一种皮肤抗衰修复组合物及包含其的多层脂质纳米粒的制作方法

本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种皮肤抗衰修复组合物及包含其的多层脂质纳米粒。

背景技术：

1、人体的皮肤富含神经，而且神经纤维、角质形成细胞和黑素细胞之间联系紧密。由神经细胞，皮肤细胞和免疫细胞分泌的神经肽优先作为信使维持着皮肤的动态平衡。当这种平衡被内部或外部的侵扰打破后，会引发淡纹、皮肤缺乏弹性和肤色暗淡等一系列皮肤问题。棕榈酰三肽-8是一种神经递质抑制肽，它能够抑制substance p和促炎性细胞因子的释放，从而恢复皮肤的动态平衡，改善皮肤状况。

2、洋蔷薇花提取物在化妆品、护肤品领域的主要作为皮肤调理剂、抗氧化剂。洋蔷薇花提取物中有丰富的化合物，包括有机酸、维生素、糖类物质、黄酮类、生物碱、矿物质、蛋白、氨基酸、脂肪等，其中有机酸类化合物作为其主要的活性成分。已有研究表明，洋蔷薇花提取物可以促进神经酰胺生成，从而起修护柔肤作用；可以猝灭自由基，改善皮肤暗沉、衰老状态。

3、导致皮肤衰老的因素是多方面的，具有一定的复杂性，因此皮肤抗衰也需要多种不同作用机制的活性物质的协同作用。在本领域中，将不同作用机制的活性物质复配后可能会产生意料不到的效果。在现有技术中，已不乏将棕榈酰三肽-8或洋蔷薇花提取物添加至化妆品、护肤品中以发挥皮肤抗衰功效的报道和产品。然而，目前尚未有将上述两者复配使用的相关报道或产品。因此，研究棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物对皮肤抗衰是否具有协同增效作用具有一定的意义。

4、在本发明的前期研究中，发现将棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物进行复配具有以下亟待解决的问题：

5、(1)棕榈酰三肽-8带多个胺基，是一种碱性物质；而洋蔷薇花提取物中的主要活性成分有机酸类化合物含羧基，是一种酸性物质。若将两者直接复合容易发生中和，从而影响抗衰效果。因此，如何将作用机制及理化性质均不同的棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物整合到同一制剂中，将它们共同递送至皮肤抗衰靶组织或靶细胞，是一个难题。

6、(2)洋蔷薇花提取物有多种的活性成分，其中有机酸类成分为主要的抗衰、抗氧化成分，有机酸类物质呈亲水性，容易被皮肤屏障阻挡，不容易渗透进入皮肤深处起效。而棕榈酰三肽-8是一种有三个氨基酸组成的寡肽，具有一个亲脂性的棕榈酰基，相对有机酸类化合物更容易渗透肌肤。

7、(3)棕榈酰三肽-8的稳定性较差，在储存中容易受环境因素影响而降解，失去活性。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种皮肤抗衰修复组合物及包含其的多层脂质纳米粒。首先，本发明提供的组合物中包含有特定比例的棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物，在皮肤抗衰修复方面具有协同效果；其次，本发明提供的多层脂质纳米粒中将棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物负载于不同层中，成功实现了两者的隔离；此外该多层脂质纳米粒对棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物的包埋，不仅可显著提升活性物质(尤其是棕榈酰三肽-8)的储存稳定性，同时也大幅提升了活性物质的透皮性。

2、本发明的具体技术方案为：

3、第一方面，本发明提供了一种皮肤抗衰修复组合物，包括质量比为1∶0.1-1∶100的棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物。经分离纯化后所述洋蔷薇花提取物中有机酸类化合物的总含量至少为80wt％。

4、本发明首次探索了棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物复配后在皮肤抗衰修复方面的效果，结果发现两者具有协同效果。其中，棕榈酰三肽-8通过减少神经递质p物质(substance p)和促炎性细胞因子的释放；进而降低血管扩张、浮肿和红斑，改善皮肤敏感状态、维持皮肤健康状态。洋蔷薇花提取物作为历史悠久的美容成分，一直被认为具有赋香、提亮、滋养的功效。但发现将两者进行组合后，既能发挥原本各自的消炎舒缓、滋养提亮的功效，同时在抗皱紧致上也具有了更高的活性和功效。

5、作为优选，所述棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物的质量比进一步优选为1∶1-1∶10。

6、第二方面，本发明提供了一种含有上述组合物的具有皮肤抗衰修复效果的化妆品或护肤品。

7、作为优选，所述化妆品或护肤品为面霜、乳液、磨砂膏、按摩膏、精华液、卸妆膏、洁面乳等护肤产品，及粉底液、粉饼、口红、眼影等彩妆产品。

8、第三方面，本发明提供了一种包含棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物的多层脂质纳米粒，包括：

9、包含洋蔷薇花提取物的水相内核，

10、通过静电作用包覆于所述水相内核表面、包含棕榈酰三肽-8和纳米气孔的双层脂质中间层，

11、通过静电作用包覆于所述双层脂质中间层表面、包含洋蔷薇花提取物的水相中间层，

12、通过静电作用包覆于所述水相中间层表面、包含棕榈酰三肽-8的脂质外层。

13、如背景技术部分所述，目前尚未有将棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物整合至同一制剂中的相关报道，而本发明在经过前期的探索后，发现将棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物制备为制剂存在以下三方面的技术难题：①棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物相容性差；②制剂难以透过皮肤角质层屏障，透皮效果差(尤其是洋蔷薇花提取物)；③稳定性差，易降解失活(尤其是棕榈酰三肽-8)。

14、为此，本发明设计并制备得到了一种多层脂质纳米粒，其具有多层包覆结构。其中，最核心为含有洋蔷薇花提取物的水相内核，其外层为包含棕榈酰三肽-8和纳米气孔的双层脂质中间层，其外层为包含洋蔷薇花提取物的水相中间层，其外层为包含棕榈酰三肽-8的脂质外层。

15、在隔离性方面，在上述多层脂质纳米粒结构中，洋蔷薇花提取物和棕榈酰三肽-8被隔离在不同层结构中，因此能够避免两者直接接触。

16、在透皮性方面，由于较大的分子量和极性，活性物质(尤其是洋蔷薇花提取物)普遍存在因难以穿透皮肤角质层屏障而顺利递送至皮肤抗衰修复靶组织或靶细胞的缺陷。为此，在现有技术中，通常是将活性物质负载于脂质体(水相内核+双层脂质外壳)中，由于双层脂质外壳的结构与细胞膜结构相似，因此脂质体作为纳米载体能够显著改善活性物质的皮肤渗透性。然而本发明发现，将脂质体作为纳米载体在穿透皮肤角质层屏障方面的能力仍有待于改进。原因在于人体的皮肤屏障也具有多层结构，主要呈现为疏水性，部分呈现为亲水性。脂质体结构的层数较少，因此其穿透人体皮肤屏障多层结构的能力有限。而本发明多层脂质纳米粒的层数比常规脂质体更多。在穿透人体皮肤屏障多层结构的过程中，当遇到皮肤屏障的疏水层时，多层脂质纳米粒的脂质外层溶解，其中的棕榈酰三肽-8得到释放；当继续遇到皮肤屏障的亲水层时，此时多层脂质纳米粒中处于在外层的水相中间层瓦解，水性的洋蔷薇花提取物得到释放；当继续遇到皮肤屏障的疏水层和亲水层时，按照同样的相似相容原理，多层脂质纳米粒的双层脂质中间层、水相内核依次瓦解并分别释放出棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物。综上，本发明的多层脂质纳米粒能够渗透穿过更厚的皮肤屏障。

17、在稳定性方面，由于洋蔷薇花提取物的分子结构上带有羧基，其在特定酸性ph下呈现为带正电荷，而棕榈酰三肽-8上带有多个胺基，其在特定碱性ph下呈现为带负电荷。本发明巧妙地利用了这一物质特性，在制备时能够使得相邻内外层间通过静电吸附作用结合，从而提高外层在内层表面富集速率和包覆量，同时也可以提高多层脂质纳米粒自身的结构稳定性，进而实现对活性物质更好的包封效果，使活性物质的稳定性更佳。此外，若将本发明多层脂质纳米粒制备为液体悬浮制剂，在长时间静置后其容易发生沉降分层。为此，本发明多层脂质纳米粒的双层脂质中间层设计有纳米气孔结构，这些纳米气孔能够显著改善多层脂质纳米粒的悬浮能力，可减轻沉降分层现象，提高储存稳定性。

18、第四方面，本发明提供了一种上述多层脂质纳米粒的制备方法，包括以下步骤：

19、(1)将洋蔷薇花提取物溶于水和甘油中，并调节ph为5-6，得到带正电荷的水相内核液；将棕榈酰三肽-8与卵磷脂、胆固醇和乙醇水溶液在40-45℃下搅拌均匀，并用碳酸氢钠和碳酸钠调节ph为8.0-9.0，得到带负电荷的双层脂质中间层液；将带负电荷的双层脂质中间层液快速注入水相内核液，挥尽乙醇，超声，透析，冻干，在50-55℃下加热形成纳米气孔，获得具有双层脂质中间层包覆水相内核结构的脂质纳米粒a；其中，水相内核中负载有洋蔷薇花提取物，双层脂质中间层中负载有棕榈酰三肽-8。

20、(2)将脂质纳米粒a分散至无水乙醇中，调节ph为7.5-8.0，得到带负电的悬浮液a；将洋蔷薇花提取物溶于水和甘油中，并调节ph为3.5-4.5，得到带正电荷的水相中间层液；在搅拌条件下将悬浮液a滴加至水相中间层液中，透析，冻干，获得最外层为水相中间层的脂质纳米粒b；其中，水相中间层中负载有洋蔷薇花提取物。

21、(3)将脂质纳米粒b分散至水中，调节ph为3.5-4.5，获得带正电的悬浮液b；将棕榈酰三肽-8与卵磷脂、胆固醇和无水乙醇在40-45℃下搅拌均匀，并调节ph为7.5-8.0，得到带负电荷的脂质外层液；在搅拌条件下将悬浮液b滴加至层脂质外层液中，透析，冻干，获得最外层为脂质外层的多层脂质纳米粒；其中，脂质外层负载有棕榈酰三肽-8。

22、为了在制备过程中使各层之间通过静电作用结合，需要严格控制各溶液或悬浮液的ph。若ph过高或过低，不仅容易导致溶液或悬浮液中的洋蔷薇花提取物和棕榈酰三肽-8呈现为不带电荷或带相反电荷，同时也容易因所带电荷过强而使得相反电荷过度富集于表面，导致纳米粒子粒径失控。具体地，在步骤(2)和(3)中，需要控制水相中间层液和悬浮液b的ph为3.5-4.5，悬浮液a和脂质外层液的ph为7.5-8.0。由于步骤(1)需要在双层脂质中间层中形成纳米气孔，因此本发明在步骤(1)中选择碳酸氢钠和碳酸钠作为ph调节剂，在50-55℃的加热条件下，碳酸氢钠受热分解释放气体在双层脂质中间层形成纳米气孔。需要注意的是，为了确保碳酸氢钠过量，因此需要提高步骤(1)中双层脂质中间层液的ph为8.0-9.0，同时降低水相内核液的ph为5-6，同时在混合时确保双层脂质中间层液过量。

23、通过上述工艺参数的设定，本发明巧妙地利用了洋蔷薇花提取物和棕榈酰三肽-8的物质特定，在制备时能够使得相邻内外层间通过静电吸附作用结合，从而提高外层在内层表面富集速率和包覆量，同时也可以提高多层脂质纳米粒自身的结构稳定性，进而实现对活性物质更好的包封效果，使活性物质的稳定性更佳。此外，本发明多层脂质纳米粒的双层脂质中间层设计有纳米气孔结构，这些纳米气孔能够显著改善多层脂质纳米粒的悬浮能力，可减轻沉降分层现象，提高储存稳定性。

24、作为优选，步骤(1)中：所述水相内核液中，洋蔷薇花提取物、水和甘油的质量比为1∶(85-95)∶(5-15)。

25、作为优选，步骤(1)中：所述双层脂质中间层液中，棕榈酰三肽-8、卵磷脂、胆固醇和乙醇水溶液的质量比为1∶(5-10)∶(2-4)∶(100-200)；乙醇水溶液中的乙醇浓度为80-95wt％。

26、作为优选，步骤(1)中：所述水相内核液和双层脂质中间层液的质量比为1∶(3-5)。

27、作为优选，步骤(2)中：所述悬浮液a中，脂质纳米粒a和无水乙醇的质量比为1∶(50-150)。

28、作为优选，步骤(2)中：所述水相中间层液中，洋蔷薇花提取物、水和甘油的质量比为1∶(85-95)∶(5-15)。

29、作为优选，步骤(2)中：所述悬浮液a和水相中间层液的质量比为1∶(2-3)。

30、作为优选，步骤(3)中：所述悬浮液b中，脂质纳米粒b和水的质量比为1∶(50-150)。

31、作为优选，步骤(3)中：所述脂质外层液中，棕榈酰三肽-8、卵磷脂、胆固醇和无水乙醇的质量比为1∶(5-10)∶(2-4)∶(100-200)。

32、作为优选，步骤(3)中：所述悬浮液b和脂质外层液的质量比为1∶(2-4)。

33、作为优选，所述多层脂质纳米粒的粒径为50-100nm。

34、与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：

35、(1)本发明提供的组合物中包含有特定比例的棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物，在皮肤抗衰修复方面具有协同效果。具体为可显著协同减轻炎症，促进胶原蛋白i的生成，抑制mmp1/mpp9/神经递质相关的p物质等的表达能力，提升皮肤保水能力，改善皮肤弹性，缓解修复皱纹，提亮肤色等。

36、(2)本发明提供的多层脂质纳米粒中将棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物负载于不同层中，成功实现了两者的隔离；此外该多层脂质纳米粒对棕榈酰三肽-8和洋蔷薇花提取物的包埋，不仅可显著提升活性物质(尤其是棕榈酰三肽-8)的储存稳定性，同时也大幅提升了活性物质的透皮性。

37、(3)本发明多层脂质纳米粒的双层脂质中间层设计有纳米气孔结构，这些纳米气孔能够显著改善多层脂质纳米粒的悬浮能力，可减轻沉降分层现象，提高储存稳定性。

38、(4)本发明在多层脂质纳米粒的制备过程中通过严格的ph调控，使得多层脂质纳米粒的各层结构通过静电吸附作用结合，从而提高外层在内层表面富集速率和包覆量，同时也可以提高多层脂质纳米粒自身的结构稳定性，进而实现对活性物质更好的包封效果，使活性物质的稳定性更佳。