一种粒径可调的聚乙二醇修饰的脂质纳米盘的制备方法及其应用

本发明属于新颖制剂领域，涉及一种脂质载体，具体涉及一种粒径可调的聚乙二醇修饰的脂质纳米盘的制备方法及其应用。

背景技术：

1、脂质纳米载体是以磷脂、胆固醇等为主要成分的纳米载体，由于磷脂具有两亲性结构脂质纳米载体既可以装载亲水性药物也可以装载疏水性药物[expert opin drugdeliv.2019nov；16(11):1205-1226.]。最常见的脂质纳米载体是具有磷脂双分子层结构的脂质体，由于脂质体制备简单易于工业化生产，目前已有多种脂质体制剂上市，特别是在肿瘤治疗领域，脂质体解决了一些难溶性药物的递送困难，提高了药物的递送效率和生物利用度[pharm res.2016oct；33(10):2373-87.]。

2、目前上市的脂质体制剂大多为多室脂质体，这类脂质体通过增加脂质双分子层结构增强对疏水性药物的装载效率，但与此同时脂质体粒径也明显在增加，有研究表明在用于抗肿瘤药物递送过程中，小粒径纳米载体具有更好的被动靶向作用和肿瘤深层渗透作用，多室脂质体的粒径增大会降低药物的靶向效率，影响药物在肿瘤部位的分布[adv drugdeliv rev.2021sep；176:113851.]。此外，脂质体多采用聚乙二醇修饰，从而降低药物在血液循环过程中被网状内皮细胞吞噬，增强血液循环时间，延长半衰期，但聚乙二醇修饰也会降低细胞对脂质体的摄取，影响了药物的入胞效率[pharmaceutics.2020jun 10；12(6):533.]。

3、同样为磷脂双分子层结构的脂质纳米盘通过改变纳米载体形状，增强了药物的入胞能力，并且通过在盘状表面修饰聚乙二醇降低对纳米盘入胞的影响[biotechnolj.2012jun；7(6):762-7.]。目前脂质纳米盘主要是通过调节长链脂质和短链脂质的比例，改变脂质类型实现不同需求纳米盘的制备[small-angle neutron scattering.biophysj.2002may；82(5):2487-98.]。但由于纳米盘中两种脂质的比例、浓度和脂质药物摩尔比均影响脂质纳米盘的粒径大小和装载效率，且为实现聚乙二醇修饰而引入的长链脂质的比例会影响脂质纳米盘的形成，导致聚乙二醇修饰的脂质纳米盘制备过程中粒径不宜调控且稳定性差，容易出现药物渗漏。

4、如何开发一种粒径可调、稳定性好的peg修饰的脂质纳米盘，是一项具有挑战性的工作。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种粒径可调的聚乙二醇修饰的脂质纳米盘的制备方法及其应用。

2、本发明创造性的提出了一种改良的聚乙二醇修饰的脂质纳米盘的制备方法，通过调控长链脂质和短链脂质的比例及浓度，即可实现调节脂质纳米盘大小的目的，得到粒径可调的脂质纳米盘。当长链脂质和短链脂质的比例增加时，粒径逐渐增加；比例不变时，随浓度增加粒径先增加后减小；且在一定比例和浓度下7天稳定性良好。

3、本发明所采取的技术方案是：

4、本发明的第一个方面，提供：一种粒径可调的聚乙二醇修饰的脂质纳米盘的制备方法，包括如下步骤：

5、s1)制备脂质溶液：将二棕榈酰磷脂酰胆碱、二己酰基磷脂酰胆碱和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇溶于有机溶剂中，得到脂质溶液，其中：二棕榈酰磷脂酰胆碱：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇：二己酰基磷脂酰胆碱的摩尔比(6.3～7.2)：(0.7～0.8)：1；

6、s2)将脂质溶液中的有机溶剂通过减压旋转蒸发除去，得到脂质薄膜；

7、s3)在脂质薄膜中加入去离子水，水化薄膜，得水化液，所述水化液中，总磷脂的浓度为5～20％；

8、s4)对水化液进行超声处理，分离得到脂质盘。

9、述长链磷脂包括dppc和dspe-peg 2000，短链磷脂是指dhpc。

10、优选地，所述长链磷脂与短链磷脂的摩尔比(q)为3～4。

11、更优选地，所述长链磷脂与短链磷脂的摩尔比(q)为3～3.5。

12、再优选地，所述长链磷脂与短链磷脂的摩尔比(q)为3.5。

13、实验数据显示，随着二棕榈酰磷脂酰胆碱：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇：二己酰基磷脂酰胆碱的摩尔比的增大，脂质纳米盘粒径有所增大；且随着总脂质浓度的增加，纳米盘粒径有所增大，当增加到10％时，纳米盘粒径达到最大，随后逐渐减小。

14、脂质浓度为水化后脂质总浓度。

15、优选地，所述脂质浓度为20％～5％。

16、更优选地，所述脂质浓度为10％～5％。

17、再优选地，所述脂质浓度为5％。

18、在一些制备方法的实例中，减压旋转蒸发的温度为42～47℃。

19、在一些制备方法的实例中，减压旋转蒸发的转速为120rpm～150rpm。

20、在一些制备方法的实例中，减压旋转蒸发的真空度为100mbar～450mbar。

21、在一些制备方法的实例中，所述的减压旋转蒸发真空度为100mbar～450mbar，水温为42～47℃，转速为120rpm～150rpm，减压旋转蒸发时间为30分钟～80分钟。

22、在一些制备方法的实例中，水化薄膜时满足如下至少一种条件：

23、水温为42～47℃；

24、转速为120rpm～150rpm；

25、时间为20分钟～50分钟。

26、在一些制备方法的实例中，所述的水化薄膜时水温为42～47℃，转速为120rpm～150rpm，时间为20分钟～50分钟。

27、在一些制备方法的实例中，水浴超声的功率为150w～600w。

28、在一些制备方法的实例中，水浴超声功率为150w～600w，超声时间为1～3分钟。探头超声功率为50w～150w，超声时间为1～3分钟。

29、在一些制备方法的实例中，所述有机溶剂选自氯仿、甲醇。

30、在一些制备方法的实例中，所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。

31、以上技术特征在不冲突的情况下，可以任意组合。

32、由上述任一所述方法制备得到的聚乙二醇修饰的脂质纳米盘粒径为10～100nm。

33、本发明的第二个方面，提供：本发明第一个方面所述制备方法制备得到的脂质纳米盘作为疏水药物载体的应用。

34、本发明制备的脂质纳米盘可用于装载疏水性的小分子药物，且载药量高。载药脂质纳米盘的制备方法，是向上述脂质溶液中加入药物溶液，通过调节药物与脂质的摩尔比，得到稳定的载药脂质纳米盘。所述制剂可用于各种疏水性小分子药物的递送，在肿瘤治疗领域有很高的实用价值和发展前景。

35、在一些应用的实例中，所述疏水药物的载药量为85％-99％。

36、在一些应用的实例中，所述疏水药物选自多柔比星、紫杉醇、多西他赛等。

37、本发明的有益效果是：

38、本发明一些实例的制备方法，可以通过调控长链脂质和短链脂质的比例及浓度精准调节脂质纳米盘的粒径大小，该制备方法步骤简单，易于操作，且所用材料均为生物相容性材料，安全性好，制备得到的脂质纳米盘粒径均一，稳定性好。

39、本发明一些实例的制备方法，可以制备粒径在20-200nm的脂质纳米盘，其粒径较小，可在肿瘤组织深层渗透，提高了脂质纳米在抗肿瘤药物递送领域的应用价值。

40、本发明一些实例的制备方法，制备得到的脂质纳米盘更便于室温下的制备和保存，且制备方法简单，更适合工业化生产。