一种抑制口腔致病菌的益生菌剂及其应用的制作方法

本发明属于益生菌，涉及一种抑制口腔致病菌的益生菌剂及其应用，尤其涉及一种抑制口腔致病菌的益生菌剂及其在制备防治牙菌斑生成、防治牙周病和/或龋齿的产品中的应用。

背景技术：

1、牙菌斑是指黏附在牙齿表面，或者是口腔的软组织上的微生物群，其易在固体基底上形成的生物膜，所述固体基底例如牙齿的珐琅质、填充物、修复物、正牙器具或闭孔器。体内平衡失调、产酸细菌在口中的过度生长或数量增加会导致常见的口腔疾病的发展，即龋齿和牙周病。菌斑当中的细菌，跟口腔里的食物会发生作用，产酸、破坏牙釉质，引起牙龈炎、牙周炎。牙根管壁上或牙根顶部外壁上细菌生物膜的存在导致牙髓治疗的并发症和失败。另一种牙菌斑的是生成情形是口腔当中唾液中有糖蛋白，糖蛋白可以黏附在牙面上，黏附在牙面上以后形成一层膜，叫获得性膜；细菌易黏附在获得性膜上，如变形链球菌，其致病性强；获得性膜形成成熟后，大量的细菌在上面繁殖、生长，危害人体口腔以至于全身健康。因此，研究出可抑制牙菌斑生成及各种致病菌在口腔中定植技术成为日趋待解的一项新问题。

2、随着益生菌在食品、药物、生活用品中的广泛应用，口腔日化产品中相应添加益生菌菌株及益生菌组合物是解决上述问题的常规思路。生物膜由于其复杂的结构和众多的细菌适应机制，益生菌是对抗牙菌斑生成的有效措施。然而当下关于应用于口腔的灭活菌株重复且效果不佳，越来越多的研究试图通过微生物群中有益菌与致病菌的共聚反应防止获得性膜的形成。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种抑制口腔致病菌的益生菌剂及其应用，尤其提供一种抑制口腔致病菌的益生菌剂及其在制备防治牙菌斑生成、防治牙周病和/或龋齿的产品中的应用。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种抑制口腔致病菌的益生菌剂，所述抑制口腔致病菌的益生菌剂中的菌株包括灭活的保藏编号为cgmcc no.16131的格氏乳杆菌lactobacillusgasseri lg08菌株。

4、本发明创造性地开发了保藏编号为cgmcc no.16131的格氏乳杆菌lactobacillusgasseri lg08菌株的新用途，其能够与口腔致病菌例如牙龈卟啉单胞菌或变异链球菌发生明显的共聚反应，形成共聚体，减少牙菌斑的形成，进一步防治牙周病或龋齿。因此，该益生菌剂为治疗牙周病或龋齿提供了新的策略和思路，将其用于制备用于预防、缓解或治疗牙周疾病的产品具有很好的前景。另外，格氏乳杆菌是一种益生菌，其安全性高，且不易产生抗性。

5、优选地，所述抑制口腔致病菌的益生菌剂中的菌株还包括灭活的保藏编号为cgmcc no.23547的植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05菌株。

6、本发明还创造性地发现将lp05菌株与上述lg08菌株进行联用，能够进一步提高lg08菌株在抑制口腔致病菌方面的效果。

7、优选地，在所述益生菌剂中，lp05菌株与lg08菌株以灭活前的活菌数计，其比例为1:2-3:2，例如1:2、2:3、4:5、1:1、5:4、3:2等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

8、基于lp05菌株与lg08菌株的潜在相互作用关系，当两种菌株以上述特定的配比进行复合时，其在抑制口腔致病菌、防治口腔疾病方面的效果更加显著。

9、优选地，所述抑制口腔致病菌的益生菌剂中的菌株还包括灭活的保藏编号为cgmcc no.1.12731的副干酪乳杆菌lactobacillus paracasei lc86菌株。

10、本发明还创造性地发现将lc86菌株与上述lg08菌株进行联用，能够进一步提高lg08菌株在抑制口腔致病菌方面的效果。

11、优选地，在所述益生菌剂中，lc86菌株与lg08菌株以灭活前的活菌数计，其比例为1:3-1:1，例如1:3、2:5、1:2、2:3、1:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

12、基于lc86菌株与lg08菌株的潜在相互作用关系，当两种菌株以上述特定的配比进行复合时，其在抑制口腔致病菌、防治口腔疾病方面的效果更加显著。

13、优选地，所述抑制口腔致病菌的益生菌剂中的菌株包括灭活的保藏编号为cgmccno.16131的格氏乳杆菌lactobacillus gasseri lg08菌株、灭活的保藏编号为cgmccno.23547的植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05菌株和灭活的保藏编号为cgmccno.1.12731的副干酪乳杆菌lactobacillus paracasei lc86菌株。

14、lc86菌株、lg08菌株、lp05菌株三种菌株联用，其潜在的相互配合相互作用，使得益生菌剂具有更优越的抑制口腔致病菌、防治口腔疾病的效果。

15、优选地，在所述益生菌剂中，lp05菌株、lc86菌株与lg08菌株以灭活前的活菌数计，其比例为(2-3):(1-2):(2-3)。

16、优选地，所述口腔致病菌包括牙龈卟啉单胞菌、变异链球菌、具核梭杆菌、黏放线菌或伴放线放线杆菌中的任意一种或至少两种的组合。

17、牙菌斑导致牙周病的发生通常是由于口腔内存在了大量的微生物，其依附在牙齿上形成独特的结构，这独特的结构会使致病菌在一定程度上使人体的防御能力减弱，继发牙周病。而牙周病的致病菌公认的主要有牙龈卟啉单胞菌、变异链球菌、具核梭杆菌、黏放线菌、伴放线放线杆菌等，也是牙菌斑生成主导致病菌。这些致病菌协同可大大增强致牙菌斑的形成。

18、优选地，所述益生菌剂的剂型包括冻干粉剂、胶囊剂、片剂或颗粒剂。

19、本发明所涉及的益生菌剂的剂型不受限制，包括最常用的冻干粉剂，或进一步制得的胶囊剂、片剂或颗粒剂。

20、优选地，在所述益生菌剂中，灭活的lp05菌株、灭活的lg08菌株或灭活的lc86菌株的菌落数均不低于108cfu/g，例如108cfu/g、5×109cfu/g、109cfu/g、5×109cfu/g、1010cfu/g、5×1010cfu/g、1011cfu/g等；且水分含量低于5％，例如4％、3％、2％、1％、0.5％等，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

21、优选地，所述抑制口腔致病菌的益生菌剂中还包括保护剂。

22、优选地，所述保护剂选自脱脂乳、明胶、麦芽糊精、阿拉伯胶、右旋糖酐、藻胶钠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、乳糖、海藻糖、山梨醇或木糖醇中的任意一种或至少两种的组合。

23、优选地，所述益生菌剂中还包括功能助剂。

24、优选地，所述功能助剂包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、菊粉、螺旋藻、节旋藻、云芝多糖、水苏糖、聚葡萄糖、α-乳淸蛋白或乳铁蛋白中的任意一种或至少两种的组合。

25、在本发明中，当所述益生菌剂的剂型为冻干粉剂时，其制备方法包括：

26、(1)将lp05菌株种子液、lg08菌株种子液或lc86菌株种子液分别在培养基中35-40℃(例如36℃、37℃、38℃、39℃等)下培养，培养液离心获得菌泥；

27、(2)将菌泥分别与保护剂混合乳化，经过灭活处理后，冻干获得三种冻干粉剂，最后按比例将三种冻干粉剂混合，得到所述抑制口腔致病菌的益生菌剂；

28、或者，将菌泥按比例混合后再与保护剂混合乳化，灭活，冻干，得到所述抑制口腔致病菌的益生菌剂。

29、优选地，所述培养基可以选择mrs培养基。

30、所述mrs培养基的配方示例性地可以以浓度计包括：蛋白胨8-12g/l、牛肉膏8-12g/l、葡萄糖15-25g/l、乳糖10-20g/l、酵母粉3-7g/l、柠檬酸氢二铵1-3g/l、k2po4·3h2o2-3g/l、mgso4·7h2o 0.05-0.2g/l、mnso4 0.01-0.1g/l、吐温80 0.5-2ml/l、半胱氨酸盐酸盐0.1-1g/l。

31、优选地，所述种子液的培养时间独立地为18-24h。

32、优选地，所述灭活处理采用高温灭活处理，在115-125℃下灭活15-30min。

33、优选地，所述菌泥与保护剂的质量比为(3-5):(1-2)。

34、优选地，所述冻干采用真空冷冻干燥法。

35、第二方面，本发明提供根据第一方面所述的抑制口腔致病菌的益生菌剂在制备防治牙菌斑生成的产品中的应用。

36、第三方面，本发明提供根据第一方面所述的抑制口腔致病菌的益生菌剂在制备防治牙周病和/或龋齿的产品中的应用。

37、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

38、本发明创造性地开发了保藏编号为cgmcc no.16131的格氏乳杆菌lactobacillusgasseri lg08菌株的新用途，其能够与口腔致病菌例如牙龈卟啉单胞菌或变异链球菌发生明显的共聚反应，形成共聚体，减少牙菌斑的形成，进一步防治牙周病或龋齿。因此，该益生菌剂为治疗牙周病或龋齿提供了新的策略和思路，将其用于制备用于预防、缓解或治疗牙周疾病的产品具有很好的前景。另外，格氏乳杆菌是一种益生菌，其安全性高，且不易产生抗性。

39、本发明还创造性地开发了一种全新的益生菌复配方式，将格氏乳杆菌lactobacillus gasseri lg08菌株与植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05菌株和/或副干酪乳杆菌lactobacillus paracasei lc86菌株进行复配，发现能够相互配合、相互促进，在抑制口腔致病菌和防治牙周病的效果上协同增效，在使用菌量一致的情况下，比单一的lg08菌株在上述功效的发挥上显著提高。