用于赘生物细胞处理的装置和抗肿瘤药物的制作方法

背景技术：

技术实现思路

1、本发明的目的是实现一种替代已知类型的装置和方法，该装置和方法适于阻断或抑制活生物体靶区域中赘生物细胞的生长。

2、特别地，本发明的目的是这样的装置和方法可以用于治疗赘生物，甚至是侵袭型的赘生物，例如多形性胶质母细胞瘤。

3、尽管如此，本发明的一个目的是这样的方法和装置在患者中的使用也可以是非侵入式的。

4、此外，本发明的目的是实现一种抗肿瘤药物，其具有更大的治疗功效和降低的毒理学特征，从而改善患者的生活质量。

5、上述目的是通过如主要权利要求中所述的抗肿瘤药物来实现。

6、这些目的还通过如权利要求7所述的装置来实现。

7、此外，根据下面将描述的，这些目的还通过处理赘生物细胞的方法来实现。

8、特别地，本发明涉及用于阻断或抑制活生物体靶区域中赘生物细胞生长的方法的抗肿瘤药物，其中所述方法包括在向靶区域施加预定时间段的电流波之前、同时或之后用抗肿瘤药物处理所述赘生物细胞，并且其中所述电流波具有基频高于或等于2mhz的波形。

9、优选这种电流波具有基频范围在2和64mhz之间、更优选范围在2和20mhz之间、甚至更优选范围在4和20mhz之间的波形。

10、更优选地，这样的电流波具有基频约为4mhz的波形。

11、规定这种电流波的施加在本文中也将称为“量子分子共振”或“qmr”。

12、此外，根据本发明的一个方面，这种电流波具有正弦波形。

13、根据本发明的一个方面，该波形由于谐波的存在而失真。

14、根据本发明的另一个方面，该正弦波形由于至少二阶和三阶谐波的存在而失真。

15、根据本发明的一个方面，用抗肿瘤药物治疗赘生物细胞在施加上述电流波的同时或之后进行。

16、优选地，根据本发明的一个方面，当用抗肿瘤药物处理赘生物细胞时，用抗肿瘤药物处理赘生物细胞与向靶区域施加电流波同时进行。

17、根据本发明的一个方面，上述抗肿瘤药物包括替莫唑胺。

18、根据本发明的一个方面，赘生物细胞包括胶质母细胞瘤细胞。

19、特别地，靶区域属于活生物体，优选地属于人对象。

20、上述靶区域优选地包括中枢神经系统。

21、一种用于阻断或抑制活生物体靶区域中赘生物细胞生长的装置也是本发明的部分，其中所述装置配置为产生电流波，所述电流波具有基频高于或等于2mhz、优选在2和64mhz之间、更优选在2和20mhz之间，甚至更优选在4和20mhz之间，更优选大约4mhz的波形，并且其中所述波形是由于谐波的存在而失真的正弦波形。

22、该装置包括与至少一个射频电路连接的一个或多个电极，该射频电路适于向这些电极中的每一个提供具有基频高于或等于2mhz的电流波。

23、这样的一个或多个电极配置为将所述电流波传输到上述靶区域。

24、根据本发明的一个方面，该装置的电极是可植入型电极，适于在上述靶区域处或附近植入。

25、阻断或抑制靶区域赘生物细胞生长的方法也是本发明的部分。

26、该靶区域优选地属于活生物体。

27、根据本发明的方法的一个方面，其包括通过将电流波施加到上述靶区域预定时间段来处理上述赘生物细胞，其中所述电流波具有基频高于或等于2mhz、优选地在2和64mhz之间，更优选在2和20mhz之间、甚至更优选在4和20mhz之间，更优选大约4mhz的波形。

28、此外，根据本发明的方法的一个方面，这样的波形是正弦波形。

29、还根据本发明的一个方面，该波形由于谐波的存在而失真。

30、再次，根据本发明方法的另一方面，正弦波形由于至少二阶和三阶谐波的存在而失真。

31、此外，根据本发明方法的一个方面，赘生物细胞包括胶质母细胞瘤细胞。

32、根据本发明的一个方面，靶区域包括中枢神经系统。

33、根据本发明方法的另一方面，该方法包括以下步骤：

34、-将适于产生电流波的装置与一个或多个电极连接，所述电流波具有基频高于或等于2mhz的波形，并且优选具有由于谐波的存在而失真的正弦波形；

35、-将这些电极中的至少一个施加到包含上述赘生物细胞的靶区域所在的活生物体的身体表面；

36、-激活装置以至于将电流波传递到所述电极，并将所述装置保持激活预定时间。

37、另外，根据本发明方法的另一方面，该方法包括以下步骤：

38、-将适于产生电流波的装置与一个或多个可植入型电极连接，所述电流波具有基频高于或等于2mhz的波形，并且优选具有由于谐波存在而失真的正弦波形；

39、-在包含上述赘生物细胞的靶区域处或附近将这些电极中的至少一个植入活生物体中；

40、-激活装置以至于将电流波传递到所述电极，并将装置保持激活预定时间。

41、优选地，本发明的方法利用了本发明的装置。

42、藉由以下通过举例而非限制方式给出的对本发明优选实施方式的描述，本发明的药物、装置和方法的其他特征和优点对于本领域的技术人员而言将是显而易见的。

43、附图简要说明

44、-图1显示了在倒置光学显微镜下获得的胶质母细胞瘤a172在qmr刺激结束后0、24和48小时的细胞培养物和未处理的对照细胞(对照)的代表性图像；使用放大10倍的axiovert 40cfl显微镜获取图像；

45、-图2显示了与对照细胞(对照)相比，在qmr刺激结束后0、24和48小时，a172细胞的细胞活力比(至少4-5个独立实验的平均值±sem；**＝p<0.01；qmr与对照(单样本t检验))；

46、-图3a、3b和3c显示了细胞周期(g0-g1、s、g2-m)每个阶段a172细胞的百分数：在qmr刺激结束后0小时(图3a)、24小时(图3b)和48小时(图3c)通过流式细胞术监测细胞周期的进展(至少4-6个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；qmr与对照组(未配对t检验))；

47、-图4a、4b和4c显示了qmr刺激结束后0小时(图4a)、24小时(图4b)和48小时(图4c)a172细胞中的细胞凋亡诱导；直方图显示活细胞和死细胞的百分数，将早期细胞凋亡与晚期细胞凋亡和坏死细分(至少3-5个独立实验的平均值±sem；**＝p<0.01；qmr与对照(未配对t检验))；

48、-图5a至5f显示了qmr刺激对间充质基质细胞(bm-msc)的影响：图5a显示了用axiovert 40cfl倒置光学显微镜放大10倍获得的在24小时qmr刺激结束后0和24小时的bm-msc细胞培养物和对照细胞(对照)的代表性图像；图5b显示了与对照细胞相比，bm-msc细胞在qmr刺激24小时结束后0小时和24小时通过台盼蓝测试获得的活力；图5c-5f显示了bm-msc细胞在细胞周期每个阶段(g0-g1、s、g2-m)的百分比，以及qmr刺激结束后0小时和24小时通过流式细胞术的细胞凋亡诱导(分别为5c/5e和5d/5f)；结果表示为至少3-4个独立实验的平均值±sem；*＝p＜0.05；qmr与对照；

49、-图6显示了基础条件下(对照)和qmr刺激后bm-msc细胞核型的代表性图像；中期染色体采用gtg法检测；这些图像代表了3个独立的实验；

50、-图7a和7b显示了qmr刺激后a172细胞的侵袭性和侵入性：在图.7a中，a172细胞集落用钙黄绿素标记并使用axiovert cfl倒置光学显微镜计数；在图7b中，a172细胞在直接放置在培养皿内的硅插入物中生长，在qmr刺激后，使用倒置光学显微镜在刺激结束后48小时内评估迁移率，其中使用image j软件定量指示细胞迁移率的划痕闭合百分数；结果表示为至少3-5个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；***＝p＜0.001；qmr与对照；

51、-图8a-8f显示了qmr刺激对t98g胶质母细胞瘤细胞的影响：图8a显示了用axiovert 40cfl倒置光学显微镜放大5倍获得的图像，表示在24小时qmr刺激结束后0和24小时的t98g细胞和对照细胞(对照)的培养物；图8b显示了与对照细胞相比，t98g细胞在24小时qmr刺激结束后0、24和48小时通过台盼蓝测试获得的的活力；图8c显示了用钙黄绿素标记并通过axiovert cfl倒置光学显微镜计数的t98g细胞的集落；图8d和8e显示了t98g细胞在细胞周期每个阶段(g0-g1、s、g2-m)的百分数，以及qmr刺激结束后0、24和48小时通过流式细胞术获得的细胞凋亡诱导；在图8f中，t98g细胞在直接放置在培养皿内的硅插入物中生长，在qmr刺激后，通过倒置光学显微镜评估刺激结束后72小时的迁移率；使用image j软件定量指示细胞迁移速率的划痕闭合的百分数；结果表示为至少3-5个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；**＝p＜0.01；qmr与对照；

52、-图9a至9e显示了qmr刺激对u87mg胶质母细胞瘤细胞的影响：图9a显示用axiovert 40cfl倒置光学显微镜放大5倍获得的图像，代表24小时qmr刺激结束后0和24小时的u87mg细胞培养物和对照细胞(对照)；图9b显示了与对照细胞相比，u87mg细胞在24小时qmr刺激结束后0、24和48小时通过台盼蓝测试获得的活力；在图9c中，用钙黄绿素标记u87mg细胞集落，并通过axiovert cfl倒置光学显微镜计数；图9d和9e显示了u87mg细胞在细胞周期每个阶段(g0-g1、s、g2-m)的百分数，以及qmr刺激结束后0、24和48小时通过流式细胞术获得的细胞凋亡诱导；结果表示为至少3-5个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；**＝p＜0.01；qmr与对照；

53、-图10a和10b显示了qmr刺激24小时和48小时后a172、t98g和u87mg细胞的细胞活力值；在图10b中，用qmr以比其他细胞系高15％的功率刺激t98g细胞，并在qmr刺激24-48小时后评估增殖率；结果表示为至少1-4个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p＜0.001；qmr与对照；

54、-图11显示了用药物替莫唑胺(tmz)处理144小时的a172细胞的细胞活力值；结果通过台盼蓝测试获得并表示为至少3个独立实验的平均值±sem；

55、*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p＜0.001；tmz与对照(单样本t检验)；

56、-图12a和12b显示了tmz药物和qmr刺激联合处理对a172细胞的影响；24小时qmr刺激后或同时给予tmz，持续144小时，其中通过台盼蓝测试监测细胞活力，结果表示为至少3-5个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p＜0.001；处理与对照；+＝p<0.05；++＝p<0.01；+++＝p＜0.001，对于tmz和qmr联合用药与tmz单独；

57、-图13a和13b显示了在用qmr刺激后(图12a)或同时(图12b)，用tmz(10μm和25μm)处理a172细胞的细胞凋亡诱导值，其中通过流式细胞术获得值；结果表示至少4-6个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p<0.001，对于治疗与对照；+＝p<0.05；++＝p<0.01；+++＝p＜0.001，对于tmz和qmr联合用药与tmz单独；

58、-图14a和14b显示了细胞周期每个阶段(g0-g1、s、g2-m)的a172细胞的百分数：qmr刺激后(图14a)以及与qmr刺激同时(图14b)，通过tmz处理的细胞的流式细胞术监测细胞周期进展；结果表示为至少3-5个独立实验的平均值±sem；*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p＜0.001，对于tmz处理组和qmr与对照；+＝p<0.05；++＝p<0.01；+++＝p＜0.001，对于tmz处理和qmr与tmz单独。