包括糖基古菌醇和免疫刺激剂的佐剂的制作方法

本技术总体上涉及免疫学领域，并且更特别地涉及用于免疫原性组合物诸如疫苗的佐剂。

背景技术：

1、疫苗是提高对特定疾病免疫力的生物制剂。它们经常用在人类和动物的预防中，以防止由细菌、病毒和寄生生物引起的传染病。也正在研究将疫苗用于其他治疗应用，诸如癌症治疗。

2、疫苗中使用的抗原可以包括各种剂，诸如杀死的病原生物、活的但经过改造或减毒的病原生物、编码蛋白质的核酸、纯化或重组的蛋白质或其片段。通常还需要添加佐剂来增强宿主对抗原的免疫应答，并且在一些情况下减缓抗原从注射部位的释放。佐剂是可以增强对疫苗的应答的物质，并且可以以许多不同的方式起作用，诸如提供仓库效应(depoteffect)或诱导免疫刺激。

3、已研究了多种各样的用于疫苗的佐剂。目前批准用于人类疫苗的佐剂包括铝盐，诸如氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝钾(明矾)；cpg寡脱氧核苷酸(cpg odn)；水包油乳剂(诸如mf59和as03)、as04(3’-o-脱酰基单磷酰脂质a(mpl)加铝盐)和as01(mpl和皂苷qs-21配制在脂质体中)，其中，铝盐是最常用的。

4、古细菌脂质体(archaeosome)是脂质囊泡(脂质体)，其典型地由醚连接的类异戊二烯植烷基核的全极性脂质或半合成糖脂组成，具有各种糖基头基和氨基头基，其具有强佐剂和免疫刺激特性。一种古细菌脂质体制剂包括共价连接到古菌的核心部分的游离sn-1羟基主链的硫酸化二糖基团(sla；6’-硫酸根-β-d-galp-(1,4)-β-d-glcp-(1,1)-古菌醇)(参见mccluskie等人，2017，akache等人，2018，以及wo 2016/004512；其各自内容以它们的整体通过引用并入本文)。mccluskie等人(2017)、akache等人(2018)和wo 2016/004512已经表明，单独的包括sla的古细菌脂质体或与不带电荷的糖脂(例如乳糖基古菌醇，la)混合的包括sla的古细菌脂质体诱导对包埋抗原的强烈的抗原特异性igg和cd8 t细胞应答，并诱导许多细胞因子/趋化因子包括il-6、g-csf、kc和mip-2的表达。jia等人(2019,2020)、akache等人(2019)、agbayani等人(2020)和stark等人(2019)也表明，包括sla的古细菌脂质体在简单地与抗原混合，以及在包埋制剂中时，可以诱导强烈的抗原特异性免疫应答。

5、佐剂可以增强并经常重定向对疫苗抗原的免疫应答，或者替代地为抗原(仓库)提供载体效应，以在注射部位或邻近淋巴结处保留更长时间。主要免疫应答机制是诱导中和抗体(体液应答)和产生t细胞(细胞介导的应答)，包括cd4+辅助细胞(th)和cd8+细胞毒性(细胞毒性t淋巴细胞)应答。疫苗的成功取决于它引起强烈和/或持久且适当的免疫应答的能力。不同的佐剂引起不同的免疫应答。例如，铝盐引起强烈的体液应答，但只有微弱的细胞介导的应答。铝盐不能引起治疗慢性病毒感染和癌症所需的强烈的细胞介导的免疫应答。

6、对能够快速诱导强烈、有效且持久免疫应答的佐剂有显著需求。

技术实现思路

1、根据第一方面，提供了一种佐剂组合物，其包含：

2、糖基古菌醇(glycoarchaeol)或其药学上可接受的盐，以及选自toll样受体(tlr)激动剂或其药学上可接受的盐和皂苷或其药学上可接受的盐的至少一种免疫刺激剂。

3、在实施方式中，糖基古菌醇包括古菌醇(archaeol)核心部分。

4、在实施方式中，糖基古菌醇是带电荷的类异戊二烯糖脂，其包括通过β键键共价连接到古菌醇核心部分的甘油主链的游离sn-1羟基基团的硫酸化糖类基团。

5、在实施方式中，古菌醇核心部分是2,3-双((3,7,11)-3,7,11,15-四甲基十六烷基)氧基)丙-1-醇。

6、在实施方式中，硫酸化糖类基团是硫酸化二糖或硫酸化三糖。在实施方式中，硫酸化糖类基团是6′-硫酸根-β-d-galp-(1,4)-β-d-glcp。

7、在实施方式中，糖基古菌醇是2,3双[(3,7,11)-3,7,11,15-四甲基十六烷基氧基]丙-1-基4-o-(6-o-磺基-β-d-吡喃半乳糖基)-β-d-吡喃葡萄糖苷(2,3bis[(3,7,11)-3,7,11,15-tetramethylhexadecyloxy]propan-1-yl

8、4-o-(6-o-sulfo-β-d-galactopyranosyl)-β-d-glucopyranoside)。

9、在实施方式中，糖基古菌醇具有式i:

10、

11、其中n是0或1；

12、r和r’独立地是氢或羟基；并且

13、y是氢或硫酸根基团，并且至少一个y是硫酸根基团。

14、在实施方式中，糖基古菌醇具有结构：

15、

16、在本文所述佐剂组合物的实施方式中，糖基古菌醇的药学上可接受的盐是钠盐、钙盐或镁盐。

17、在本文所述佐剂组合物的实施方式中，糖基古菌醇或其药学上可接受的盐包括在古细菌脂质体内。在实施方式中，古细菌脂质体进一步包括至少一种附加脂质。在实施方式中，至少一种附加脂质是带中性电荷或不带电荷的糖脂。在进一步的实施方式中，至少一种附加脂质是乳糖基古菌醇、鼠李糖基-乳糖基古菌醇、三葡糖基古菌醇或其任意两种或多种的组合。在实施方式中，糖基古菌醇或其药学上可接受的盐与至少一种附加脂质的摩尔％比率为99.9999:0.0001至30:70。在实施方式中，糖基古菌醇或其药学上可接受的盐与至少一种附加脂质的摩尔％比率为约50:50。

18、在本文所述佐剂组合物的实施方式中，至少一种免疫刺激剂或其药学上可接受的盐包括tlr4激动剂、tlr3激动剂、tlr9激动剂或其任意两种或多种的组合。在实施方式中，tlr3激动剂是聚肌苷:聚胞苷酸聚(i:c)。在实施方式中，tlr4激动剂是单磷酰脂质a(mpla)。在实施方式中，tlr9激动剂是寡核苷酸。在进一步的实施方式中，寡核苷酸包括一个或多个cpg基序。

19、在本文所述佐剂组合物的实施方式中，至少一种免疫刺激剂包括皂苷或其药学上可接受的盐。在实施方式中，皂苷或其药学上可接受的盐包括三萜糖苷。

20、在本文所述佐剂组合物的实施方式中，至少一种免疫刺激剂包括qs-21。

21、在本文所述佐剂组合物的实施方式中，糖基古菌醇或其药学上可接受的盐与至少一种免疫刺激剂或其药学上可接受的盐的质量比为100:1至100:50。

22、进一步的方面是包括抗原和本文所述佐剂组合物的免疫原性组合物。在实施方式中，抗原是肽、蛋白质或病毒样颗粒。在实施方式中，免疫原性组合物进一步包括药学上可接受的载体。在实施方式中，免疫原性组合物是疫苗组合物。在实施方式中，免疫原性组合物通过混合糖基古菌醇或其药学上可接受的盐、至少一种免疫刺激剂和抗原来制备。在实施方式中，免疫原性组合物用于肠胃外施用或粘膜施用。在进一步的实施方式中，免疫原性组合物用于肌内施用。

23、在实施方式中，免疫原性组合物在施用至受试者时引起细胞介导的应答和体液应答。在实施方式中，体液应答包括igg应答。在实施方式中，细胞介导的应答包括cd4+应答、cd8+应答、细胞毒性应答和至少一种细胞因子的产生中的至少一者。在进一步的实施方式中，至少一种细胞因子包括ifn-γ。

24、另一个方面是本文所述的免疫原性组合物用于在受试者中诱导免疫应答。在实施方式中，免疫应答包括细胞介导的应答和体液应答。在实施方式中，体液应答包括igg应答。在实施方式中，细胞介导的应答包括cd4+应答、cd8+应答、细胞毒性应答和至少一种细胞因子的产生中的至少一者。在进一步的实施方式中，至少一种细胞因子包括ifn-γ。

25、另一个方面是一种在受试者中诱导免疫应答的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的免疫原性组合物。在实施方式中，免疫应答包括细胞介导的应答和体液应答。在实施方式中，体液应答包括igg应答。在实施方式中，细胞介导的应答包括cd4+应答、cd8+应答、细胞毒性应答和至少一种细胞因子的产生中的至少一者。在进一步的实施方式中，至少一种细胞因子包括ifn-γ。在实施方式中，免疫原性组合物通过肠胃外或粘膜施用给予受试者。在进一步的实施方式中，免疫原性组合物通过肌内施用给予受试者。

26、另一个方面是一种制备免疫原性组合物的方法，该方法包括将抗原与本文所述的佐剂组合物组合。