一种皮瓣粘合用制剂及其制备方法与流程

本发明属于皮瓣粘合剂，具体涉及一种皮瓣粘合用制剂及其制备方法。

背景技术：

1、基于纤维蛋白原的组织粘合剂可用于无缝和/或有缝支撑性结合人或动物的组织或器官部分，用以封闭所覆盖的组织，以达止血、粘合、封闭，促进伤口愈合等作用。主要由纤维蛋白原和凝血酶组成。纤维蛋白原经凝血酶激活形成纤维蛋白单体，进一步在ca2+、凝血ⅹⅲ因子等凝血因子的参与下，因子xiii被活化为因子xiiia，使得所形成的纤维蛋白发生交联以便形成可提高组织粘合剂有效性的高分子量聚合物，即稳定的纤维蛋白多聚体。目前市售纤维蛋白胶主要为人源、动物源。

2、美国专利5962405公开了呈冻干粉或由冷冻溶液形式储存的稳定性纤维蛋白原制剂，上述形式可快速且以简单方式复原并液化，以便形成即用型纤维蛋白原和/或组织粘合剂溶液。这种制剂由巴克斯特医疗保健公司(美国)于1998年得到批准上市的，商品名为纤维蛋白封闭剂。是一种纤维蛋白密封剂，用于在常规手术技术(如缝合、结扎和烧灼)控制出血无效或不切实际的情况下进行手术的成人和儿童患者(1个月以上)的止血辅助。对肝素化患者有效。其是一种纤维蛋白密封剂，作为标准手术技术(如缝合和结扎)的辅助手段，用于防止临时结肠造口术后结肠吻合口泄漏。

3、由巴克斯特医疗保健公司(美国)于2008年得到批准上市的，商品名为纤维蛋白密封剂，是tisseel衍生产品，其适用于在大于或等于1岁的成人和儿童人群中，将自体皮肤移植物粘附到手术准备的伤口床上。如烧伤皮肤移植、在面部除皱手术(面部除皱术)中粘附组织瓣等。artiss产品说明书介绍，喷洒产品后，立即将皮瓣或移植物连接到伤口床上。在接触产品之前，用生理盐水湿润手套，以防止粘附。在聚合之前，外科医生有60秒的时间来操作和定位皮瓣或移植物，给医生充裕时间进行手术操作。轻轻按压皮瓣或移植物至少3分钟，将其固定在所需位置，以确保artiss正确固定，并将皮肤移植物或移植物牢固地粘附在下层组织上。固化的纤维蛋白密封剂在施用后约2小时内达到其最终强度。

4、传统纤维蛋白原的组织粘合剂成胶时间小于10秒，成胶时间太短，不方便医生手术操作等皮瓣组织手术。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，本发明要解决的一个技术问题在于提供一种皮瓣粘合用制剂。本发明要解决的另一个技术问题在于提供一种皮瓣粘合用制剂的制备方法。采用本发明方法制备得到的制剂相对于传统纤维蛋白原的组织粘合剂，具有成胶时间相对长(大于60秒)，方便医生操作等皮瓣组织手术。且具有良好的促血管再生特点，显著提高皮瓣成活率。，

2、为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

3、一种皮瓣粘合用制剂，由组分1和组分2组成，组分1纤维蛋白原溶液，含有脂肪细胞基质、l-赖氨酸、枸橼酸钠和氯化钠；组分2凝血酶溶液，含有蔗糖和右旋糖酐40。

4、所述皮瓣粘合用制剂，组分1中纤维蛋白原含量为35～45mg/ml；组分2中凝血酶效价50～100iu/ml；优选，组分1中纤维蛋白原含量为40mg/ml；组分2中凝血酶效价80iu/ml。

5、上述皮瓣粘合用制剂的制备方法，包括以下步骤：

6、(1)猪血浆的s/d病毒灭活；

7、(2)低温乙醇沉淀：对步骤(1)处理后的猪血浆采用低温醇沉方法，收集沉淀物ⅰ和滤液ⅰ；

8、(3)组分1纤维蛋白原溶液：用纤维蛋白原复溶液对沉淀物ⅰ进行溶解后，再用纤维蛋白原稀释液进行稀释，灌装制得；

9、(4)组分2凝血酶溶液：将醇沉后的得到的滤液ⅰ，加入钙离子以激活凝血酶原，将蔗糖和右旋糖酐40溶于水中，得到凝血酶原液稀释液，用稀释液稀释至目标浓度，灌装至西林瓶中制得；

10、(5)组分1和组分2混合得到皮瓣粘合用制剂。

11、所述皮瓣粘合用制剂的制备方法，猪血浆的s/d病毒灭活，指有机溶剂/去污剂处理法，处理方式为：先用1μm滤器除去血浆中存在的颗粒，防止颗粒可能藏匿病毒，从而影响病毒灭活效果；然后采用终质量浓度0.3％tnbp和1％聚山梨酯80，在24℃处理7小时，进行病毒灭活。

12、所述皮瓣粘合用制剂的制备方法，低温乙醇沉淀指对过滤后血浆进行预冷处理，降至0～10℃，加入50％、-30℃的低温乙醇至乙醇的终含量为10％～15％。控制温度为-2～0℃，保温1～4小时，进行离心，转速12000转/分钟，收集沉淀物ⅰ。

13、所述皮瓣粘合用制剂的制备方法，组分1纤维蛋白原溶液的制备，具体为将枸橼酸钠、氯化钠和l-赖氨酸溶于水中，得到纤维蛋白原复溶液；将得到的活性成分沉淀物ⅰ，至复溶液中复溶，即得纤维蛋白原原液；将脂肪细胞基质、l-赖氨酸和枸橼酸钠溶于水中，得到纤维蛋白原原液稀释液，将得到的原液，用稀释液稀释至目标浓度，灌装至西林瓶中制得。

14、所述皮瓣粘合用制剂的制备方法，组分1纤维蛋白原溶液的制备：将枸橼酸钠、氯化钠和l-赖氨酸溶于水中，得到终质量浓度为0.3％～3％枸橼酸钠，0.2％～2％氯化钠，3％～5％ l-赖氨酸的纤维蛋白原复溶液；然后用沉淀物ⅰ的10倍～15倍重量的纤维蛋白原复溶液对沉淀物ⅰ在20℃～25℃搅拌溶解1小时，观察外观至无明显沉淀，即得纤维蛋白原原液；将脂肪细胞基质、l-赖氨酸和枸橼酸钠溶于水中，得到终质量浓度为1％～3％脂肪细胞基质，1％～2％l-赖氨酸，0.3％～0.5％枸橼酸钠的纤维蛋白原原液稀释液；用纤维蛋白原稀释液对纤维蛋白原原液进行稀释至纤维蛋白原含量为35～45mg/ml，灌装至西林瓶，即得。

15、所述皮瓣粘合用制剂的制备方法，钙离子激活，指向滤液ⅰ中加入钙离子以激活凝血酶原，钙离子在溶液中的终浓度为0.03～0.1mol/l，钙离子以氯化钙或碳酸钙加入，优选浓度为0.06mol/l；激活ph为7.2～7.6，激活温度分别为20～30℃，激活时间为6～8小时，激活凝血酶原液效价至大于600iu/ml。

16、所述皮瓣粘合用制剂的制备方法，凝血酶原液稀释液，指配制终质量浓度为0.1％～0.3％蔗糖，0.1％～0.2％右旋糖酐40溶液，即得；用稀释液稀释至凝血酶效价50～100iu/ml，灌装至西林瓶中制得。

17、所述皮瓣粘合用制剂的制备方法，包括以下步骤：

18、(1)猪血浆的s/d病毒灭活：先用1μm滤器除去血浆中存在的颗粒，根据血浆的质量，按质量百分比，以终浓度0.3％的tnbp和1％的聚山梨酯80加入灭活试剂，在24℃保温7小时；

19、(2)低温乙醇沉淀：将处理后血浆进行预冷处理，冷却至4℃，加入50％，-30℃的低温乙醇至乙醇的终含量为12％，搅拌均匀，转速为400转/分钟；将温度控制在0℃，保温2小时后，以转速12000转/分钟进行离心，收集沉淀物ⅰ；

20、(3)组分1纤维蛋白原溶液：配制纤维蛋白原复溶液，其中含1％枸橼酸钠，1.1％氯化钠，4％ l-赖氨酸；用沉淀物ⅰ的13倍重量的纤维蛋白原复溶液对沉淀物ⅰ进行溶解，溶解条件为20℃，搅拌1小时进行溶解即得纤维蛋白原原液；配制纤维蛋白原稀释液，其中含2％脂肪细胞基质，1％ l-赖氨酸和0.4％枸橼酸钠；用纤维蛋白原稀释液对纤维蛋白原原液进行稀释至纤维蛋白原含量为40mg/ml，灌装2.5ml至西林瓶，即得；

21、(4)组分2凝血酶溶液：向滤液ⅰ中加入氯化钙以激活凝血酶原，钙离子在溶液中的终浓度为0.06mol/l，激活ph为7.4，激活温度分别为25℃，激活时间为8小时，激活凝血酶原液效价为1100iu/ml；配制凝血酶稀释液，其中含0.2％蔗糖和0.2％右旋糖酐40；用凝血酶稀释液稀释至凝血酶效价80iu/ml，灌装至西林瓶中，制得；

22、(5)将组分1纤维蛋白原溶液和组分2凝血酶溶液，分别注入双联混药器中，将三通接头固定在双联混药器的两个注射器锥头上，并将扣带扣紧，将喷嘴安装在三通接头的锥头上，检查无松动，推动联动推杆喷涂于患处。

23、有益效果：与现有的技术相比，本发明的优点包括：

24、本发明方法制备得到的制剂相对于传统纤维蛋白原的组织粘合剂，具有成胶时间相对长(大于60秒；传统纤维蛋白原的组织粘合剂成胶时间小于10秒)，方便医生操作等皮瓣组织手术；粘合力应不低于90g/cm2，符合开发需求。该制剂可以广泛应用于皮瓣粘合，如烧伤皮肤移植，抽脂手术修复等；且具有良好的促血管再生特点，显著提高皮瓣成活率。