用于制备血管化的生物组织的方法

用于制备血管化的生物组织的方法
1.本发明涉及用于制备生物组织的方法，特别是由心肌细胞、肝细胞、肾细胞、神经细胞和/或胰腺细胞制备组织的方法。
本发明应用于例如生物医学中，特别是所谓的组织工程中。
2.众所周知的是，使用生物技术方法复制用于研究目的或用于移植目的的生物组织，所述组织包含大量具有共同功能的已分化的生物细胞。
例如，心肌细胞可以通过从多能干细胞分化而获得，并且通过在培养箱中培养而繁殖。
然而，包含累积的已分化细胞的生物组织的常规复制物(组织产品)具有以下缺点，这造成在组织产品的应用及其成本方面的局限性。
3.首先，天然生物组织不仅包含已分化细胞，还包含血管和细胞外基质。
只有与另外的组织成分相关联，已分化细胞的累积才能提供对天然生物组织的性质的适应性。
因此，生物组织的复制迄今为止仅能够在有限的程度上执行天然组织的功能。
而且，生物组织的常规复制物的尺寸是有限的，因为细胞培养物中的细胞可能无法被最佳地供应营养物和氧气并且死亡。
特别是在贴壁状态下培养的情况下，生物组织的常规复制物往往具有层形式，所述层形式并非最佳地适合于组织的天然空间形式。
当将常规组织产品移植到生物体中时，会发生不期望的免疫应答或者甚至发生排斥反应，因为这些组织产品由于其组成不同于天然组织而被识别为异物。
4.本发明的目的是提供改进的用于制备生物组织的方法，利用该方法避免了常规技术的局限性。
这种用于制备生物组织的方法的特征特别在于制备这样的组织：其性质更好地适应于天然组织的性质，其可以以更大的尺寸制备，其可以以可自由选择的空间形式制备，其特征在于降低的免疫应答，其可以以更低廉的成本生产，和/或其使组织产品的新应用或扩展应用成为可能。
5.所述目的通过具有权利要求1的特征的用于制备生物组织的方法来实现。
根据从属权利要求，可以清楚地看到本发明的优选实施方案和应用。
6.根据本发明的总体方面，上述目的通过用于制备血管化生物组织的方法来实现。
该方法包括以下步骤：由多个互连的支撑聚合物细丝产生网络结构；用蛋白质材料涂覆所述网络结构；使内皮细胞和形成组织的生物细胞在所述经涂覆的网络结构上繁殖(populate)；以及溶解所述网络结构的细丝，从而形成血管化组织。
7.有利地，借助于经涂覆的网络结构，提供了由支撑聚合物细丝形成的单层或多层体积基材。
细丝(其也可称为线或纤维或细长聚合物区段)在空间中形成例如无序分布或规则分布，其中所述细丝在某些点处或在某些区段中彼此接触或彼此间隔开。
由此创建了网络结构的内表面，所述内表面使该网络结构可以被蛋白质材料涂覆，并且随后使血管细胞(例如内皮细胞)和形成组织的生物细胞(任选地添加细胞外基质(ecm))繁殖。
所述细丝优选由多糖(例如，藻酸盐或明胶)制成。
所述网络结构的涂覆包括特别是用蛋白质材料涂覆网络结构内侧的细丝。
所述蛋白质材料有利地促进细胞在细丝上的附着生长。
8.为了使内皮细胞和形成组织的生物细胞在经涂覆的网络结构上繁殖，将所述网络结构与细胞悬浮液一起孵育，以使细胞以贴壁方式附着至细丝，并且培养附着的细胞，优选
地用供应的培养基(营养培养基)来培养附着的细胞。
优选地，首先将内皮细胞引入网络结构中，然后在已经形成内皮细胞的层(多层、单层或亚单层)之后，再引入形成组织的生物细胞。
9.内皮细胞是形成天然组织中血管内侧的已分化细胞。
优选使用想要复制其组织的生物体(例如哺乳动物，特别是人类)的内皮细胞。
形成组织的生物细胞是至少一种细胞类型的已分化细胞，其中想要复制的组织由所述已分化细胞组成。
形成组织的生物细胞的分化优选在所述网络结构上繁殖之前发生。
10.提供了在已经使细胞在网络结构上繁殖之后，再将所述网络结构溶解。
网络结构的溶解优选地包括将细丝经化学转化和/或热转化成液态，并且将转化后的材料从繁殖的细胞复合体中冲洗掉。
通过使网络结构溶解，互连的中空空间保留在该细胞复合体中，所述中空空间的内表面由内皮细胞形成。
发明人已经发现，这些中空空间在几何上以与天然组织中的血管相同的方式分布，并相应地在血管化组织中形成血管，所述血管化组织优选地构成最终的组织产品。
11.优选地，在繁殖完成并且所述网络结构的内部体积被细胞密集地充填之后，使网络结构溶解。
或者，当网络结构的内部体积仅被部分地充填时，可以提供溶解，从而帮助其他血管的生长。
12.使用根据本发明制备的血管化组织有利地实现了以下优点。
13.与使用常规组织产品的情况相比，该血管化组织的性质更好地适应于相应天然组织的性质。
该血管化组织甚至可以与天然组织难以区分。
在将该组织产品移植到活的生物体中时也可相应地降低免疫应答。
14.此外，常规组织产品的尺寸限制被克服，因为组织中的已分化细胞可以通过血管化组织中的血管来得到供应。
所述血管化组织不限于层形式，而是可以以可自由选择的空间形式制备，所述可自由选择的空间形式适合于天然组织或期望的移植物的形式。
15.本发明的方法对血管化组织的成本具有积极影响，与常规组织产品相比，该血管化组织可以以更大的体积和更大的量并以更高的效率来制备。
16.根据本发明制备的血管化组织还提供了组织产品的新应用，特别是在研究和移植医学中的应用，例如在制备与天然组织没有差异或差异可忽略不计的模型组织中的应用。
17.本发明可以使用各种形成组织的细胞。
根据本发明的优选应用，形成组织的细胞包括心肌细胞，并且血管化组织是心肌组织产品。
或者，形成组织的细胞包括肝细胞、肾细胞、神经细胞或胰腺细胞，血管化组织相应地是肝组织产品、肾组织产品、神经组织产品或胰腺组织产品。
或者，血管化组织可以包含多种细胞类型，例如心肌细胞和神经细胞，或者与神经细胞组合的其他细胞。
18.有利地，本发明的各种实施方案是可用的，其中所述网络结构在固体载体基材上产生，或者在不结合至固体载体基材的情况下产生。
19.根据本发明的优选实施方案，网络结构的产生包括将细丝沉积在涂覆有可降解基质材料(例如多糖，特别是葡聚糖)的载体基材上，并且随后从所述载体基材溶解出网络结构。
该网络结构有利地被载体基材所支持。
20.沉积细丝包括布置多个先前制备的(例如挤出的)支撑聚合物细丝，和/或借助于
3d沉积方法以在载体基材上构建细丝的方式沉积所述支撑聚合物。3d沉积方法包括例如
3d打印方法，特别是
3d冷冻打印，其中支撑聚合物细丝在冷冻状态下形成。
21.在细丝沉积之前的制备步骤中，可以用基质材料涂覆所述载体基材。
优选将容器的底部用作载体基材，在随后涂覆细丝和繁殖细胞的步骤中，该容器的底部接收所供应的组分的溶液或悬浮液，并且形成培养室。
例如，所述容器是反应板(例如微量滴定板)的反应孔。
22.所述基质材料形成隔离层。
从载体基材溶解出网络结构包括了使基质材料溶解。
基质材料优选地在其化学溶解性方面不同于细丝的溶解性。
细丝和基质材料特别优选由不同的多糖制备。
因此，有利的是，当从载体基材溶解出网络结构时，细丝最初是被保留的。
23.因此，在本发明的该实施方案中，优选地提供了基质材料和支撑聚合物的两阶段溶解，特别优选地提供了多糖的两阶段溶解，其中首先从载体基材溶解出网络结构，然后在用细胞繁殖之后，再使所述网络结构溶解。
24.根据本发明的特别优选的实施方案，提供了通过用蛋白质材料涂覆网络结构并且使内皮细胞和形成组织的生物细胞在经涂覆的网络结构上繁殖来形成网络结构-细胞复合体，随后将载体基材溶解出网络结构，其中所述网络结构-细胞复合体中的细丝的侧面部分(即，网络结构-细胞复合体的侧表面)接触载体基材，其中随后提供以下步骤：从所述载体基材溶解出网络结构-细胞复合体；以使所述网络结构-细胞复合体中的细丝的侧面部分至少部分地彼此接触的方式折叠所述网络结构-细胞复合体以形成多层物；以及固定所述被折叠的网络结构-细胞复合体，随后溶解所述网络结构。
25.通过在从载体基材溶解出网络结构之前用蛋白质材料涂覆网络结构并且在经涂覆的网络结构上繁殖，载体基材有利地执行了其支持功能，直至细胞被布置在复合体中，其中细丝的布置以及由此随后形成的血管的布置被保留。
通过折叠所述网络结构-细胞复合体以形成多层物，有利地促进了组织产品的空间形式的形成。
26.有利的是，可获得折叠所述网络结构-细胞复合体的不同变通方案，其可以单独地进行或者以组合方式进行。
根据第一变通方案，提供了将网络结构-细胞复合体通过细长保持元件(例如保持线(holding thread)或保持杆(holding rod))以下述方式悬挂：将暴露出细丝侧面部分的所述网络结构-细胞复合体的表面彼此接触。
将网络结构-细胞复合体在细长保持元件处折叠，从而使所述网络结构-细胞复合体的表面被细长保持元件分开的两个部分彼此相靠。
该表面的两个部分有利地彼此粘附，从而形成封闭的细胞复合体，其中所述细长保持元件可以容易地从该封闭的细胞复合体中分离。
27.根据第二变通方案(“折纸”变通方案)，提供了将网络结构-细胞复合体以暴露出细丝的侧面部分的方式放置在折叠基材上，并且使所述折叠基材以这样的方式变形：将暴露出细丝侧面部分的所述网络结构-细胞复合体的表面彼此接触。
折叠基材的变形有利地提供了力效应，在该力效应下，网络结构-细胞复合体的侧表面的部分彼此接触，由此帮助所述网络结构-细胞复合体的各部分的粘附连接。
28.根据第三变通方案，提供了网络结构-细胞复合体以暴露出细丝的侧面部分的方式放置在折叠工具上，并且将所述折叠工具以这样的方式操作：将暴露出细丝侧面部分的所述网络结构-细胞复合体的表面彼此接触。
在这种情况下，也由折叠工具有利地施加力，在该力作用下，细胞复合体稳定在折叠状态。
29.特别优选地，网络结构相对于与所述网络结构的范围垂直的预定参考平面以镜像
对称地形成，其中所述网络结构-细胞复合体的折叠沿着参考线进行。
因此，相同形式的细丝区段在折叠之后彼此接触，从而在溶解之后实现更大的血管直径。
30.根据本发明的替代实施方案，提供了在已经从载体基材溶解出网络结构之后，用蛋白质材料涂覆所述网络结构，并且使内皮细胞和形成组织的生物细胞在经涂覆的网络结构上繁殖。
在这种情况下，可以实现的优点在于促进从多个侧面将蛋白质材料、内皮细胞和形成组织的生物细胞供应到网络结构中。
31.根据本发明的另外的优选实施方案，所述网络结构的产生优选地包括在不结合固体载体基材的情况下细丝的
3d沉积。
所述
3d沉积可以例如在高粘度载体液体或软聚合物中、特别是在基材块中进行，或者在预制的细丝层上进行。
32.术语“3d沉积”通常是指这样的方法：利用该方法，通过构建结合或不结合基材的支撑聚合物，从而由细丝产生三维结构。3d沉积的使用具有特定的优点，即，细丝的分布以及由此在血管化组织中血管的分布可以通过对支撑聚合物的沉积的空间分辨控制来限定。
33.细丝的
3d沉积可以有利地包括支撑聚合物的
3d冷冻打印，其中支撑聚合物的溶液在低于所述支撑聚合物的凝固点的温度下逐层累积并且交联，从而形成具有内部体积的细丝的布置。
34.或者，细丝的
3d沉积可以包括借助套管装置将支撑聚合物挤出到载体材料中。
特别优选地，套管装置包括同轴套管，利用该同轴套管，可以将支撑聚合物和内皮细胞同时引入载体材料中。
35.支撑聚合物优选地包含藻酸盐，其中支撑聚合物使用藻酸盐裂解酶来溶解。
由于藻酸盐的生物相容性以及其适合于无残留的溶解以便在细胞复合体中形成血管，藻酸盐的使用具有特定的优点。
或者，可以使用其他基于糖醛酸的多糖(例如半乳糖醛酸)或者基于蛋白质的支撑聚合物(例如明胶)。
支撑聚合物优选地使用藻酸盐裂解酶、葡聚糖酶和/或果胶酶来溶解。
此外，络合剂(例如edta(乙二胺四乙酸))可以用于溶解所述支撑结构。
36.本发明的特定优点在于：血管化的组织可以以可自由选择的尺寸制备。
可以有利地提供：连接至少两层血管化组织以形成组织块。
37.本发明的方法有利地允许修改用于形成血管化组织的细胞复合体，例如用来改善其供应。
根据本发明的实施方案，优选地提供了：将至少一个灌注管路嵌入到用于产生血管化组织的细胞复合体中、血管化组织中和/或组织块中，其中所述灌注管路由可溶性材料制成，并且被布置成用于供应培养基。
灌注管路允许例如在血管化组织的第一培养阶段增加培养基的供应，以协助血管化组织中的细胞繁殖，其中当内部血管足够厚时，灌注管路可以在血管化组织的后期培养阶段或者在其使用期间被溶解。
38.下文将参照附图描述本发明的进一步细节和优点。
附图示例性地显示：
39.图
1-5：根据本发明实施方案的用于制备血管化组织的方法的特征，
40.图
6-9：根据本发明其他实施方案的用于制备血管化组织的方法的特征，
41.图
10：具有嵌入的灌注管路的血管化组织的制备，以及
42.图
11：呈组织块形式的血管化组织的制备。
43.本发明实施方案的特征将在下文参照例如血管化的心肌细胞组织的制备来描述。
需要强调的是，本发明在实践中的实施不限于利用心肌细胞的应用，还可以利用其他细胞类型，例如肝细胞、肾细胞、神经细胞和/或胰腺细胞。
所使用的内皮细胞和心肌细胞的具体
细胞类型、其制备(例如通过从多能干细胞分化)和培养的细节将不再描述，因为它们本身在现有技术中是已知的。
44.附图借助于放大的截面图来举例说明本发明的实施方案，所述放大的截面图各自显示具有少量细丝或少量血管的区域中的网络结构或血管化组织的单层或双层细节。
在实践中，本发明利用延展的网络结构来实施，所述延展的网络结构可以包含相当多的细丝或血管和/或更多的层或网络结构的空间形式。
45.使用本身已知的来自实验室的生物技术任务或来自工业生产的技术(例如，使用具有供应溶液和/或悬浮液的装置的培养箱)来制备血管化的生物组织。
46.图
1-5显示了本发明的用于制备血管化组织的方法的第一实施方案，其中网络结构的产生以及内皮细胞和心肌细胞在其上的繁殖是在固体载体基材上进行。
47.图
1a和图
1b显示了由多个互连的支撑聚合物(例如藻酸盐)细丝
11产生网络结构
10，以及用蛋白质材料
12(例如纤连蛋白或层粘连蛋白)涂覆网络结构
10。
48.优选地具有平坦表面的固体载体基材
20
例如由pmma或玻璃制成。
载体基材
20
例如由微量滴定板的孔(微孔)的底部形成，并且涂覆有基质材料
21(例如葡聚糖)。
基质材料
21的层(其优选为封闭的)的厚度为例如
10μm。
49.根据图
1a，细丝
11(其在附图中以截面图示出，并且可以在附图的平面以外彼此接触和/或相交)被布置成例如以沉淀的藻酸盐细丝的预制网络的形式，或者以无序分布或以规则分布通过
3d沉积在载体基材
10上。
细丝
11的侧面部分
13接触经涂覆的载体基材
10，并且在细丝
11之间留有间隙
14。
藻酸盐细丝
11的直径优选地选自
50
μm至
500
μm或甚至
500
μm以上的范围内。
间隙
14的尺寸在
100
μm至
500
μm的范围内。
50.根据图
1b，蛋白质材料
12例如从经涂覆的载体基材
20
上的周围溶液中沉积，或者通过在细丝
11和基质材料
21的暴露区域上特意滴加沉积来沉积。
51.然后，根据图2，进行网络结构-细胞复合体4的形成。
为此，首先用第一类型的内皮细胞2以粘附贴壁方式在细丝
11和基质材料
21的暴露区域上繁殖(参见图
2a)。
所述细胞由悬浮液供应，该悬浮液覆盖经涂覆的载体基材
20
和细丝
11。
优选地形成内皮细胞2的封闭层(单层或多层)。
任选地，另外还用第二类型的细胞
2a(例如平滑肌细胞)在细丝
11上和/或细丝
11之间的区域繁殖(参见图
2b)。
通过使用两种或更多种类型的内皮细胞，血管壁的组成可以有利地形成与天然组织类似的组成。
任选地，可以提供内皮细胞
2、2a在供应培养基的情况下在载体基材
20
上以贴壁状态的培养，其中所述内皮细胞
2、2a发生繁殖。
52.然后，将形成组织的细胞
3(例如心肌细胞)设置在内皮细胞
2、2a上(参见图
2c)。
所述心肌细胞同样由悬浮液供应，该悬浮液覆盖了具有内皮细胞
2、2a的经涂覆的载体基材
20
和细丝
11。
形成组织的细胞3形成了封闭层，该封闭层在细丝
11上和细丝
11之间的区域上延伸。
由此产生的网状结构-细胞复合体4的总体厚度为例如
5mm。
53.从载体基材
20
溶解出网络结构-细胞复合体
4。
为此，通过供应能溶解基质材料
21、但不溶解细丝支撑聚合物的溶剂(例如葡聚糖酶)来溶解基质材料
21，以使所述网络结构-细胞复合体4与载体基材
20
分离(参见图
3a)。
54.如图
3a示意性地显示的，网络结构
10优选地相对于与所述网络结构
10的范围垂直的预定参考平面6以镜像对称地形成。
通过在参考平面处折叠网络结构-细胞复合体
4(参见图
3a中的箭头)，将相对于折叠线7处于相同位置且具有相同尺寸的细丝互相匹配(参见图
3b)。
细丝
11最初由于接触载体基材
20
而在侧面呈扁圆形，从这些细丝
11形成在所有侧面上呈圆形且横截面形式适合于待形成的血管的横截面形式的细丝。
在折叠状态下，所述网络结构-细胞复合体4的彼此接触的表面连接在一起，由此固定了网络结构-细胞复合体
4。
55.相对于参考平面6的对称性不是本发明必需的特征。
即使在非对称分布的情况下，由于自组织过程，网络结构-细胞复合体4的折叠导致了与细丝
11接触的分布，其被提供用于随后的血管化。
56.随后，进行网络结构
10的溶解，从而形成血管化组织
1(参见图
3c)。
网络结构
10的溶解例如通过供应藻酸盐裂解酶来进行。
因此，血管化组织1由形成组织的细胞3组成，当细丝溶解之后，在其复合体中保留了中空的空间。
所述中空空间连接在一起，从而使它们在血管化组织1中形成血管
8。
血管8的内壁由内皮细胞
2、2a形成。
57.图4和图5显示了通过悬挂于细长保持元件
30(图
4)、使用折叠基材
40(图
5a)或使用折叠工具
50(图
5)来折叠网状结构-细胞复合体4的方案。
58.细长保持元件
30
是例如保持线，将网络结构-细胞复合体4沿着参考平面6与所述网络结构-细胞复合体4相交的线放置在该保持线上(参见图
4a)。
暴露出细丝
11的侧面部分
13的所述网络结构-细胞复合体4的表面在重力作用下在保持元件
30
的两侧摆动，直至它们接触并通过形成细胞间接触部而彼此连接(参见图
4b)。
然后，可以去除保持元件
30，并且溶解细丝
11，以形成血管化组织
1。
59.折叠基材
40
是具有两个平面翼状部的可折叠载体元件，其可在未折叠的平面状态(由图
5a中的虚线示出)和折叠在一起的状态(由图
5a中的实线示出)之间枢转。
折叠基材
40
例如由弹性回弹的双稳态材料组成，其可借助内部机械应力而在两种状态之间枢转。
借助于折叠基材
40，网络结构-细胞复合体4的两个部分可以以平面方式彼此相靠地放置并且接触。
将网络结构-细胞复合体4以未折叠状态放置在折叠基材
40
上，其中参考平面6和所述网络结构-细胞复合体4相交的线(参见图
3)与折叠基材
40
的两个翼状部之间的枢轴的运行相吻合。
由于转变成折叠在一起的状态(参见箭头)，折叠基材
40
以这样的方式变形：暴露出细丝侧面部分的所述网络结构-细胞复合体4的表面彼此接触，并且通过形成细胞间接触部而连接在一起。
然后，可以去除折叠基材
40，并且溶解细丝，以形成血管化组织。
60.根据图
5b的折叠工具
50
具有与折叠基材
40
类似的功能，因为其可在未折叠的平面状态(由图
5b中的虚线示出)和折叠在一起的状态(由图
5b中的实线示出)之间枢转。
与折叠基材
40
的内部应力不同，折叠工具
50
由至少一个致动器
51操作，以便折叠网络结构-细胞复合体
4。
61.图
6-8显示了根据本发明的用于制备血管化组织的方法的第二实施方案，其中仅有网络结构的产生发生在固体载体基材上。
然后，从载体基材溶解出网络结构，用蛋白质材料涂覆所述网络结构，并且用内皮细胞和心肌细胞在其上繁殖。
62.图
6a显示了如图
1a中所示，由具有相互距离
14的多个互连的支撑聚合物(例如藻酸盐)细丝
11在涂覆有基质材料
21的载体基材
20
上产生网络结构
10。
然后，将网络结构
10从载体基材
20
溶解出来，并且在所有侧面上涂覆蛋白质材料
12(图
6b和图
7a)。
63.在从载体基材
20
溶解出来并涂覆有蛋白质材料
12的网络结构
10上用内皮细胞2繁殖(图
7b)。
为此，将网络结构
10与内皮细胞2的悬浮液在培养箱中一起孵育。
64.通过与心肌细胞悬浮液一起孵育，使心肌细胞3在布置于细丝
11之上和细丝
11之
间的内皮细胞2上繁殖，由此形成网络结构-细胞复合体
4(图
8a)。
然后，使细丝
11的支撑聚合物溶解，由此在网络结构-细胞复合体4的内部形成了血管化组织
1。
65.图9举例说明了根据本发明的用于制备血管化组织的方法的第三实施方案，其中在不结合至固体基材、而是在基材块(例如软的、不完全交联的藻酸盐的基材块)中进行网络结构的产生和用内皮细胞和心肌细胞繁殖。
将藻酸盐形成为足够软的以至于细胞能够在藻酸盐中排列并且同时与其周围环境分离。
然后，从基材块中溶解出网络结构，并溶解细丝的支撑聚合物。
66.根据图
9a，借助于套管，将支撑聚合物(例如藻酸盐或半乳糖醛酸)细丝
11嵌入。
优选使用同轴套管，该同轴套管的内通道供应支撑聚合物、特别是弱交联的藻酸盐和任选的用于细胞极化的细胞外基质(ecm)，并且该同轴套管的外通道供应内皮细胞2以及ecm和任选添加的乙二胺四乙酸(edta)。
将所述同轴套管根据预定程序放置在基材块
22中，并且沿着预定路径移动(例如，撤回)，同时递送含有添加物的支撑聚合物和内皮细胞
2。
然后，通过套管供应含有ecm和任选的edta添加物的心肌细胞3，并置于内皮细胞2上，从而在基质块
22中形成网络结构-细胞复合体
4。
67.在进一步的方法中，通过用藻酸盐裂解酶溶解基材块
22来使网络结构-细胞复合体4与基材块
22分离(图
9b)。
然后，例如用果胶酶溶解细丝
11，从而形成血管化组织1的游离血管
8(图
9c)。
68.图
10举例说明了根据图9的方法的修改，其中在网络结构-细胞复合体4中另外嵌入灌注管路
60，用于额外向细胞供应培养基，特别是当网络结构-细胞复合体4正在基质块
22中培养时。
灌注管路
60
特别是用于在网络结构-细胞复合体4的成熟和组织化期间提供供应，并且它们优选由可降解材料(例如葡聚糖)制成。
例如，透析管可以用作灌注管路
60。
当网络结构-细胞复合体4与基材块
22分离时，灌注管路
60
可以被溶解，例如使用葡聚糖酶溶解。
69.如图
11所示例性地显示的，多个血管化组织1的区段，特别是已经通过根据所述实施方案之一的方法制备的血管化组织1的区段可以连接以形成组织块
9。
所述连接是在添加京尼平的情况下通过相互接触而发生的。
70.对于实施本发明的各种实施方案而言，已经公开于上文说明书、附图和权利要求中的本发明的特征无论单独地还是以组合或亚组合的形式都可以是重要的。