一种用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液及制备方法与流程

1.本发明涉及中药制剂制备技术领域，具体涉及一种用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液及制备方法。


背景技术：

2.原清肝健脾口服液处方是：山楂60g，茵陈（滨蒿）40g，泽泻40g，车前草30g，虎杖30g，丹参40g，大黄18g，决明子30g，黄芪40g，柴胡30g，制何首乌30g，制成1000ml。缺点是：1、山楂药材大多含有果核，果核为无效成分，占比大，数量不固定，造成投料数量不稳定，批与批之间存在差异。2、处方中大黄、虎杖、决明子、制何首乌中均含有葸菎类物质，泻下力强。不利于体虚者服用，不利于长期服用。
3.在制备方法上：以上十一味，山楂、丹参酌予碎断，用50%乙醇加热回流提取三次，第一次加5倍量醇，回流2小时，第二次加3倍量醇，回流1.5小时，第三次加3倍量醇，回流1.5小时，分次滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15（50℃），备用。药楂与茵陈等其余九味加水煎煮三次，第一次加8倍量水，煎煮2小时，第二次加5倍量水，煎煮1.5小时，第三次加5倍量水，煎煮1.5小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.15（50℃），与上述药液合并，在搅拌下加入3倍量乙醇，静置12小时，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10（50℃），加入炼蜜300g，苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，分装，灭菌，即得。其缺点是：1、山楂、丹参酌予碎断，用50%乙醇加热回流提取。丹参中的脂溶性有效成分不能完全提取出来，如丹参酮。
4.2、山楂、丹参酌予碎断，用50%乙醇加热回流提取三次，第一次加5倍量醇，第二次加3倍量醇，第三次加3倍量醇。加溶媒量少，不能充分浸渍药材，煎煮不充分。
5.3、山楂、丹参药楂与茵陈等其余九味加水煎煮三次，第一次加8倍量水，第二次加5倍量水，第三次加5倍量水。加溶媒量少，不能充分浸渍药材，煎煮不充分。
6.4、药液合并，在搅拌下加入3倍量乙醇，静置12小时，静置温度不明确。冬季和夏季存在明显差别。主要表现在：冬季沉淀致密且与药液分层明显，夏季沉淀轻浮，与药液之间有较多的混浊液体，分层不明显。
7.5、产品放置一段时间后，会出现絮状物及沉淀。
8.此外，中国专利cn202011457706.2（我们早期的工作）公开了一种用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液及制备方法，一定程度上解决了原处方中的上述问题，但解决得不够彻底，并且与旧处方相比，进一步降低血脂、gpt、胆固醇等的效果并不显著。


技术实现要素：

9.为了进一步解决上述问题，使得新处方不仅在工艺上有所创新，也要在实际临床疗效上与旧处方具备显著差异，我们进行了进一步研发，本发明提供一种进一步改良后的处方，在疗效方面取得了比较大的进步，具体方案如下：一种用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液，包括以下原料药的提取物：焦山
楂3-7份，茵陈（滨蒿）2-5份，泽泻2-5份，车前草1-4份，虎杖1-4份，丹参2-5份，熟大黄1-2份，决明子1-4份，黄芪2-5份，柴胡1-4份，制何首乌1-4份、杨梅3-5份、当归1-3份。
10.优选地，所述用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液，还包括以下原料药的提取物：金荞麦2-4份、槐花1-3份。
11.本发明还提供上述用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液的制备方法，包括以下步骤：s1、将当归、杨梅用乙醇水溶液浸提，得到提取液1；s2、焦山楂、丹参赋予碎断，用乙醇水溶液浸提，得到提取液2；s3、其余组分混合加水煎煮，得到提取液3；s4、合并提取液1、2、3，加入乙醇，静置后滤过，回收乙醇；s5、s4所得产物加入纯化水，静置后分离液体；s6、s5所得产物加入添加物，混匀，分装，灭菌，得到用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液。
12.优选地，s1所述乙醇水溶液，为30-50%vol的乙醇水溶液。
13.优选地，s1所述乙醇水溶液浸提，每次乙醇水溶液用量为原料药质量的10-15倍，浸提温度为50-60℃，浸提2次，每次1.5-2h，合并过滤提取液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.10。
14.优选地，s2所述乙醇水溶液，为50-95%vol的乙醇水溶液。
15.优选地，s2所述乙醇水溶液浸提，每次乙醇水溶液用量为原料药质量的8-10倍，浸提3次，第一次浸提采用50%vol的乙醇水溶液，浸提温度为50-60℃；第二次和第三次浸提采用95%vol的乙醇水溶液，浸提温度为98-100℃，每次浸提1.5-2h，合并过滤提取液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.10。
16.优选地，s3所述煎煮，每次加水量为原料药质量的8-10倍，温度为98-100℃，煎煮3次，每次1-1.5h，合并过滤提取液，浓缩至相对密度1.10。
17.优选地，当处方中包括金荞麦和槐花时，处理后的金荞麦和槐花在步骤s3与其余组分共同混合煎煮。
18.优选地，所述处理后的槐花为干制粉碎后的槐花，干制方法包括烘干；所述处理后的金荞麦为经水浸泡2-3h后的金荞麦，浸泡温度为常温，水用量为没过金荞麦。
19.优选地，s4所述加入乙醇，加入量为原体积的3倍体积，所述乙醇为无水乙醇，静置时间为10-12h，静置温度为0-4℃，回收乙醇后浓缩至相对密度1.10。
20.优选地，s5所述加入纯化水，加入量为原体积的2倍体积，静置时间为10-12h，静置温度为0-4℃，所述分离液体包括离心后取上清。
21.优选地，s6所述加入添加物包括加入炼蜜和苯甲酸钠与水。
22.优选地，s6所述炼蜜与苯甲酸钠的加入量为每1000ml口服液加入炼蜜300g、苯甲酸钠3g。
23.优选地，s6所述加入水，每20-50g丹参原料药所得产物加入水至总量1000ml。
24.有益效果本发明的有益效果在于：本发明采用特定的组合药，改变了原有处方，在旧处方的基础上添加了杨梅、当
归、金荞麦、槐花，进一步提升了口服液对血脂、gpt、胆固醇等的降低效果；本发明进一步改进了制备方法，提高了提取效率。
具体实施方式
25.以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
26.除非特别指出，以下实施例和对比例为平行试验，采用同样的处理步骤和参数。
27.实施例1一种用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液，包括以下原料药的提取物：焦山楂60g，茵陈（滨蒿）40g，泽泻40g，车前草30g，虎杖30g，丹参40g，熟大黄18g，决明子30g，黄芪40g，柴胡30g，制何首乌30g，杨梅40g，当归20g。
28.制备方法：s1、将当归、杨梅用乙醇水溶液浸提，得到提取液1；s2、焦山楂、丹参赋予碎断，用乙醇水溶液浸提，得到提取液2；s3、其余组分混合加水煎煮，得到提取液3；s4、合并提取液1、2、3，加入乙醇，静置后滤过，回收乙醇；s5、s4所得产物加入纯化水，静置后分离液体；s6、s5所得产物加入添加物，混匀，分装，灭菌，得到用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液。
29.s1所述乙醇水溶液，为50%vol的乙醇水溶液。
30.s1所述乙醇水溶液浸提，每次乙醇水溶液用量为原料药质量的10倍，浸提温度为60℃，浸提2次，每次1.5h，合并过滤提取液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.10。
31.s2所述乙醇水溶液浸提，每次乙醇水溶液用量为原料药质量的10倍，浸提3次，第一次浸提采用50%vol的乙醇水溶液，浸提温度为60℃；第二次和第三次浸提采用95%vol的乙醇水溶液，浸提温度为98-100℃，每次浸提1.5h，合并过滤提取液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.10。
32.s3所述煎煮，每次加水量为原料药质量的10倍，温度为98-100℃，煎煮3次，每次1h，合并过滤提取液，浓缩至相对密度1.10。
33.s4所述加入乙醇，加入量为原体积的3倍体积，所述乙醇为无水乙醇，静置时间为12h，静置温度为4℃，回收乙醇后浓缩至相对密度1.10。
34.s5所述加入纯化水，加入量为原体积的2倍体积，静置时间为12h，静置温度为4℃，所述分离液体包括离心后取上清。
35.s6所述加入添加物包括加入炼蜜和苯甲酸钠与水。
36.s6所述炼蜜与苯甲酸钠的加入量为每1000ml口服液加入炼蜜300g、苯甲酸钠3g。
37.s6加入水至1000ml。
38.实施例2一种用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液，包括以下原料药的提取物：焦山
楂60g，茵陈（滨蒿）40g，泽泻40g，车前草30g，虎杖30g，丹参40g，熟大黄18g，决明子30g，黄芪40g，柴胡30g，制何首乌30g，杨梅40g，当归20g，金荞麦30g，槐花（干制后）20g。
39.制备方法：s1、将当归、杨梅用乙醇水溶液浸提，得到提取液1；s2、焦山楂、丹参赋予碎断，用乙醇水溶液浸提，得到提取液2；s3、其余组分混合加水煎煮，得到提取液3；s4、合并提取液1、2、3，加入乙醇，静置后滤过，回收乙醇；s5、s4所得产物加入纯化水，静置后分离液体；s6、s5所得产物加入添加物，混匀，分装，灭菌，得到用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液。
40.s1所述乙醇水溶液，为50%vol的乙醇水溶液。
41.s1所述乙醇水溶液浸提，每次乙醇水溶液用量为原料药质量的10倍，浸提温度为60℃，浸提2次，每次1.5h，合并过滤提取液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.10。
42.s2所述乙醇水溶液浸提，每次乙醇水溶液用量为原料药质量的10倍，浸提3次，第一次浸提采用50%vol的乙醇水溶液，浸提温度为60℃；第二次和第三次浸提采用95%vol的乙醇水溶液，浸提温度为98-100℃，每次浸提1.5h，合并过滤提取液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.10。
43.s3所述煎煮，每次加水量为原料药质量的10倍，温度为98-100℃，煎煮3次，每次1h，合并过滤提取液，浓缩至相对密度1.10。
44.所述槐花和金荞麦经处理后使用：槐花干制粉碎，干制方法包括烘干；金荞麦经水浸泡3h，浸泡温度为常温，水用量为没过金荞麦。
45.s4所述加入乙醇，加入量为原体积的3倍体积，所述乙醇为无水乙醇，静置时间为12h，静置温度为4℃，回收乙醇后浓缩至相对密度1.10。
46.s5所述加入纯化水，加入量为原体积的2倍体积，静置时间为12h，静置温度为4℃，所述分离液体包括离心后取上清。
47.s6所述加入添加物包括加入炼蜜和苯甲酸钠与水。
48.s6所述炼蜜与苯甲酸钠的加入量为每1000ml口服液加入炼蜜300g、苯甲酸钠3g。
49.s6加入水至1000ml。
50.对比例1（旧处方旧工艺）清肝健脾口服液：包括：山楂60g，茵陈（滨蒿）40g，泽泻40g，车前草30g，虎杖30g，丹参40g，大黄18g，决明子30g，黄芪40g，柴胡30g，制何首乌30g，制成1000ml。
51.制备方法：以上十一味，山楂、丹参酌予碎断，用50%乙醇加热回流提取三次，第一次加5倍量醇，回流2小时，第二次加3倍量醇，回流1.5小时，第三次加3倍量醇，回流1.5小时，分次滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15（50℃），备用。药楂与茵陈等其余九味加水煎煮三次，第一次加8倍量水，煎煮2小时，第二次加5倍量水，煎煮1.5小时，第三次加5倍量水，煎煮1.5小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.15（50℃），与上述药液合并，在搅拌下加入3倍量乙醇，静置12小时，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10（50℃），加入炼蜜300g，苯甲酸钠3g，加水至1000ml。
52.对比例2（中国专利cn202011457706.2）一种用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液制备方法，其步骤如下：
①
以上十一味，焦山楂、丹参酌予碎断，用体积分数95%乙醇加热回流提取三次。
53.②
第一次加10倍量95%乙醇，回流2小时，第二次加8倍量95%乙醇，回流1.5小时，第三次加8倍量95%乙醇，回流1小时，分次滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10，温度70℃，备用。
54.③
药楂与茵陈等其余九味加水煎煮三次，第一次加10倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮1.5小时，第三次加8倍量水，煎煮1小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10，温度70℃。
55.④
与上述药液合并，在搅拌下加入3倍量乙醇，静置12时，温度0-10℃，滤过，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10，温度50℃。
56.⑤
加入2倍量纯化水，静置12小时，温度0-10℃，离心，得滤液。
57.⑥
滤液加入炼蜜300g，苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，分装，灭菌，即得。
58.选取相同批次检验合格的药材，分别实施例1、2对比例1、2制备口服液，并按以下方法验证所得产品的性质和效果：一、有效成分检验1、游离蒽醌含量检验照《中国药典》采用高效液相色谱法（通则0512）测定。检测芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量。
59.仪器：waters高效液相色谱仪，型号：e2695/2489。紫外检测器。电子分析天平，型号：bs124s。
60.电子分析天平，型号：ae240。6孔电热恒温水浴锅，型号：dzkw-s-6。
61.谱条件与系统适用性试验色谱柱：agilenttc-c18，4.6mm
×
250mm，5μm。
62.流动相：甲醇（级别：hplc。来源：赛默飞世尔科技有限公司）-0.1%磷酸（级别：hplc。来源：山东西亚化学工业有限公司）溶液（85:15体积比），检测波长：254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。
63.对照品溶液的制备精密称取芦荟大黄素对照品（批号：110795-201710，来源：中国食品药品检定研究院）、大黄酸对照品（批号：110757-201607，来源：中国食品药品检定研究院）、大黄素对照品（批号：110756-201913，来源：中国食品药品检定研究院）、大黄酚对照品（批号：110796-201922，来源：中国食品药品检定研究院）、大黄素甲醚对照品（批号：110758-201817，来源：中国食品药品检定研究院）适量，加甲醇（批号：170227，级别：分析来源：天津市康科德科技有限公司）分别制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各80μg，大黄素甲醚40μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得（每1ml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各l6μg，含大黄素甲醚8μg）。
64.供试品溶液的制备取待测样本20ml，蒸干，加甲醇25ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。
65.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
66.含游离蒽醌以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量见表1。
67.表1实验证明，本发明游离蒽醌含量明显高于旧处方（对比例1）并高于对比例2。
68.2、丹参酮含量检验丹参酮类照高效液相色谱法(通则0512)测定。
69.色谱条件与系统适用性试验仪器：waters高效液相色谱仪，型号：e2695/2489。电子分析天平，型号：bs124s。电子分析天平，型号：ae240。数控超声波清洗器，型号：kq-250de。
70.色谱柱：agilenttc-c184.6mm
×
250mm5μm。
71.流动相a：乙腈（级别：hplc。来源：赛默飞世尔科技有限公司）。
72.流动相b：0.02%磷酸溶液（级别：hplc。来源：山东西亚化学工业有限公司）。
73.进行梯度洗脱的参数见表2。
74.表2柱温：20℃。检测波长：270nm。理论板数按丹参酮ⅱa峰计算应不低于60000。
75.对照品溶液的制备取丹参酮ⅱa对照品（来源：中国食品药品检定研究院）适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇（批号：170227。级别：分析。来源：天津市康科德科技有限公司）制成每1ml含20μg的溶液，即得。
76.供试品溶液的制备
取本品10ml，蒸干，加甲醇50ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。
77.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。以丹参酮ⅱa对照品为参照，以其相应的峰为s峰，计算隐丹参酮、丹参酮ⅰ的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的
±
5%范围之内。相对保留时间及校正因子见表3。
78.表3以丹参酮ⅱa的峰面积为对照，分别乘以校正因子，计算隐丹参酮、丹参酮ⅰ、丹参酮ⅱa的含量。
79.以含丹参酮ⅱa、隐丹参酮和丹参酮i的总量计，见表4。
80.表4新工艺中丹参酮含量约为原处方（对比例1）的5倍以上，是对比例2的1.5倍以上。
81.二、效果检验观察清肝健脾口服液旧处方、对比例2新工艺、本发明新处方对乙醇肝损伤以及急性高脂模型动物的影响。
82.实验材料与方法试验动物：小白鼠，体重18-22g。
83.药物：实施例1、2对比例1、2所得口服液，成药规格为:10ml/支，用时供灌胃给药，对照组给同体积的蒸馏水。
84.实验结果一、对乙醇肝损伤的影响各组样本对乙醇中毒小鼠肝脏中mda、血清中cpt、血脂、胆固醇、三油酸甘油酯含
量的影响（`x
±
sd）见表5。
85.表5注：与空白对照组比*p《0.05**p《0.01***p《0.001。
86.与模型组比δp《0.05δδp《0.01δδδp《0.001（以下各表均同）。
87.清肝健脾口服液对乙醇中毒小鼠肝脏的影响见表6。
88.表6由表5、表6结果可见，本发明新处方可明显降低gpt、血脂、胆固醇、三油酸甘油酯含量，使肝脏中mda含量亦明显降低，p＜0.001；本发明提供的新处方口服液能明显减轻由于酒精中毒所造成的肝损伤。
89.二、对急性高脂模型动物的影响实施例及对比例对急性高脂小鼠肝糖原和血清中三油酸甘油酯含量的影响（`x
±
sd）见表7。
90.表7
由表7结果可见，本发明提供的新处方能明显增加肝脏中糖原含量，使血清中三油酸甘油酯含量有降低趋势，其效果显著优于旧处方以及对比例2提供的新工艺。
91.由于肝炎病毒在肝细胞内复制，使肝细胞内的超微结构尤其是线粒体受损伤，导致脂类在肝内代谢发生紊乱而积累，形成肝炎后脂肪肝，另外由于乙醇的代谢造成能量的浪费，甘油三酯沉积，蛋白质合成减少，并增加了脂质过氧化，进而造成肝损伤，最直接的表现即为脂肪肝，我们的实验结果表明，由乙醇造成的肝损伤后，肝脏中总酯和mda明显升高，血清中gpt、血脂、胆固醇、三油酸甘油酯均高于正常组，经灌胃实施例及对比例制备的口服液后，本发明提供的新处方口服液能明显降低肝脏中总酯和mda含量，血清中gpt和血脂、胆固醇、三油酸甘油酯也显著降低，表现出了明显的降脂、抗氧化和恢复肝功的作用，其均显著优于对比例1、2。并且，实施例2效果优于实施例1。经乙醇中毒后，若出现肝脂变，则表现为肝细胞气球样变，小坏死灶并伴有炎细胞浸润。上述实验结果证明，乙醇中毒后小鼠肝脏确出现空泡状变性，炎细胞浸润和坏死灶，说明出现脂肪肝症状，而给动物灌服本发明提供的新处方口服液后，上述病变程度减轻，表明清肝健脾口服液可使肝脂变恢复或消失。同时对于急性高脂模型动物，本发明提供的口服液可明显增加其肝脏中糖原含量，积蓄能量，在治愈病变的同时，亦发挥其保护肝脏的作用。经实施例1与对比例1、2对比，本发明的上述效果均优于对比例1、2，证明本发明在处方中加入杨梅与当归能够显著提高药效，经实施例2与实施例1对比，实施例2的各项参数又明显优于实施例1，证明本发明在处方中新加入的槐花和金荞麦能够进一步提升效果。而在既往的任何处方中，并未见到这四种组分能够对上述指标有改善作用的报道。
92.综上所述，本发明提供的用于治疗脂肪肝和酒精性肝损伤的口服液在用于肝炎后脂肪肝和长期酗酒形成的脂肪肝病变，起到良好的治疗及保护作用。
93.以上对本发明优选的具体实施方式和实施例作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式和实施例，在本领域技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明构思的前提下作出各种变化。