环状RNA在制备用于预防和/或治疗缺血性卒中药物中的应用

本发明涉及生物分子，尤其涉及环状rna在制备用于预防和/或缺血性卒中药物中的应用。

背景技术：

1、脑卒中(stroke)又叫卒中，是世界范围内导致死亡和残疾的主要原因。急性缺血性卒中(acute ischemic stroke，ais)作为较常见的脑卒中类型，约占全部脑卒中比例的70％。缺血性卒中被定义为脑、脊髓或视网膜的梗死，其中动脉闭塞引起的缺血性卒中是主要原因，当前血管内取栓和静脉溶栓是治疗ais较有效的措施，其中重组组织型纤维溶酶原激活剂tpa是获得美国食品和药物管理局(fda)批准的治疗中风的唯一合适的溶栓药物，它可以分解脑血管中的血凝块，然后恢复患者脑血管血液再灌注，进而发挥及时的治疗效果。但溶栓药物的治疗时间窗一般受卒中发生时间、脑血管阻塞部位和阻塞程度、急性神经功能缺损的严重程度以及神经影像结果、血栓患者年龄、溶栓剂的特异性以及中和抗体的存在和半衰期，只有不到10％的中风患者符合tpa治疗条件，并且一部分病人恢复后继发的再灌注损伤，导致该疾病的治愈尚未取得突破性进展。其他降纤药物、神经保护剂等治疗方式尚未取得令人满意结果；高压氧、亚低温等缺乏高质量随机对照研究证实其可行性，但多是在患者抢救治疗后的康复保健治疗中作为辅助治疗的一种方式。缺血性卒中特点主要是内皮功能障碍和屏障破坏。缺血再灌注(ischemia/reperfusion，i/r)可诱导脑血管氧化应激和凋亡，造成血脑屏障(blood brain barrier，bbb)破坏，导致缺血性脑卒中的发生和发展。

2、目前针对缺血性脑卒中引起的脑组织损伤的机制原因众多，其中血管新生的研究是医学界寻求is的治疗的又一重大突破。血管新生是指从预先存在的血管网络中形成血管。在发育、组织修复或疾病状态下的血管生长,包括内皮细胞的萌发、迁移和增殖，其受多种因素调控。脑缺血后的血管新生是对脑缺血反应的重要恢复和保护机制。最早缺血后12h出现在缺血边界区(ibz)，在实验性脑缺血后可持续30天以上。当发生脑缺血时，梗死区及其周围的血管结构受到破坏，营养供应不足，进而导致梗死扩大。因此，保护梗死区血管结构的完整性，促进梗死区周围血管生成，对脑缺血的治疗具有重要意义。此外，维持更多功能性血管有利于缺血后血液灌注，促进血管新生和神经发生。

3、mm9_circ_008009(id:mmu_circ_0000723)的基因组位置是chr17：6137210-6139156，长度为1946bp，来源基因是tulp4(tubby-likeprotein4)，于2013年通过高通量rna测序被发现。mm9_circ_008009通过blast软件进行人的同源性比对，发现人与小鼠有100％同源性。有报告对mm9_circ_008009进行研究，确证了mm9_circ_008009的表达与dcm发生呈负相关，心脏组织mm9_circ_008009表达下调促进了心肌重塑并引起慢性充血性心力衰竭(congestiveheartfailure，chf)的发生与发展。且已有研究将mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202命名为糖尿病诱导循环相关环状rna(diabetes induced circulationrelated circrna-junction sequence，dicar)。据上，本发明尝试将糖尿病诱导循环相关环状rna应用于对脑卒中的治疗。

技术实现思路

1、因此，基于以上背景，本发明将糖尿病诱导循环相关环状rna(dicar)应用于对脑卒中的治疗进行研究，研究结果表明了糖尿病诱导循环相关环状rna(dicar)的过表达不仅可减轻脑缺血再灌注造成的急性损伤，还可改善小鼠脑缺血再灌注所致的长期神经功能损伤，并可促进脑缺血再灌后血管新生。

2、因此本发明提供了下技术方案：

3、本发明的目标之一提供了：

4、环状rna在制备用于预防和/或治疗缺血性卒中药物中的应用，所述环状rna为mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202；

5、其中mm9_circ_008009的核苷酸序列为seq id no:1所示或反向互补序列；所述hsa_circ_0131202的核苷酸序列为seq id no:2所示或反向互补序列。

6、进一步地，所述环状rna可通过mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202过表达促进血管新生实现缺血性卒中治疗。

7、本发明的目的之二提供了：

8、一种用于预防和/或治疗缺血性卒中的药物，其包括有效量的促环状rna表达的试剂，所述环状rna为mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202；

9、其中mm9_circ_008009的核苷酸序列为seq id no:1所示或反向互补序列；所述hsa_circ_0131202的核苷酸序列为seq id no:2所示或反向互补序列。

10、进一步地，所述促环状rna表达的试剂为构建体或重组宿主细胞。

11、进一步地，所述构建体或重组细胞含有所述环状rna。

12、进一步地，所述构建体的载体为非致病性病毒载体。

13、进一步地，所述非致病性病毒载体为腺病毒载体、慢病毒载体或逆转录病毒载体。

14、本发明的目的之三提供了：

15、环状rna在制备用于预防和/或治疗脑血管疾病药物中的应用，所述环状rna为mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202；

16、其中mm9_circ_008009的核苷酸序列为seq id no:1所示或反向互补序列；所述hsa_circ_0131202的核苷酸序列为seq id no:2所示或反向互补序列。

17、进一步地，其包括有效量的促环状rna表达的试剂；

18、所述环状rna为mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202；

19、其中mm9_circ_008009的核苷酸序列为seq id no:1所示或反向互补序列；所述hsa_circ_0131202的核苷酸序列为seq id no:2所示或反向互补序列。

20、本发明的目的之四是提供了：

21、一种用于预防和/或治疗脑血管疾病的药物，其包括有效量的促环状rna表达的试剂；

22、所述环状rna为mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202；

23、其中mm9_circ_008009的核苷酸序列为seq id no:1所示或反向互补序列；所述hsa_circ_0131202的核苷酸序列为seq id no:2所示或反向互补序列。

24、进一步地，所述促环状rna表达的试剂为构建体或重组宿主细胞。

25、本发明的优点在于：

26、本发明通过将糖尿病诱导循环相关环状rna(dicar，包括mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202)应用于对缺血性卒中的治疗，研究表明了mm9_circ_008009和hsa_circ_0131202的过表达不仅可对可减轻脑缺血再灌注造成的急性损伤，还可改善小鼠脑缺血再灌注所致的长期神经功能损伤，并可促进脑缺血再灌后血管新生，此为糖尿病诱导循环相关环状rna应用于对缺血性脑卒中及其脑血管疾病的预防和治疗提供了依据基础，并且为缺血性脑卒中及其脑血管疾病的预防和治疗提供了新的思路与方向。