一种复方制剂及其应用的制作方法

本发明属于生物技术药物领域，具体涉及一种复方制剂及其应用。

背景技术：

1、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)被认为是在生理和病理血管生成中最为关键的因子。vegf除了是血管生成和脉管生成中的血管生成因子，vegf还是多向性的生长因子，在内皮细胞存活、血管渗透性和血管舒张、单核细胞趋化性和钙流入中表现出多种生物效应，例如有报道称vegf对视网膜色素内皮细胞和神经膜细胞有促进细胞分裂效应。大量数据显示vegf在涉及病理性血管生成的疾病发展中起到关键作用，vegf mrna在大部分人类肿瘤中过表达，vegf在房水中的浓度与在患有糖尿病或其它缺血性视网膜疾病的患者中发现的血管活性增生高度相关，尤其是在年龄相关黄斑病变(amd)患者中脉络丛新血管形成膜中更甚。vegf的过表达不一定是湿性amd的关键因子，但是无论是在实验模型还是在湿性amd的病理性血管生成中，都发现存在高水平的vegf表达。

2、有相当数量的文献报道，通过中和vegf，血管新生和血管渗漏可以得到抑制。也有很多文献报道，抑制vegf可以治疗多种肿瘤。所以抗vegf抗体或vegf抑制物是治疗实体瘤和多种眼内新生血管病症和其他与vegf过表达相关疾病的有效候选物。

3、然而，抗体作为蛋白质，比传统的无机和有机药物更加复杂。抗体制剂在保藏过程中容易存在化学不稳定性(如脱酰胺化、外消旋化、水解、氧化、β消除或二硫键交换等等)或者物理不稳定性(如变性、聚集、沉淀或吸附)所导致的降解。抗体制剂的不稳定性，不仅会带来药效的降低或消失，更会对患者的健康产生不利的影响。含抗体的复方制剂更为复杂。虽然很多抗体与其他药物联合使用，但复方制剂为数不多。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种包含抗vegf抗体或抗原结合片段和整合素gpiib/iiia拮抗剂的复方制剂及其应用。

2、在一些实施方式中，本发明提供一种制剂，其包含抗vegf抗体或抗原结合片段和整合素gpiib/iiia拮抗剂。在一些实施方式中，所述制剂还包含缓冲剂、稳定剂和表面活性剂中的一种或组合。

3、在一些实施方式中，所述制剂包含抗vegf抗体或抗原结合片段、整合素gpiib/iiia拮抗剂和缓冲剂。在一些实施方式中，所述制剂的ph为3.0～8.0，或4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5。在一些实施方式中，所述制剂的ph为约3.0、约3.5、约4.0、约4.5、约4.8、约5.0、约5.2、约5.4、约5.5、约6.0、约6.5、约7.0、约8.0，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方式中，所述制剂还包含稳定剂和/或表面活性剂。

4、在一些实施方式中，本发明提供一种制剂，其包含：

5、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段；

6、(2)整合素gpiib/iiia拮抗剂；

7、(3)缓冲剂；

8、(4)稳定剂；和

9、(5)表面活性剂。

10、在一些实施方式中，所述制剂的ph为3.0～8.0，或4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5。在一些实施方式中，所述制剂的ph为约3.0、约3.5、约4.0、约4.5、约4.8、约5.0、约5.2、约5.4、约5.5、约6.0、约6.5、约7.0、约8.0，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。

11、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体或抗原结合片段的浓度为1～200mg/ml，或1～150mg/ml，或10～120mg/ml，或30～120mg/ml，或10～100mg/ml，或50～100mg/ml，或60～90mg/ml。在一些实施方式中，所述抗vegf抗体或抗原结合片段的浓度为约1mg/ml、约6mg/ml、约12mg/ml、约25mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml、约120mg/ml、约130mg/ml、约150mg/ml、约180mg/ml、约200mg/ml，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。

12、在一些实施方式中，所述整合素gpiib/iiia拮抗剂为替罗非班、依替巴肽或巴替非班，或其药学上可接受的盐(例如盐酸替罗非班)。在一些实施方式中，所述整合素gpiib/iiia拮抗剂为巴替非班(cn101085809a公开的化合物i)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐为无机酸盐，无机酸可以是：次碘酸、次氯酸、次溴酸、碘酸、高氯酸、过二硫酸、过二碳酸、过碳酸、焦磷酸、焦硫酸、焦亚硫酸、连四硫酸、磷酸、硫代硫酸、硫酸、氯酸、偏磷酸、氢碘酸、氢叠氮酸、氢氟酸、氢硫酸、氢氯酸、氢溴酸、四硼酸、碳酸、硝酸、溴酸、亚硫酸、亚磷酸、亚氯酸、盐酸、亚硝酸、原磷酸、原硫酸、原碳酸等无机酸。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐为有机酸盐，有机酸可以是：酒石酸、草酸、苹果酸、枸橼酸(柠檬酸)、抗坏血酸、苯甲酸、水杨酸、咖啡酸、乳酸、山梨酸、延胡索酸、甲酸、乙酸、苯甲酸、乙二酸、丁二酸、丙酮酸、α-酮丁二酸、苯磺酸、或三氟乙酸、马来酸、四磺酸、甲磺酸、富马酸、氨基酸等。在一些实施方案中，所述有机酸为枸橼酸(柠檬酸)、苹果酸、乳酸、乙酸、乙二酸、氨基酸。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐为枸橼酸盐。在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐为巴替非班与金属离子(例如，碱金属离子(如钠或钾)、碱土金属离子(例如钙或镁)或铝离子)或者与有机碱(如二乙醇胺、三乙醇胺、n-甲基葡糖胺)等形成的盐。

13、在一些实施方式中，所述整合素gpiib/iiia拮抗剂的浓度为1～100mg/ml，或1～90mg/ml，或1～60mg/ml，或10～90mg/ml，或10～30mg/ml。在一些实施方式中，所述整合素gpiib/iiia拮抗剂的浓度为约1mg/ml、约3mg/ml、约5mg/ml、约8mg/ml、约10mg/ml、约12mg/ml、约15mg/ml、约18mg/ml、约20mg/ml、约30mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。

14、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体或抗原结合片段和所述整合素gpiib/iiia拮抗剂的质量比为1-10:1，或2-8:1，或4:1。在一些实施方式中，所述抗vegf抗体或抗原结合片段和所述整合素gpiib/iiia拮抗剂的质量比为约1:1、约2:1、约3:1、约4:1、约5:1、约6:1、约7:1、约8:1、约9:1或约10:1。

15、在一些实施方式中，所述缓冲剂选自组氨酸、组氨酸盐、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐、枸橼酸、枸橼酸盐、醋酸、醋酸盐、琥珀酸盐、谷氨酸盐，或它们的组合。在一些实施方式中，所述缓冲剂选自磷酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂、组氨酸缓冲剂。在一些实施方式中，所述缓冲剂为组氨酸缓冲剂，即组氨酸和组氨酸盐的组合，例如l-组氨酸和l-盐酸组氨酸的组合。在一些实施方式中，所述缓冲剂的浓度为1～50mm，或1～40mm，或1～30mm，或1～25mm，或1～20mm，或1～15mm。在一些实施方式中，所述缓冲剂的浓度为约1mm、约5mm、约8mm、约10mm、13mm、约15mm、约18mm、约20mm、约22mm、约25mm、约28mm、约30mm、约35mm、约40mm、约50mm，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方式中，所述缓冲剂为约10mm的组氨酸缓冲剂。

16、在一些实施方式中，所述稳定剂选自多元醇、糖类、氨基酸、盐类。在一些实施方式中，所述稳定剂选自氯化钠、精氨酸或其盐、聚乙二醇、山梨醇、甘露醇、单糖、寡糖、多糖中的一种或多种。在一些实施方式中，所述稳定剂选自环糊精或其衍生物、蔗糖和海藻糖中的一种或多种。在一些实施方式中，所述环糊精或其衍生物选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、其羟丙基化衍生物(例如羟丙基倍他环糊精)、羟乙基化衍生物、乙基化衍生物和甲基化衍生物、磺丁基醚β-环糊精、支链环糊精、环糊精聚合物，或它们的组合。在一些实施方式中，所述稳定剂选自羟丙基倍他环糊精、蔗糖和海藻糖中的一种或多种。固体状态下，海藻糖通常以海藻糖二水合物存在，所以在一些实施方式中，配制制剂时可以采用海藻糖二水合物，也可以采用其他形式的海藻糖(例如无水海藻糖)配制。在一些实施方式中，所述稳定剂的浓度为1～200mg/ml，或1～150mg/ml，或10～150mg/ml，或20～150mg/ml，或20～130mg/ml，或50～130mg/ml，或60～120mg/ml，或80～120mg/ml，或100～120mg/ml。在一些实施方式中，所述稳定剂的浓度为约1mg/ml、约3mg/ml、约5mg/ml、约8mg/ml、约10mg/ml、约12mg/ml、约15mg/ml、约18mg/ml、约20mg/ml、约30mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml、约108mg/ml、约110mg/ml、约120mg/ml、约130mg/ml、约150mg/ml、约160mg/ml、约170mg/ml、约180mg/ml、约190mg/ml、约200mg/ml，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。

17、在一些实施方式中，所述稳定剂为羟丙基倍他环糊精和海藻糖的组合。在一些实施方式中，所述羟丙基倍他环糊精的浓度为1～200mg/ml，或1～150mg/ml，或10～150mg/ml，或20～150mg/ml，或20～130mg/ml，或30～80mg/ml。在一些实施方式中，所述海藻糖的浓度为1～200mg/ml，或1～150mg/ml，或10～150mg/ml，或20～150mg/ml，或20～130mg/ml，或50～130mg/ml，或30～80mg/ml。在一些实施方式中，所述羟丙基倍他环糊精的浓度为约1mg/ml、约3mg/ml、约5mg/ml、约8mg/ml、约10mg/ml、约12mg/ml、约15mg/ml、约18mg/ml、约20mg/ml、约30mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml、约120mg/ml、约130mg/ml、约150mg/ml、约160mg/ml、约170mg/ml、约180mg/ml、约190mg/ml、约200mg/ml，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方式中，所述海藻糖的浓度为约1mg/ml、约3mg/ml、约5mg/ml、约8mg/ml、约10mg/ml、约12mg/ml、约15mg/ml、约18mg/ml、约20mg/ml、约30mg/ml、约50mg/ml、约57.9mg/ml(约等于64mg/ml的海藻糖二水合物)、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml、约120mg/ml、约130mg/ml、约150mg/ml、约160mg/ml、约170mg/ml、约180mg/ml、约190mg/ml、约200mg/ml，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方式中，所述稳定剂为约50mg/ml的羟丙基倍他环糊精和约57.9mg/ml的海藻糖(如约64mg/ml的海藻糖二水合物)。

18、在一些实施方式中，所述表面活性剂为非离子表面活性剂。在一些实施方式中，所述表面活性剂选自泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)、吐温(例如吐温20和吐温80)，或它们的组合。在一些实施方式中，所述表面活性剂的浓度为0.05～10mg/ml，或0.1～10mg/ml，或0.1～5mg/ml，或0.2～1mg/ml，或0.2～0.6mg/ml。在一些实施方式中，所述表面活性剂的浓度为约0.05mg/ml、约0.08mg/ml、约0.1mg/ml、约0.2mg/ml、约0.3mg/ml、约0.4mg/ml、约0.5mg/ml、约0.8mg/ml、约1mg/ml、约3mg/ml、约6mg/ml、约8mg/ml、约10mg/ml，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方式中，所述表面活性剂为约0.4mg/ml的吐温20。

19、在一些实施方式中，所述制剂包含：

20、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：1～200mg/ml；

21、(2)巴替非班：1～100mg/ml；

22、(3)组氨酸缓冲剂：1～50mm；

23、(4)稳定剂：1～200mg/ml；和

24、(5)吐温20：0.05～10mg/ml；

25、其中，所述制剂的ph为3.0～8.0，优选为4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

26、在一些实施方式中，所述稳定剂为环糊精或其衍生物和寡糖的组合。在一些实施方式中，所述稳定剂为羟丙基倍他环糊精和海藻糖的组合。

27、在一些实施方式中，所述制剂包含：

28、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：1～200mg/ml；

29、(2)巴替非班：1～100mg/ml；

30、(3)组氨酸缓冲剂：1～50mm；

31、(4)羟丙基倍他环糊精：1～200mg/ml；

32、(5)海藻糖：1～200mg/ml；和

33、(6)吐温20：0.05～10mg/ml；

34、其中，所述制剂的ph为3.0～8.0，优选为4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

35、在一些实施方式中，所述制剂包含：

36、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：1～150mg/ml；

37、(2)巴替非班：1～90mg/ml；

38、(3)组氨酸缓冲剂：1～40mm；

39、(4)羟丙基倍他环糊精：1～150mg/ml；

40、(5)海藻糖：1～150mg/ml；和

41、(6)吐温20：0.1～10mg/ml；

42、其中，所述制剂的ph为3.0～8.0，优选为4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

43、在一些实施方式中，所述制剂包含：

44、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：10～120mg/ml；

45、(2)巴替非班：1～60mg/ml；

46、(3)组氨酸缓冲剂：1～30mm；

47、(4)羟丙基倍他环糊精：10～150mg/ml；

48、(5)海藻糖：10～150mg/ml；和

49、(6)吐温20：0.1～10mg/ml；

50、其中，所述制剂的ph为3.0～8.0，优选为4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

51、在一些实施方式中，所述制剂包含：

52、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：30～120mg/ml；

53、(2)巴替非班：10～90mg/ml；

54、(3)组氨酸缓冲剂：1～25mm；

55、(4)羟丙基倍他环糊精：20～130mg/ml；

56、(5)海藻糖：20～130mg/ml；和

57、(6)吐温20：0.1～5mg/ml；

58、其中，所述制剂的ph为3.0～8.0，优选为4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

59、在一些实施方式中，所述制剂包含：

60、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：50～100mg/ml；

61、(2)巴替非班：10～30mg/ml；

62、(3)组氨酸缓冲剂：1～15mm；

63、(4)羟丙基倍他环糊精：30～80mg/ml；

64、(5)海藻糖：30～80mg/ml；和

65、(6)吐温20：0.2～1mg/ml；

66、其中，所述制剂的ph为3.0～8.0，优选为4.0～8.0，或4.0～7.0，或3.5～6.5，或4.5～6.0，或5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

67、在一些实施方式中，所述制剂包含：

68、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：80mg/ml；

69、(2)巴替非班：20mg/ml；

70、(3)组氨酸缓冲剂：10mm；

71、(4)羟丙基倍他环糊精：50mg/ml；

72、(5)海藻糖二水合物：64mg/ml；和

73、(6)吐温20：0.4mg/ml；

74、其中，所述制剂的ph为5.3±0.5，优选为5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

75、在一些实施方式中，所述制剂包含：

76、(1)抗vegf抗体或抗原结合片段：80mg/ml；

77、(2)巴替非班：20mg/ml；

78、(3)组氨酸缓冲剂：10mm；

79、(4)羟丙基倍他环糊精：50mg/ml；

80、(5)海藻糖：57.9mg/ml；和

81、(6)吐温20：0.4mg/ml；

82、其中，所述制剂的ph为5.3±0.5，优选为5.0～5.5，例如为约5.0，或约5.5。

83、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体或抗原结合片段包含seq id no:1所示的hcdr1、seq id no:2所示的hcdr2、seq id no:3所示的hcdr3、seq id no:4所示的lcdr1、seq id no:5所示的lcdr2和seq id no:6所示的lcdr3。

84、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体或抗原结合片段包含重链可变区和/或轻链可变区；其中，所述重链可变区包含seq id no:7所示的序列，或与seq id no:7所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与seq id no:7所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或所述轻链可变区包含seq id no:8所示的序列，或与seq idno:8所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与seq id no:8所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

85、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区；其中，所述重链可变区包含seq id no:7所示的序列，所述轻链可变区包含seq id no:8所示的序列。

86、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体包含重链和/或轻链；所述重链包含seq idno:9所示的序列，或与seq id no:9所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与seq idno:9所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或所述轻链包含seqid no:10所示的序列，或与seq id no:10所示序列相比具有至少80％同一性的序列，或与seq id no:10所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

87、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体包含重链和轻链；所述重链包含seq id no:9所示的序列，所述轻链包含seq id no:10所示的序列。

88、在一些实施方式中，所述抗vegf抗体为bat5906，其序列及制备方法参见专利201810011151.1。

89、在一些实施方式中，所述制剂为液体制剂。在一些实施方式中，所述液体制剂的溶剂为水，例如注射用水或纯化水。

90、在一些实施方式中，所述制剂的施用方式为静脉、皮下、眼内或肌肉内等等。在一些实施方式中，眼内施用为注射施用，或者直接滴入。在一些实施方式中，所述制剂的施用方式为眼内注射，例如玻璃体注射。

91、在一些实施方式中，本发明还提供一种固体制剂，其由本文所述的液体制剂冻干而成。

92、在一些实施方式中，本发明还提供一种复溶制剂，其通过用药学上可接受的溶剂(如注射用水或纯化水)对本文所述的固体制剂进行重构获得。

93、在一些实施方式中，本发明的液体制剂可采用本领域技术人员已知的方法制备。

94、在一些实施方式中，本发明提供本文所述液体制剂的制备方法，包括：取处方量的各组分，加水溶解并混匀，调节ph值，得到液体制剂。

95、在一些实施方式中，本发明提供本文所述液体制剂的制备方法，包括：配制缓冲剂溶液，将抗vegf抗体或抗原结合片段超滤换液至缓冲剂溶液中，加入整合素gpiib/iiia拮抗剂和辅料，将抗vegf抗体或抗原结合片段稀释至指定浓度，得到液体制剂。

96、在一些实施方式中，本发明还提供本文所述的制剂(例如液体制剂或固体制剂)在制备治疗vegf相关的疾病的药物中的用途。

97、在一些实施方式中，本发明还提供本文所述的制剂(例如液体制剂或固体制剂)在治疗vegf相关的疾病中的用途。

98、在一些实施方式中，本发明还提供一种治疗vegf相关的疾病的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用治疗有效量的本文所述的制剂(例如液体制剂或固体制剂)。在一些实施方式中，所述患者是哺乳动物。在一些实施方式中，所述患者是人。

99、在一些实施方式中，所述vegf相关的疾病为vegf过表达的眼类疾病。在一些实施方式中，所述vegf过表达的眼类疾病为vegf过表达的眼底病变。在一些实施方式中，所述vegf相关的疾病选自黄斑变性、年龄相关性黄斑变性(amd)、角膜新生血管形成、与角膜新生血管形成相关的疾病、视网膜新生血管形成、与视网膜/脉络膜新生血管形成相关的疾病、病理性近视继发脉络膜新生血管、虹膜新生血管形成、眼内新生血管形成、眼新生血管病、新生血管性青光眼、黄斑水肿、糖尿病性黄斑水肿(dme，包括局部、非中心dme和弥散性、包括中心的dme)、囊样黄斑水肿(cme)、视网膜病、糖尿病性视网膜病变(dr，包括增生性dr(pdr)，非增生性dr(npdr)，和高海拔dr)、其他缺血相关的视网膜病、早产儿视网膜病(rop)、家族性渗出性玻璃体视网膜病(fevr)、高血压视网膜病、视网膜静脉阻塞(rvo)(包括视网膜分枝静脉阻塞和视网膜中央静脉阻塞)、视网膜骨髓神经纤维(cnv(包括近视cnv))、病理性近视、希佩尔-林道病、冠茨病、诺里病、骨质疏松症-假神经胶质瘤综合征(oppg)、结膜下出血，发红、色素性视网膜炎(rp)、视网膜血管瘤增生、黄斑毛细管扩张、视网膜变性、血管炎、视盘水肿、视网膜炎、结膜炎(包括传染性结膜炎和非传染性(例如，过敏性)结膜炎)、利伯先天性黑矇、葡萄膜炎(包括传染性和非传染性葡萄膜炎)、脉络膜炎、眼组织胞浆菌病、眼睑炎、干眼、外伤性眼损伤和舍格伦病。

100、在一些实施方式中，本发明提供一种容器，包含本文所述的制剂(例如液体制剂或固体制剂)。在一些实施方式中，所述容器可以是本领域常规使用的用于保存药品的任何容器，如预灌封容器、预填充注射器、注射笔、小瓶(如西林瓶)、安瓿、小袋等。

101、实验表明，整合素gpiib/iiia拮抗剂(例如巴替非班)能够增强抗vegf抗体或抗原结合片段治疗眼类疾病的效果，本发明创造性地将抗vegf抗体或抗原结合片段和整合素gpiib/iiia拮抗剂制成复方制剂，制得的复方制剂。本发明制剂意想不到的具有良好稳定性，可以使得复方中的抗vegf抗体或抗原结合片段和整合素gpiib/iiia拮抗剂保持稳定且具有很好的结合活性，可以将两个药物在同一制剂中给药，特别是针对眼内注射，复方制剂减少注射次数，提高临床使用安全性和有效性。