癌症的联合治疗的制作方法

本发明涉及癌症的治疗。具体而言，本发明涉及用于治疗癌症的抑制pd-1、tgfβ和腺苷的化合物的组合。

背景技术：

1、腺苷是多种生理活动的普遍调节剂，特别是在心血管、神经和免疫系统中。腺苷在结构和代谢上与生物活性核苷酸三磷酸腺苷(atp)、二磷酸腺苷(adp)、单磷酸腺苷(amp)和环单磷酸腺苷(camp)以及生化甲基化剂s-腺苷-l-甲硫氨酸(sam)相关，并在结构上与辅酶nad、fad和辅酶a以及rna相关。

2、在生理条件下，内源性腺苷以低浓度(30-300nm)存在于正常组织的胞外空间中(fredholm等,drug dev res 52:274–282(2001))。然而，在代谢应激条件下，包括炎症和癌症，能量消耗增加或缺氧导致胞外腺苷浓度急剧增加(cronstein,b.n.j appl physiol,1994；76(1),5-13；ohta,a.front immunol,2016；7(109),1-11)。胞外腔室中腺苷积累的关键驱动因素是cd39和cd73，这两种酶分别催化三磷酸腺苷(atp)和二磷酸腺苷(adp)降解为单磷酸腺苷(amp)以及amp降解为腺苷。与此一致地，缺乏cd73的小鼠中腺苷浓度降低(grenz,a.等j am soc nephrol,2007；18,833-845)。腺苷水平也可能由于细胞不受控制的损伤而增加，导致腺苷被动渗漏到胞外空间。此外，在发炎组织中，腺苷的增加可能与其从炎症效应细胞(包括活化的多形核细胞)的释放有关(lennon，p.f.等，jj exp med,1998；188(8),1433-1443)。

3、腺苷的调节功能通过腺苷家族的g蛋白偶联受体(gpcr)介导，包括a1、a2a、a2b和a3(fredholm,b.b.等，pharmacol rev,2001；53(4),527-552)。这些腺苷受体亚型根据其对腺苷酸环化酶的影响进行分类。高度腺苷敏感性a1和a3受体(分别为300nm和100nm)通过gpcr的gi亚基抑制腺苷酸环化酶。相反，a2a和a2b腺苷受体对腺苷的亲和力较低(分别为700nm和24μm)，因此在较高腺苷浓度下介导信号传导。a2a以及a2b下游的信号传导通过gpcr的gs亚基介导，并诱导环磷酸腺苷(camp)反应元件结合蛋白(creb)的磷酸化(nemeth,z.h.等，bbrc,2003；312,883-888；gao,z.g.等，biochemical pharmacology,2018；151,201-213)，导致免疫细胞激活受到抑制(penix,l.a.等，j biol chem,1996；271,31964-31972)。重要的是，a2b腺苷受体还可以通过gpcr的gq亚基发出信号，并激活其他促肿瘤发生途径，包括磷脂酶cβ、蛋白激酶c(pkc)和p38 map激酶(schulte,g.,fredholm,b.b.cellularsignalling,2003；15,813-827)。

4、已将a2a腺苷受体认为是腺苷驱动的t细胞、自然杀伤(nk)细胞和骨髓细胞功能抑制的关键受体(cekic,c.,等cancer res,2014；74(24),7250-7259)。a2a可以通过直接抑制免疫细胞功能或通过招募其他免疫调节细胞(包括调节性t细胞(treg))来支持腺苷驱动的免疫抑制。总而言之，这些发现表明，抑制a2a腺苷受体可以保护抗-肿瘤免疫反应免受腺苷驱动的免疫抑制的影响。然而，a2a受体通过腺苷酸环化酶的gs亚基活化与较低亲和力的a2b腺苷受体共享信号传导。因此，a2b受体可以补偿富含腺苷的(adenosine-rich)肿瘤微环境(tme)中的a2a抑制。此外，阻断a2b有望解决腺苷介导的肿瘤促进的gq介导的机制问题，通过减少骨髓细胞和肿瘤细胞产生的血管内皮生长因子(vegf)来减少肿瘤新生血管形成(sorrentino,c.等oncotarget,2015；6(29),27478-27489)。此外，阻断a2b有望支持血管通透性，从而促进白细胞浸润到肿瘤中(eckle,t.等blood,2008；111(4),2024-2035)。此外，a2b的抑制有望防止树突状细胞(dc)的免疫抑制前体的积累(novitskiy,s.v.等blood,2008；112(5),1822-1831)以及促肿瘤性m2巨噬细胞的极化(csoka,b.等，faseb,2012；26(1),376-386)。总而言之，除了抑制a2a腺苷受体之外，抑制a2b腺苷受体有望对腺苷驱动的肿瘤促进提供更强力保护。

5、阻断程序性死亡1(pd-1)与其配体pd-l1相互作用的单克隆抗体，例如抗pd-l1抗体阿维鲁单抗(avelumab)，可以增强针对癌症的免疫反应，是最有前途的免疫检查点拮抗剂之一。然而，虽然令人信服的临床疗效结果使得数种新的抗pd(l)-1药物获批，但是并非所有患者都能对当前的免疫检查点拮抗剂产生持久的临床反应。事实上，在临床试验中，患有某些肿瘤类型(包括前列腺癌、结直肠癌和胰腺癌)的患者对抗pd(l)-1单一疗法几乎没有反应。与其他检查点拮抗剂的联合治疗可能是在无反应患者中引发协同抗肿瘤活性或在部分反应者中增强抗肿瘤免疫反应的必要策略。在临床前小鼠模型中，相对于单一疗法，腺苷a2a受体和pd-1的共同抑制在增强肿瘤生长抑制方面表现出显著的协同作用(beavis,p.a.等cancer immunol res,2015；3(5),506-517；willingham,s.b.,等cancer immunolres,2018；6(10),1136-1149)。

6、wo 2015/118175记载了一种双功能融合蛋白，由肿瘤生长因子β受体ii型(tgfβrii)的胞外结构域与人igg1抗体融合构成，其中，tgfβrii胞外结构域起tgf-β“阱”的作用，人igg1抗体阻抑pd-l1。具体地，该蛋白为异四聚体，由抗pd-l1抗体的两条免疫球蛋白轻链和两条重链构成，两条重链各自包含抗pd-l1抗体重链和人tgfβrii胞外域，两者通过柔性甘氨酸-丝氨酸接头基因融合(见图1)。该融合分子旨在同时靶向pd-l1途径和tgfβ途径，以抵消肿瘤微环境中的免疫抑制。

7、仍然需要开发新型治疗选择用于治疗癌症。此外，还需要比现有疗法更大功效的疗法。

技术实现思路

1、本发明源于发现，通过组合抑制pd-1、tgfβ和腺苷信号传导途径的化合物，可以在癌症治疗中实现治疗益处。这种治疗益处在治疗具有高腺苷介导信号传导的癌症时尤其明显，例如cd73阳性或富含腺苷的癌症。

2、因此，第一方面，本公开提供用于治疗对象中癌症的方法、用于抑制患有恶性肿瘤的对象中肿瘤生长或进展、用于抑制对象中恶性细胞转移、用于降低对象中转移发展和/或转移生长的风险、或用于在有恶性细胞的对象中诱导肿瘤消退的pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂，例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂，其中，所述使用包括给予对象所述众化合物。

3、本公开还提供pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂，例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂，在制备用于治疗对象中癌症的方法、用于抑制患有恶性肿瘤的对象中肿瘤生长或进展、用于抑制对象中恶性细胞转移、用于降低对象中转移发展和/或转移生长的风险、或用于在有恶性细胞的对象中诱导肿瘤消退的药物中的用途。

4、另一方面，本公开提供治疗对象中癌症的方法、抑制患有恶性肿瘤的对象中肿瘤生长或进展的方法、抑制对象中恶性细胞转移的方法、降低对象中转移发展和/或转移生长风险的方法、或在有恶性细胞的对象中诱导肿瘤消退的方法，其中，所述方法包括给予对象pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂，例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂。

5、另一方面，本公开涉及推广用pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂，例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂进行治疗的方法，该方法包括向目标受众推介例如根据采自患癌对象的样品(例如肿瘤样品)中的pd-l1表达而用所述组合治疗所述对象的应用。

6、本文还提供一种药物组合物，包含pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂，例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂，以及至少一种药学上可接受的赋形剂或佐剂。在一个实施方式中，所述药物组合物中，pd-1抑制剂和tgfβ抑制剂是融合的。pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂以单一或各自分开的单位剂量形式提供。

7、另一方面，本公开涉及试剂盒，其包含pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂(例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂)，以及包装插件，所述包装插件包含用所述化合物治疗或延迟对象癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及试剂盒，其包含pd-1抑制剂和包装插件，所述包装插件包含将pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂和腺苷抑制剂(例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂)用于治疗或延迟对象癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及试剂盒，其包含tgfβ抑制剂和包装插件，所述包装插件包含将tgfβ抑制剂、pd-1抑制剂和腺苷抑制剂(例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂)用于治疗或延迟对象癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及试剂盒，其包含腺苷抑制剂(例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂)和包装插件，所述包装插件包含腺苷抑制剂、pd-1抑制剂、tgfβ抑制剂用于治疗或延迟对象癌症进展的说明。另一方面，本发明涉及试剂盒，其包含抗pd(l)1:tgfβrii融合蛋白和包装插件，所述包装插件包含将抗pd(l)1:tgfβrii融合蛋白和腺苷抑制剂(例如腺苷a2a和/或a2b受体抑制剂)用于治疗或延迟对象癌症进展的说明。试剂盒的化合物可包含在一个或多个容器中。所述说明可以指明所述药物旨在用于治疗患有免疫组化(ihc)检测测定为pd-l1表达阳性癌症的对象。

8、在一些实施方式中，pd-1抑制剂与tgfβ抑制剂融合。在一个实施方式中，融合分子是抗pd(l)1:tgfβrii融合蛋白。在一个实施方式中，融合分子是抗pd-l1:tgfβrii融合蛋白。在一个实施方式中，所述抗pd-l1:tgfβrii融合蛋白的氨基酸序列对应于必特芙普α(bintrafusp alfa)的氨基酸序列。