抗SIGLEC-8抗体制剂的制作方法

本公开涉及包含结合人siglec-8的抗体的制剂和/或制品。

背景技术：

1、siglec(唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素)是主要在白细胞上发现的单程跨膜细胞表面蛋白，其特征在于对附着在细胞表面糖缀合物上的唾液酸具有特异性。siglec家族含有至少15个在哺乳动物中发现的成员(pillai等人,annu rev immunol.,2012,30:357-392)。这些成员包括唾液酸粘附素(sialoadhesion)(siglec-1)、cd22(siglec-2)、cd33(siglec-3)、髓磷脂相关糖蛋白(siglec-4)、siglec-5、obbp1(siglec-6)、airm1(siglec-7)、saf-2(siglec-8)和cd329(siglec-9)。siglec-8是在人类中表达但在小鼠中不表达的成员，最初被发现是作为鉴定新型人嗜酸性粒细胞蛋白的努力的一部分。除嗜酸性粒细胞表达外，肥大细胞和嗜碱性粒细胞也表达。siglec-8识别硫酸化聚糖，即6'-磺基-唾液酸lewis x或6'-磺基-唾液酸-n-乙酰基-s-乳糖胺，并含有细胞内免疫受体酪氨酸抑制基序(itim)结构域，显示其抑制肥大细胞功能。

2、与肥大细胞一起，嗜酸性粒细胞可以促进炎症反应，其起到有益的功能作用，诸如控制特定组织部位的感染。在炎症反应期间，嗜酸性粒细胞的细胞凋亡可以通过促进生存的细胞因子(诸如il-3和gm-csf)的活性来抑制。然而，未通过细胞凋亡迅速清除的活化嗜酸性粒细胞的增加会导致已发炎部位释放嗜酸性粒细胞颗粒蛋白，从而损伤组织并导致炎症进一步加剧。已经显示几种疾病与嗜酸性粒细胞活化有关，诸如查格-施特劳斯综合征(churg strauss syndrome)、类风湿性关节炎和过敏性哮喘(wechsler等人,j allergyclin immunol.,2012,130(3):563-71)。目前需要能够控制涉及炎症的免疫细胞的活性，诸如嗜酸性粒细胞和肥大细胞的活性的疗法。

3、结合siglec-8的人源化抗体已经开发出来，目前正在进行临床前和临床试验。参见，例如，美国专利号9,546,215。因此，仍然需要允许储存、运输和施用此类抗体同时保持其稳定并防止聚集的制剂。

4、本文引用的所有参考文献，包括专利申请、专利公布和科学文献以引用方式整体并入本文，如同每篇单独的参考文献具体且单独地被指明以引用方式并入。

技术实现思路

1、为了满足这种和其他需要，本公开尤其涉及包含结合人siglec-8的抗体的制剂。有利地，这些制剂提供改善的稳定性并防止抗体低聚化和聚集，例如由于搅拌和/或冻融所致。

2、因此，本公开的某些方面涉及制剂(例如，液体制剂)，其包含(a)浓度为约5mg/ml至约15mg/ml的结合人siglec-8的抗体；(b)浓度为约50mm至约200mm的精氨酸；(c)浓度为约5mm至约50mm的琥珀酸盐；(d)浓度为约40mm至约150mm的氯化钠；和(e)浓度为约0.002％至约0.05％的聚山梨酯，其中制剂的ph为约5.0至约7.0(例如，ph约6.0)。在一些实施方案中，抗体包含：(1)重链可变区，重链可变区包含：hvr-h1，其包含seq id no:1的氨基酸序列；hvr-h2，其包含seq id no:2的氨基酸序列；hvr-h3，其包含seq id no:3的氨基酸序列；和(1)轻链可变区，轻链可变区包含：hvr-l1，其包含seq id no:4的氨基酸序列；hvr-l2，其包含seq id no:5的氨基酸序列；和hvr-l3，其包含seq id no:6的氨基酸序列。

3、在一些实施方案中，抗体的浓度为约15mg/ml。

4、在一些实施方案中，制剂包含例如浓度为约100mm至约200mm的精氨酸。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约100mm至约150mm的精氨酸。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约125mm的精氨酸。在一些实施方案中，精氨酸是精氨酸盐酸盐。

5、在一些实施方案中，制剂包含例如浓度为约10mm至约50mm的琥珀酸盐。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约10mm至约30mm的琥珀酸盐。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约20mm的琥珀酸盐。在一些实施方案中，琥珀酸盐是琥珀酸钠盐。

6、在一些实施方案中，制剂包含例如浓度为约50mm至约130mm的氯化钠。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约75mm至约100mm的氯化钠。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约80mm的氯化钠。

7、在一些实施方案中，制剂包含例如浓度为约0.01％至约0.05％的聚山梨酯。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约0.025％的聚山梨酯。在一些实施方案中，聚山梨酯是聚山梨酯-80。

8、在一些实施方案中，制剂包含(a)浓度为15mg/ml的抗体；(b)浓度为125mm的精氨酸；(c)浓度为20mm的琥珀酸盐；(d)浓度为80mm的氯化钠；和(e)浓度为0.025％的聚山梨酯，其中制剂的ph为6.0。

9、在一些实施方案中，如通过尺寸排阻色谱高效液相色谱(sec-hplc)测定小抗体低聚物的丰度所测量，制剂中少于5％的抗体在冷冻和解冻后聚集。在一些实施方案中，如通过尺寸排阻色谱高效液相色谱(sec-hplc)测定小抗体低聚物的丰度所测量，制剂中少于5％的抗体在冷冻和解冻五次后聚集。在一些实施方案中，如通过尺寸排阻色谱高效液相色谱(sec-hplc)测定小抗体低聚物的丰度所测量，制剂中少于5％的抗体在800rpm下振荡过夜后聚集。在一些实施方案中，冷冻和解冻后，通过uv-vis光谱测量，制剂在400nm处的吸光度(a400nm)小于参考标准的a400nm的约150％。在一些实施方案中，冷冻和解冻五次后，通过uv-vis光谱测量，制剂在400nm处的吸光度(a400nm)小于约0.1。在一些实施方案中，在800rpm下振荡过夜后，通过uv-vis光谱测量，制剂在400nm处的吸光度(a400nm)小于约0.1。

10、在一些实施方案中，抗体包含fc区和与fc区连接的n糖苷连接的碳水化合物链，其中制剂中抗体的少于约50％的n糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。在一些实施方案中，组合物中抗体的n糖苷连接的碳水化合物链基本上都不含有岩藻糖残基。

11、在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，重链可变区包含seq id no:7的氨基酸序列；和/或轻链可变区，轻链可变区包含选自seq id no:8或9的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含含有人igg fc区的重链fc区。在一些实施方案中，人igg fc区包含人igg1。在一些实施方案中，人igg fc区包含人igg4。在一些实施方案中，抗体包含重链，重链包含seq id no:19的氨基酸序列；和/或轻链，轻链包含选自seq id no:20或21的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含：(a)重链可变区，重链可变区包含：(1)包含seq id no:10的氨基酸序列的hc-fr1；(2)包含seq id no:1的氨基酸序列的hvr-h1；(3)包含seq id no:11的氨基酸序列的hc-fr2；(4)包含seq id no:2的氨基酸序列的hvr-h2；(5)包含seq idno:12的氨基酸序列的hc-fr3；(6)包含seq id no:3的氨基酸序列的hvr-h3；和(7)包含seqid no:13的氨基酸序列的hc-fr4；和/或(b)轻链可变区，轻链可变区包含：(1)包含seq idno:14的氨基酸序列的lc-fr1；(2)包含seq id no:4的氨基酸序列的hvr-l1；(3)包含seqid no:15的氨基酸序列的lc-fr2；(4)包含seq id no:5的氨基酸序列的hvr-l2；(5)包含seq id no:16的氨基酸序列的lc-fr3；(6)包含seq id no:6的氨基酸序列的hvr-l3；和(7)包含seq id no:18的氨基酸序列的lc-fr4。在一些实施方案中，抗体包含：(a)重链可变区，重链可变区包含：(1)包含seq id no:10的氨基酸序列的hc-fr1；(2)包含seq id no:1的氨基酸序列的hvr-h1；(3)包含seq id no:11的氨基酸序列的hc-fr2；(4)包含seq id no:2的氨基酸序列的hvr-h2；(5)包含seq id no:12的氨基酸序列的hc-fr3；(6)包含seq id no:3的氨基酸序列的hvr-h3；和(7)包含seq id no:13的氨基酸序列的hc-fr4；和/或(b)轻链可变区，轻链可变区包含：(1)包含seq id no:14的氨基酸序列的lc-fr1；(2)包含seq id no:4的氨基酸序列的hvr-l1；(3)包含seq id no:15的氨基酸序列的lc-fr2；(4)包含seq idno:5的氨基酸序列的hvr-l2；(5)包含seq id no:17的氨基酸序列的lc-fr3；(6)包含seqid no:6的氨基酸序列的hvr-l3；和(7)包含seq id no:18的氨基酸序列的lc-fr4。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体为igg1抗体。在一些实施方案中，抗体已被工程化以改善抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)活性。在一些实施方案中，抗体在fc区中包含至少一个改善adcc活性的氨基酸取代。在一些实施方案中，抗体的至少一条或两条重链是非岩藻糖基化的。在一些实施方案中，抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体包含选自由fab、fab'-sh、fv、scfv和(fab’)2片段组成的组的抗体片段。

12、在一些实施方案中，抗体包含fc区和与fc区连接的n糖苷连接的碳水化合物链，其中组合物中抗体的少于50％的n糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。在一些实施方案中，组合物中抗体的n糖苷连接的碳水化合物链基本上都不含有岩藻糖残基。在一些实施方案中，抗体包含含有人igg fc区的重链fc区。在一些实施方案中，人igg fc区包含人igg1fc区。在一些实施方案中，人igg1 fc区是非岩藻糖基化的。在一些实施方案中，人igg fc区包含人igg4 fc区。在一些实施方案中，人igg4 fc区包含氨基酸取代s228p，其中氨基酸残基根据如kabat中的eu索引编号。在一些实施方案中，抗体耗竭血液嗜酸性粒细胞和/或抑制肥大细胞活化。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。

13、在另一方面，本公开提供了包括封装根据上述任何实施方案的制剂的制品或试剂盒。在一些实施方案中，容器是玻璃小瓶。在一些实施方案中，制品或试剂盒还包括用于静脉内(例如，通过静脉内输注)或皮下(例如，通过皮下注射)施用制剂的说明书。

14、应了解，本文所述的各种实施方案的一种、一些或全部性质可加以组合以形成本公开的其他实施方案。本公开的这些和其他方面对于本领域技术人员来说将变得显而易见。本公开的这些和其他实施方案通过以下详细说明进一步描述。