一种miR-3074-3p抑制剂及其应用

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种mir-3074-3p抑制剂及其应用。

背景技术：

1、龋病是导致牙体缺损最常见的原因，随着龋病的进展，牙体组织缺损扩大，浅则造成牙齿敏感症状，重则导致牙髓产生炎症进一步发展成牙髓病和根尖周病，不仅影响咀嚼功能，影响患者的身心健康，还会影响患者的美观。实际上，随着龋病的进展，牙髓牙本质复合体会产生生理性反应，牙髓间充质干细胞分化为成牙本质细胞形成修复性牙本质，阻断疾病进一步进展。如今，基于干细胞的组织工程性修复及组织再生越来越多被证明在组织再生领域拥有巨大的应用远景及临床价值，这为牙体组织缺损的组织工程性修复提供了契机，基于牙髓干细胞的组织再生是牙本质修复和牙齿再生的重要策略。

2、mir-3074首次报道于2015年，主要参与肿瘤发展、细胞代谢和组织修复。有研究表明mir-3074-3p不仅参与神经损伤的炎症反应和修复过程，而且可调节成肌细胞分化过程，改善肌肉再生，对于mir-3074-3p是否参与其他干细胞分化的生物学过程中仍未阐明。本发明首次发现mir-3074-3p参与调控牙髓干细胞成牙分化过程，可进一步用于成牙修复。

3、金纳米颗粒(aunps)是直径为1-100nm的小型纳米材料，具有独特的生化表面特性，稳定，易于合成，可调节尺寸，被聚乙烯亚胺(pei)包裹进行电荷负载时拥有更高的转运效率。作为小分子药物或生物大分子(如dna、sirna和mirna)的理想载体，pei-aunps可搭载各种功能分子用于组织再生。已有研究表明金纳米颗粒搭载mirnas能够发挥体内成骨功能，以金纳米颗粒搭载antagomir-3074-3p有望实现成牙修复。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出mir-3074-3p在制备调控牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用。

2、本发明还提出一种mir-3074-3p抑制剂。

3、本发明还提出一种组合物。

4、本发明还提出一种上述组合物的制备方法。

5、本发明还提出上述抑制剂和组合物的应用。

6、本发明还提出一种牙本质修复和再生方法。

7、根据本发明的一个方面，提出了mir-3074-3p在制备调控牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用。

8、在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p通过调控(i)-(iii)任一项调控牙髓干细胞成牙分化：

9、(i)促进或抑制牙髓干细胞矿化；

10、(ii)alp、col1、dmp-1和dspp中至少一种基因的表达；

11、(iii)促进或抑制牙本质修复和再生。

12、在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p的核苷酸序列如seq id no.2所示。

13、在本发明的一些实施方式中，所述产品包括药物或非药用制剂。

14、根据本发明的第二方面，提出了一种mir-3074-3p抑制剂，所述抑制剂用于抑制上述mir-3074-3p蛋白质的编码基因表达、或降解mir-3074-3p蛋白质、或降低mir-3074-3p蛋白质表达水平。

15、在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p抑制剂为靶向mir-3074-3p蛋白质的dsrna、mirna、核酶或shrna。

16、在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p抑制剂的核苷酸序列如seq idno.1所示。

17、根据本发明的第三方面，提出了一种组合物，所述组合物包括上述mir-3074-3p抑制剂。

18、在本发明的一些实施方式中，所述组合物还包括聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒(pei-aunps)。

19、在本发明的一些实施方式中，所述组合物还包括水凝胶。

20、在本发明的一些实施方式中，所述水凝胶包括gelma。

21、在本发明的一些实施方式中，所述mir-3074-3p抑制剂溶液与聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液的添加体积比为(1～7)：(1～3)。

22、根据本发明的第四方面，提出了一种上述组合物的制备方法，包括以下步骤：将mir-3074-3p抑制剂与聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液混合制备即得。

23、在本发明的一些实施方式中，所述方法还包括将mir-3074-3p抑制剂与聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液混合制备得到的复合物加入至水凝胶中进行紫外固化的步骤。

24、在本发明的一些实施方式中，所述聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液的制备包括以下步骤：将haucl4溶液与pei溶液混合，制备得到金纳米颗粒溶胶；将所述金纳米颗粒溶胶透析、浓缩得到所述述聚乙烯亚胺修饰金纳米颗粒溶液。

25、在本发明的一些实施方式中，所述haucl4溶液的浓度为12～15mm。

26、在本发明的一些实施方式中，所述pei溶液的质量浓度为0.5％～2％。

27、在本发明的一些实施方式中，所述透析采用的透析袋孔径等级为10万截留分子量。

28、在本发明的一些实施方式中，所述浓缩采用聚乙二醇固体浓缩。

29、在本发明的一些实施方式中，所述水凝胶的浓度为8％～12％。

30、根据本发明的第五方面，提出了上述抑制剂和组合物的应用，所述应用为在制备促进牙髓干细胞成牙分化的产品中的应用。

31、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备牙本质修复和再生的产品中的应用。

32、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备盖髓材料中的应用。

33、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备用于牙髓治疗产品中的应用。

34、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备alp表达促进剂中的应用。

35、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备col1表达促进剂中的应用。

36、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备dmp-1表达促进剂中的应用。

37、在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备dspp表达促进剂中的应用。

38、在本发明的一些实施方式中，所述产品包括药物或非药用制剂。

39、根据本发明的第五方面，提出了一种牙本质修复和再生方法，所述方法包括以下步骤：将上述抑制剂或组合物导入待修复的牙齿中。

40、在本发明的一些实施方式中，所述导入方式采用注射。

41、根据本发明的一些的实施方式，至少具有以下有益效果：本发明方案首次发现了mir-3074-3p在牙髓干细胞成牙分化过程中的调节作用，通过制备mir-3074-3p的抑制剂antagomir-3074-3p可促进牙髓干细胞成牙分化；在此基础上构建了antagomir-3074-3p/pei-aunps复合物，不仅具有良好的生物相容性，且在体外能有效促进人牙髓干细胞成牙分化。通过进一步构建antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物，发现其在大鼠盖髓模型中能有效促开髓孔处修复性牙本质形成。因此，利用antagomir-3074-3p/pei-aunps/gelma复合物，可体内促进修复性牙本质形成，进而可用于牙本质修复和再生性治疗，其对于盖髓治疗具有重要意义。