溶液中进行酸化，得到三尖杉粗提物酸水混合液，所述三尖杉粗提物溶解于热稀酸溶液形成的混合溶液的ph值为2～3；
59.将所述三尖杉粗提物酸水混合液固液分离，取固相产物，得到所述三尖杉提取物。
60.本发明将所述三尖杉粗提物溶解于热稀酸溶液中进行酸化，得到三尖杉粗提物酸水混合液，所述三尖杉粗提物溶解于热稀酸溶液形成的混合溶液的ph值为2～3。在本发明中，所述热稀酸溶液的温度优选为60℃，稀酸溶液优选为稀盐酸溶液。所述稀盐酸溶液由浓盐酸溶液和纯水混合形成，所述浓盐酸的质量百分含量优选为37％，所述浓盐酸和所述纯水的体积比优选为1:(33～60)。在本发明中，所述三尖杉粗提物溶解于热稀酸溶液形成的混合溶液的ph值更优选为2.5。在本发明中，所述溶解优选在搅拌的条件下进行，所述搅拌的时间优选≥2h；本发明优选通过搅拌以保证总提液中生物碱成分充分酸化，形成游离在水中的有机盐。在本发明中，所述酸化的温度优选为2～4℃，所述酸化的时间优选为12h，所述酸化优选在静置的条件下进行。
61.得到三尖杉粗提物酸水混合液后，本发明将所述三尖杉粗提物酸水混合液固液分离，取固相产物，得到所述三尖杉提取物。在本发明中，所述固液分离优选在真空抽滤器中进行，得到的固相产物优选进行洗涤，得到所述三尖杉提取物。在本发明中，所述洗涤优选包括以下步骤：将所述固相产物加入稀盐酸中，得到的悬浊液的ph值优选为2.5～3，所述稀盐酸由浓盐酸和纯水按照体积比优选为1:80混合，所述浓盐酸的质量百分含量优选为37％；将所述悬浊液加热至70℃搅拌30～60min，热过滤，得到洗涤后固相产物。在本发明中，所述洗涤的次数优选为4。最后一次洗涤后的固相产物为所述三尖杉提取物。
62.在本发明中，所述除溶剂得到三尖杉粗提物；所述三尖杉提取物的制备方法优选还包括以下步骤：
63.将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液；
64.将所述三尖杉粗提物水溶液进行柱层析分离，采用丙酮进行洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液除溶剂，得到所述三尖杉提取物的纯品。
65.本发明将所述三尖杉粗提物溶解于水中，得到三尖杉粗提物水溶液。在本发明中，所述水优选为纯水。本发明对所述水的用量没有特殊要求，确保所述三尖杉粗提物完全溶解即可。
66.得到三尖杉粗提物水溶液后，本发明将所述三尖杉粗提物水溶液进行柱层析分离，采用丙酮进行洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液除溶剂，得到所述三尖杉提取物。在本发明中，所述柱层析分离优选为大孔树脂柱层析分离。所述柱层析分离的色谱柱的柱长优选为40cm，直径优选为2.8cm。在本发明中，所述三尖杉粗提物水溶液上样吸附的时间≥2h，上样完成后，本发明采用所述丙酮洗脱之前，本发明优选采用蒸馏水、质量含量为20％乙醇-水、质量含量为40％乙醇-水、质量含量为60％乙醇-水、质量含量为80％乙醇-水和质量含量为95％乙醇-水依次进行洗脱除杂，然后采用丙酮洗脱，收集洗脱液。本发明优选采用旋转浓缩蒸干的方式去除溶剂。
67.本发明提供了一种含三尖杉提取物的化妆品或药品，所述含三尖杉提取物的化妆品包括三尖杉提取物和化妆品基质，所述含三尖杉提取物的药品包括三尖杉提取物和药物辅料。
68.在本发明中，所述化妆品基质优选为化妆品监督管理条例中允许使用的化妆品基质及添加物。
69.在本发明中，所述含三尖杉提取物的化妆品中，所述三尖杉提取物的有效浓度优选为10μg/ml～100mg/ml，更优选为15μg/ml～50mg/ml。
70.在本发明中，所述含三尖杉提取物的药品中，所述三尖杉提取物的有效浓度优选为10μg/ml～100mg/ml，更优选为15μg/ml～50mg/ml，最优选为2mg/ml。
71.在本发明中，所述含三尖杉提取物的化妆品的剂型优选包括霜、乳液、化妆水或精华液中的任意一种。
72.在本发明中，所述含三尖杉提取物的药品的剂型优选包括外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂或贴剂，更优选为搽剂。
73.在本发明中，所述含三尖杉提取物的药品的剂型优选为搽剂时，所述辅料为溶剂，所述溶剂包括异丙醇和无水乙醇，所述异丙醇和无水乙醇的体积比优选为7:3。
74.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
75.实施例1
76.称取干燥的三尖杉100g，微粉碎，取300ml乙醇质量含量为90％的乙醇-水浸泡三尖杉，超声提取，超声功率为60w，重复提取三次，合并三次提取液，于57℃恒温水浴旋蒸蒸干，得到三尖杉粗提物(提取率为13.87％)，记为三尖杉提取物一。
77.实施例2
78.称取干燥的三尖杉100g，微粉碎，取300ml乙醇质量含量为90％的乙醇-水浸泡三尖杉，超声提取，超声功率为60w，重复提取三次，合并三次提取液，于57℃恒温水浴旋蒸蒸干，得到三尖杉粗提物；
79.称取5g三尖杉粗提物加100ml纯水溶解，加热至57℃后，加80ml工业乙酸乙酯萃取，重复三次，合并乙酸乙酯层，蒸干乙酸乙酯层中的乙酸乙酯，得到三尖杉提取物，得率为33.35％，记为三尖杉提取物二。
80.实施例3
81.称取干燥的三尖杉100g，微粉碎，取300ml乙醇质量含量为90％的乙醇-水浸泡三尖杉，超声提取，超声功率60w，重复提取三次，合并三次提取液，于57℃恒温水浴旋蒸蒸干，得到三尖杉粗提物；
82.称取5g三尖杉粗提物加100ml纯水溶解，加热至57℃后，加80ml工业乙酸乙酯萃取，重复三次，合并水层，蒸干水层中的水，得到三尖杉提取物，得率为61.91％，记为三尖杉提取物三。
83.实施例4
84.称取干燥的三尖杉100g，微粉碎，取300ml乙醇质量含量为90％的乙醇-水浸泡三尖杉，超声提取，超声功率60w，重复提取三次，合并三次提取液，于57℃恒温水浴旋蒸蒸干，得到三尖杉粗提物(提取率为13.87％)；
85.称取3.89g三尖杉粗提物趁热加入温度为60℃的热稀盐酸，稀盐酸由浓盐酸(37％)加纯水稀释得到，其中浓盐酸和纯水的体积比例＝1:33，充分搅拌，调节三尖杉粗提物和热稀盐酸混合后形成的混合溶液的ph值至2.5，搅拌半个小时以上，以保证三尖杉粗提物中的生物碱成分充分酸化，形成游离在水中的有机盐，调酸完成的混合酸液(ph值至2.5)需要在2℃静置12h，得到酸水混合液；
86.将上述静置12h的酸水混合液移入真空抽滤器中，抽滤得到澄清的酸液舍去，将得到的滤渣加入稀盐酸(37％的浓盐酸和纯水的体积比为1:80)，控制混合的溶液ph值为2.5，加热至70℃，搅拌30min，热过滤，得到第一次洗渣滤液舍去，将第一次洗渣按照第一次洗涤再重复酸洗4次，得到的滤为三尖杉提取物，得率为18.92％，记为三尖杉提取物四。
87.实施例5
88.称取干燥的三尖杉100g，微粉碎，取300ml乙醇质量含量为90％的乙醇-水浸泡三尖杉，超声提取，超声功率60w，重复提取三次，合并三次提取液，于57℃恒温水浴旋蒸蒸干，得到三尖杉粗提物(提取率为13.87％)；
89.取1g三尖杉粗提物用纯水溶解，上大孔树脂分离柱，柱长40cm，直径2.8cm，吸附时间3小时，依次用蒸馏水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、丙酮洗脱。收集丙酮洗脱得到的洗脱液，旋蒸浓缩蒸干丙酮洗脱液，即得三尖杉提取物(得率为5.27％)，记为三尖杉提取物五。
90.测试例1
91.实施例1～5制备的五种三尖杉提取物的dpph自由基清除率测试
92.dpph(1,1-二苯基-2-苦基肼)自由基由于其不成对的电子而呈深紫色，其清除能力可以通过在517nm处的吸光度来测定。于96孔板中加入50μl待测样品，再加入50μldpph的甲醇溶液(0.208mm)。室温下避光静置40min后测量517nm处的吸光度。测试结果如表1所示，由表1的结果可知，实施例1～5制备的5种三尖杉提取物均有清除自由基的效果，有抗氧化活性。
93.表1实施例1～5制备的五种三尖杉提取物的dpph自由基清除率
[0094][0095]
测试例2
[0096]
测试实施例1～5制备的五种三尖杉提取物抗uvb诱导的细胞损伤测试
[0097]
每个实施例制备的三尖杉提取物进行三个平行浓度的3组实验，每组实验设3个样品浓度，分别为400、200、100μg/ml，每个浓度3个复孔。96孔板，1
×
104个/孔，接种细胞后过夜，次日加样，加样后一小时采用紫外uvb照射27分钟，辐照剂量为300mj/cm2，24h后测定细胞活率。细胞活率的测定采用mtt法。结果如图1所示，由图可知，实施例1～5制备的5种三尖杉提取物均可对抗uvb引起的细胞损伤，具有抗光老化活性。
[0098]
应用例1
[0099]
取实施5制备的三尖杉提取物五溶解于基质，基质的体积配比为异丙醇：无水乙醇＝7:3，配成2mg/ml的澄清、均一的溶液，得到三尖杉提取物样品。
[0100]
测试例3
[0101]
应用例1制备的三尖杉提取物样品抗uvb诱导的小鼠皮肤光老化测试；
[0102]
选用适应性饲养3天的雌性昆明小鼠，体重25～30g，脱去背部毛，按体重分组，每组6只，分为空白对照组、模型组、样品组。紫外照射前1h对样品组小鼠进行背部外涂给予三尖杉提取物，每只涂抹上述样品100μl，涂抹皮肤面积约2cm2；空白对照和模型组涂抹100μl空白基质。而后将小鼠暴露于强度为0.12～0.20mw/cm2的紫外uvb下照射30-40min；紫外照射后1h，再次按上述途径及剂量涂抹样品，每天共计紫外照射一次，外涂样品两次，持续28天。到期后，麻醉小鼠，对小鼠背部皮肤拍照，然后取下做he染色，进行病理组织分析，结果如图2和图3所示。通过对比可以看出模型组小鼠皮肤损伤老化严重，而给药组损伤老化明显较轻。
[0103]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。