本发明属于植物提取，尤其涉及一种罗汉果茎提取物的制备方法。
背景技术：
1、罗汉果[拉丁语学名：siraitiagrosvenorii(swingle)c.jeffrey ex lu etz.y.zhang]为葫芦科(拉丁语学名：cucurbitaceae)罗汉果属的多年生藤本植物，是我国特有的经济、药用植物。
2、罗汉果茎中含有大量的黄酮类化合物和三萜酸类化合物；黄酮类化合物主要成分为以山奈酚和槲皮素为苷元的化合物，其中含量最高的为山奈苷；三萜酸类化合物有两种存在形式，一种是游离型：如罗汉果酸甲、罗汉果酸乙、罗汉果酸丙、罗汉果酸丁和罗汉果酸戊等；一种是结合型，即与糖基结合以酸苷的形式存在，如罗汉果酸苷甲ⅱ和罗汉果酸苷乙ⅱ。
3、相关技术中用于三萜酸的提取方法主要有溶剂回流提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、酶解法和酸解法；分离纯化方法主要有大孔树脂吸附法、酸碱沉淀法、活性炭吸附法、重结晶法和硅胶柱色谱法。
4、cn113121632a公开了一种从罗汉果根中提取分离罗汉果酸的方法，该方法以酸性醇为溶剂进行提取，调节ph成酸性后，采用多次萃取法得到罗汉果总酸产品。该方法在萃取中过程中需要甲醇或石油醚等，甲醇的毒性较大而石油醚的安全性较低。
5、相关技术中还公开了一种大孔吸附树脂富集罗汉果茎中三萜酸的方法，该方法通过乙醇提取，乙酸乙酯和正丁醇萃取后，取萃取层使用大孔树脂进行分离纯化，可得到纯度为86.62％的总三萜酸产品。该方法萃取过程中用到正丁醇，而正丁醇存在一定的毒性。
6、cn104906214a公开以一种枇杷叶中黄酮类和三萜酸类物质的联合制备方法，该方法先后使用碳酸二甲酯、乙醇为溶剂提取枇杷叶，洗脱液分别经硅胶柱洗脱后得黄酮类粗品、三萜酸类粗品，两者分别经结晶法得到黄酮类成品和三萜酸成品，该法使用有机溶剂碳酸二甲酯，容易造成溶剂残留，且硅胶在工业化生产中成本较高。
7、相关技术中还公开了一种利用大孔吸附树脂富集纯化罗汉果茎叶中山奈苷的方法，该方法采用ab-8大孔树脂对罗汉果茎中的山奈苷进行纯化处理，通过工艺参数的优化，最终制得山奈苷纯度为52.12％的产品，产品回收率为50.01％。产品的回收率和纯度相对较低。
8、因此，本发明提供了一种罗汉果茎提取物的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题和缺陷的至少一个方面。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种罗汉果茎提取物的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题和缺陷的至少一个方面。
2、具体如下，本发明提供了一种罗汉果茎提取物的制备方法，包括以下步骤：
3、s1、将罗汉果茎采用乙酸乙酯水溶液提取，固液分离，制得乙酸乙酯提取液和滤渣；
4、将所述乙酸乙酯提取液浓缩，制得第一浸膏；
5、将滤渣采用第一乙醇水溶液提取，制得第一乙醇提取液；
6、s2、将所述第一乙醇提取液过活性炭柱，收集流出液；再采用第二乙醇水溶液洗脱，制得第二乙醇水溶液洗脱液；
7、将第二乙醇水溶液洗脱液浓缩，制得第二浸膏；
8、s3、将步骤s2中所述流出液浓缩后加水，制得第一水相；
9、将所述第一水相过大孔树脂柱，依次采用水和第三乙醇水溶液洗脱，收集第三乙醇水溶液洗脱液；
10、将所述第三乙醇水溶液洗脱液浓缩后加水，制得第二水相；
11、将第二水相过聚酰胺树脂，依次采用水和第四乙醇水溶液洗脱，收集第四乙醇水溶液洗脱液；
12、将所述第四乙醇水溶液洗脱液浓缩后干燥，制得总黄酮提取物；
13、s4、将所述第一浸膏、所述第二浸膏、水和酶混合后酶解，收集固相；
14、将所述固相与碱溶液混合后，收集液相；
15、再将酸溶液和所述液相混合后，固液分离，制得三萜酸类化合物；
16、所述乙酸乙酯水溶液的质量分数为7.9％～8.08％。
17、根据本发明制备方法中的一种制备方法，至少具备如下有益效果：
18、本发明从废弃的罗汉果茎中同时制备两类有效成分，为制备罗汉果总三萜酸和总黄酮的来源提供了一个新途径；
19、本发明工艺简单，使用大孔树脂柱、活性炭层析柱、聚酰胺柱法相结合，大大减少了有效成分的损失，分离材料可重复利用，全程不使用有害有机溶剂，环境友好，所生产的产品溶剂残留少，可用于食品；
20、本发明采用乙酸乙酯对罗汉果茎制得乙酸乙酯提取液，乙酸乙酯提取液中含有三萜酸及其苷类；第一乙醇水溶液中含有大量的黄酮类化合物和部分三萜酸苷类，分步进行提取可以提高两类成分的回收率。
21、活性炭柱为非极性吸附剂，在一定温度下具有脱色效果，对黄酮类化合物进行脱色，对极性较小的化合物吸附力较强，如三萜酸，通过弱极性的流动相可以将其洗脱，本发明利用酶解法将其中的三萜酸苷类转化成三萜酸大大提高了三萜酸的回收率。
22、该方法还利用酶解法将其中的三萜酸苷类转化成三萜酸，使三萜酸的回收率提高了10％～20％。
23、根据本发明的一些实施方式，所述罗汉果茎的长度为0.5cm～2cm。
24、根据本发明的一些实施方式，所述罗汉果茎提取物包括三萜酸类化合物和黄酮类化合物中的至少一种。
25、根据本发明的一些实施方式，所述三萜酸类化合物包括酸性三萜酸类化合物。
26、三萜酸类化合物具有免疫调节、护肝、抗炎、抗病毒和降血糖等活性。
27、根据本发明的一些实施方式，所述罗汉果茎与所述乙酸乙酯水溶液的质量体积比为1g：5ml～8ml。
28、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中乙酸乙酯水溶液提取的温度为50℃～70℃。
29、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中乙酸乙酯水溶液提取的次数为1次～2次。
30、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中乙酸乙酯水溶液单次提取的时间为1h～3h。
31、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中乙酸乙酯水溶液提取的方式为回流提取或连续逆流提取。
32、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中第一乙醇水溶液提取的温度为50℃～70℃。
33、根据本发明的一些实施方式，所述第一乙醇水溶液的体积分数为50％～70％。
34、根据本发明的一些实施方式，所述罗汉果茎与所述第一乙醇水溶液的质量体积比为1g：5ml～8ml。
35、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中第一乙醇水溶液提取的次数为1次～2次。
36、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中第一乙醇水溶液单次提取的时间为1h～3h。
37、根据本发明的一些实施方式，步骤s1中第一乙醇水溶液提取的方式为回流提取或连续逆流提取。
38、根据本发明的一些实施方式，所述第一浸膏的波美度为25°～35°。
39、根据本发明的一些实施方式，所述活性炭柱由颗粒活性炭和保温层组成。
40、根据本发明的一些实施方式，所述保温层中通过水。
41、根据本发明的一些实施方式，所述保温层中水的温度为50℃～60℃。
42、根据本发明的一些实施方式，步骤s2中第一乙醇提取液的流速为0.5bv/h～2bv/h。
43、根据本发明的一些实施方式，所述第一水相的浓度为0.2g/ml～0.6g/ml(原料/溶液)。
44、根据本发明的一些实施方式，所述第二乙醇水溶液的体积分数为75％～85％。
45、根据本发明的一些实施方式，所述第二乙醇水溶液的洗脱流速为1bv/h～2bv/h。
46、根据本发明的一些实施方式，所述第二乙醇水溶液的用量为2bv～4bv。
47、根据本发明的一些实施方式，所述大孔树脂为d101大孔树脂、xad-1大孔树脂和hp-10大孔树脂中的一种。
48、根据本发明的一些实施方式，所述第一水相的上柱流速为1bv/h～2bv/h。
49、根据本发明的一些实施方式，所述大孔树脂洗脱过程中水用量为2bv～4bv。
50、根据本发明的一些实施方式，所述大孔树脂洗脱过程中水流速为1bv/h～2bv/h。
51、根据本发明的一些实施方式，所述第三乙醇水溶液的用量为2bv～4bv。
52、根据本发明的一些实施方式，所述第三乙醇水溶液的流速为1bv/h～2bv/h。
53、根据本发明的一些实施方式，所述第三乙醇水溶液的体积分数为40％～60％。
54、根据本发明的一些实施方式，所述第二水相的浓度为0.8g/ml～1.2g/ml(原料/溶液)。根据本发明的一些实施方式，所述聚酰胺树脂洗脱过程中水的用量为1bv～3bv。
55、根据本发明的一些实施方式，所述聚酰胺树脂洗脱过程中水的流速为1bv/h～2bv/h。
56、根据本发明的一些实施方式，所述第四乙醇水溶液的用量为2bv～4bv。
57、根据本发明的一些实施方式，所述第四乙醇水溶液的流速为1bv/h～2bv/h。
58、根据本发明的一些实施方式，所述第四乙醇水溶液的体积分数为50％～65％。
59、根据本发明的一些实施方式，所述干燥为真空喷雾、热喷雾、减压真空干燥中的一种。
60、根据本发明的一些实施方式，所述酶为β-葡萄糖苷酶。
61、根据本发明的一些实施方式，所述酶与所述罗汉果茎的质量比为0.1～0.3:100。
62、根据本发明的一些实施方式，所述第一浸膏和所述第二浸膏的总质量与水的质量之比为1:8～12。
63、根据本发明的一些实施方式，所述酶解的温度为40℃～50℃。
64、根据本发明的一些实施方式，所述酶解的时间为5h～12h。
65、根据本发明的一些实施方式，所述酶解过程中震荡。
66、根据本发明的一些实施方式，所述震荡的速率为80r/min～100r/min。
67、根据本发明的一些实施方式，所述酶解后灭酶。
68、根据本发明的一些实施方式，所述灭酶的方式为煮沸灭酶。
69、根据本发明的一些实施方式，所述灭酶的时间为5min～8min。
70、根据本发明的一些实施方式，所述碱溶液为碳酸钠溶液、碳酸氢钠溶液、磷酸钠溶液、碳酸钾溶液、碳酸氢钾溶液和磷酸钾溶液中的至少一种。
71、根据本发明的一些实施方式，所述碱溶液的ph为9～10.5。
72、根据本发明的一些实施方式，所述酸溶液为柠檬酸溶液、磷酸溶液和醋酸溶液中的至少一种。
73、根据本发明的一些实施方式，所述酸溶液的ph为3～4。
74、根据本发明的一些实施方式，步骤s4中所述固液分离后收集固相，将固相水洗至中性。