用于降低抗体应答的致耐受性合成纳米载体的制作方法

本发明涉及包含免疫抑制剂和产生所不希望的体液免疫应答(例如，在受试者中)的一种抗原的mhc ii类限制性表位的合成纳米载体组合物、以及有关方法。提供的这些组合物和方法可以降低所不希望的体液免疫应答。这些组合物和方法允许通过apc有效摄取来使免疫应答向有利于降低发展对这些抗原特异的所不希望的体液免疫应答的方向转变。这些组合物和方法允许刺激致耐受性免疫应答，如通过减少抗原特异性的cd4+t细胞辅助。

背景技术：

1、抗体应答典型地需要cd4+t辅助细胞来建立生发中心反应并诱导同种型转换。降低cd4+t辅助细胞的数目和/或功能可以改善所不希望的抗体应答。然而，如此用广泛作用的常规免疫抑制剂药物可能不是令人希望的。另外，为了维持免疫抑制，免疫抑制剂药物疗法通常是一个终生的命题。令人遗憾的是，使用广泛作用的免疫抑制剂与严重副作用(如肿瘤、感染、肾毒性以及代谢紊乱)的风险相关联。因此，新的免疫抑制剂疗法将是有益的。

技术实现思路

1、在一方面，提供了一种组合物，该组合物包含(i)第一群体的合成纳米载体和(ii)第二群体的合成纳米载体，这些第一群体的合成纳米载体与免疫抑制剂偶联，该这些二群体的合成纳米载体与产生所不希望的体液免疫应答的一种抗原的mhc ii类限制性表位偶联。在一个实施例中，该第一群体和该第二群体是相同的群体。在另一个实施例中，该第一群体和该第二群体是不同的群体。

2、在一个实施例中，该抗原是在一个或多个受试者中产生或预期会产生所不希望的体液免疫应答的抗原。

3、在另一个实施例中，这些第一群体和/或第二群体的合成纳米载体还与该抗原的mhc i类限制性表位和/或b细胞表位偶联。在另一个实施例中，该组合物基本上不包含产生所不希望的体液免疫应答(例如，在受试者中)的抗原的b细胞表位。在一个实施例中，这些第一群体和/或第二群体的合成纳米载体与mhc ii类限制性表位偶联，并且在一些实施例中，与mhc i类限制性表位偶联，但基本上不包含产生所不希望的体液免疫应答(例如，在受试者中)的b细胞表位。

4、在另一个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是产生抗原特异性的cd4+t细胞增殖和/或活性或抗原特异性抗体。在另一个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是产生抗原特异性的b细胞增殖和/或活性。在多个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是在受试者中。

5、在另一个实施例中，这些免疫抑制剂包括一种抑制素、一种mtor抑制剂、一种tgf-β信号剂、一种皮质类固醇、一种线粒体功能抑制剂、一种p38抑制剂、一种nf-κβ抑制剂、一种腺苷受体激动剂、一种前列腺素e2激动剂、一种磷酸二酯酶4抑制剂、一种hdac抑制剂或一种蛋白酶体抑制剂。在另一个实施例中，该mtor抑制剂是雷帕霉素或一种雷帕霉素类似物。

6、在另一个实施例中，包含以上提到的这些表位的抗原与这些合成纳米载体偶联。在另一个实施例中，包含以上提到的这些表位的抗原的一部分与这些合成纳米载体偶联。在再另一个实施例中，与这些合成纳米载体偶联的抗原的部分可以单独地是表位。在另一个实施例中，该抗原是一种过敏原、自身抗原或治疗性蛋白，或与炎性疾病、自身免疫疾病、器官或组织排斥或移植物抗宿主病相关联。

7、在另一个实施例中，当向受试者给予时，该组合物处于有效降低对该抗原的所不希望的体液免疫应答的量。

8、在另一个实施例中，平均在该第一和/或第二群体的合成纳米载体上的这些免疫抑制剂和/或表位的负载是在0.0001％与50％之间(重量/重量)。在另一个实施例中，平均在该第一和/或第二群体的合成纳米载体上的这些免疫抑制剂和/或表位的负载是在0.1％与10％之间(重量/重量)。

9、在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括脂质纳米颗粒、聚合物纳米颗粒、金属纳米颗粒、基于表面活性剂的乳液、树枝状化合物、巴基球、纳米线、病毒样颗粒或肽或蛋白质颗粒。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括脂质纳米颗粒。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括脂质体。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括金属纳米颗粒。在另一个实施例中，这些金属纳米颗粒包括金纳米颗粒。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括聚合物纳米颗粒。在另一个实施例中，这些聚合物纳米颗粒包括非甲氧基封端的普朗尼克聚合物。在另一个实施例中，这些聚合物纳米颗粒包括一种聚酯、与一种聚醚偶联的一种聚酯、聚氨基酸、聚碳酸酯、聚缩醛、聚缩酮、多糖、聚乙基噁唑啉、或聚乙烯亚胺。在另一个实施例中，该聚酯包括一种聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物或聚己酸内酯。在另一个实施例中，这些聚合物纳米颗粒包括一种聚酯和与一种聚醚偶联的一种聚酯。在另一个实施例中，该聚醚包括聚乙二醇或聚丙二醇。

10、在另一个实施例中，使用对该第一和/或第二群体的合成纳米载体进行的动态光散射而获得的粒度分布的平均值是大于100nm的直径。在另一个实施例中，该直径大于150nm。在另一个实施例中，该直径大于200nm。在另一个实施例中，该直径大于250nm。在另一个实施例中，该直径大于300nm。

11、在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体的长宽比大于1∶1、1∶1.2、1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶5、1∶7或1∶10。

12、在另一个实施例中，该组合物进一步包含一种药学上可接受的赋形剂。

13、在另一方面，提供了一种包含在此提供的任何这些组合物的剂型。

14、在另一方面，提供了一种方法，该方法包括给予在此提供的任何组合物或剂型。在一个实施例中，对该抗原的所不希望的体液免疫应答在受试者中被降低。在另一个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是抗原特异性的抗体产生。在另一个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是抗原特异性的cd4+t细胞增殖和/或活性。在另一个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是b细胞增殖和/或活性。

15、在另一方面，提供了一种包括向受试者给予一种组合物的方法，该组合物包含(i)第一群体的合成纳米载体和(ii)第二群体的合成纳米载体，这些第一群体的合成纳米载体与免疫抑制剂偶联，这些第二群体的合成纳米载体与产生所不希望的体液免疫应答(例如，在受试者中)的一种抗原的mhc ii类限制性表位偶联，其中该组合物处于有效降低受试者中针对该抗原的所不希望的体液免疫应答的量。在另一方面，提供了一种包括通过给予一种组合物而降低受试者中针对抗原的所不希望的体液免疫应答的方法，该组合物包含(i)第一群体的合成纳米载体和(ii)第二群体的合成纳米载体，这些第一群体的合成纳米载体与免疫抑制剂偶联，这些第二群体的合成纳米载体与该抗原的mhc ii类限制性表位偶联。在另一方面，提供了一种方法，该方法包括根据一种治疗方案(protocol)向受试者给予一种组合物，该治疗方案先前已经显示降低一个或多个测试受试者中针对一种抗原的所不希望的体液免疫应答；其中该组合物包含(i)第一群体的合成纳米载体和(ii)第二群体的合成纳米载体，这些第一群体的合成纳米载体与免疫抑制剂偶联，这些第二群体的合成纳米载体与该抗原的mhc ii类限制性表位偶联。

16、在一个实施例中，该第一群体和第二群体是相同的群体。在另一个实施例中，该第一群体和第二群体是不同的群体。

17、在另一个实施例中，该方法进一步包括提供或鉴定该受试者。

18、在另一个实施例中，这些第一群体和/或第二群体的合成纳米载体还与该抗原的mhc i类限制性表位和/或b细胞表位偶联。在另一个实施例中，该组合物基本上不包含产生所不希望的体液免疫应答(例如，在受试者中)的抗原的b细胞表位。在一个实施例中，这些第一群体和/或第二群体的合成纳米载体与mhc ii类限制性表位偶联，且在一些实施例中，与mhc i类限制性表位偶联，但基本上不包含产生所不希望的体液免疫应答(例如，在受试者中)的b细胞表位抗原。

19、在另一个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是产生抗原特异性的cd4+t细胞增殖和/或活性和/或抗原特异性抗体。在另一个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是产生抗原特异性的b细胞增殖和/或活性。在多个实施例中，该所不希望的体液免疫应答是在受试者中。

20、在另一个实施例中，这些免疫抑制剂包括一种抑制素、一种mtor抑制剂、一种tgf-β信号剂、一种皮质类固醇、一种线粒体功能抑制剂、一种p38抑制剂、一种nf-κβ抑制剂、一种腺苷受体激动剂、一种前列腺素e2激动剂、一种磷酸二酯酶4抑制剂、一种hdac抑制剂或一种蛋白酶体抑制剂。在另一个实施例中，该mtor抑制剂是雷帕霉素或一种雷帕霉素类似物。

21、在另一个实施例中，包含以上提到的这些表位的抗原与这些合成纳米载体偶联。在另一个实施例中，包含以上提到的这些表位的抗原的一部分与这些合成纳米载体偶联。在再另一个实施例中，与这些合成纳米载体偶联的抗原的部分可以单独地是表位。在另一个实施例中，该抗原是一种过敏原、自身抗原或治疗性蛋白，或与炎性疾病、自身免疫疾病、器官或组织排斥或移植物抗宿主病相关联。

22、在另一个实施例中，平均在该第一和/或第二群体的合成纳米载体上的这些免疫抑制剂和/或表位的负载是在0.0001％与50％之间(重量/重量)。在另一个实施例中，平均在该第一和/或第二群体的合成纳米载体上的这些免疫抑制剂和/或表位的负载是在0.1％与10％之间(重量/重量)。

23、在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括脂质纳米颗粒、聚合物纳米颗粒、金属纳米颗粒、基于表面活性剂的乳液、树枝状化合物、巴基球、纳米线、病毒样颗粒或肽或蛋白质颗粒。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括脂质纳米颗粒。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括脂质体。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括金属纳米颗粒。在另一个实施例中，这些金属纳米颗粒包括金纳米颗粒。在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体包括聚合物纳米颗粒。在另一个实施例中，这些聚合物纳米颗粒包括非甲氧基封端的普朗尼克聚合物。在另一个实施例中，这些聚合物纳米颗粒包括一种聚酯、与一种聚醚偶联的一种聚酯、聚氨基酸、聚碳酸酯、聚缩醛、聚缩酮、多糖、聚乙基噁唑啉、或聚乙烯亚胺。在另一个实施例中，该聚酯包括一种聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物或聚己酸内酯。在另一个实施例中，这些聚合物纳米颗粒包括一种聚酯和与一种聚醚偶联的一种聚酯。在另一个实施例中，该聚醚包括聚乙二醇或聚丙二醇。

24、在另一个实施例中，使用对该第一和/或第二群体的合成纳米载体进行的动态光散射而获得的粒度分布的平均值是大于100nm的直径。在另一个实施例中，该直径大于150nm。在另一个实施例中，该直径大于200nm。在另一个实施例中，该直径大于250nm。在另一个实施例中，该直径大于300nm。

25、在另一个实施例中，该第一群体和/或第二群体的合成纳米载体的长宽比大于1∶1、1∶1.2、1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶5、1∶7或1∶10。

26、在另一个实施例中，向受试者给予一个或多个维持剂量的包含该第一群体和第二群体的合成纳米载体的组合物。在另一个实施例中，该方法进一步包括在给予包含该第一群体和第二群体的合成纳米载体的组合物之前和/或之后评定受试者中的所不希望的体液免疫应答。在另一个实施例中，该评定包括确定抗原特异性的cd4+t细胞增殖和/或活性的水平和/或抗原特异性抗体产生的水平和/或抗原特异性的b细胞增殖和/或活性的水平。

27、在另一个实施例中，该受试者具有或正处于具有炎性疾病、自身免疫性疾病、过敏症、或移植物抗宿主病的风险。在另一个实施例中，受试者已经经历或将要经历移植。在另一个实施例中，该受试者已经接受、正在接受或将要接受治疗性蛋白。

28、在另一个实施例中，该给予是通过静脉内、腹膜内、透粘膜、经口、皮下、肺部、鼻内、皮内或肌肉内给予而进行的。在另一个实施例中，通过吸入或静脉内、皮下或透粘膜给予来进行给予。

29、在另一方面，提供了一种方法，该方法包括(i)产生第一群体的合成纳米载体和(ii)产生第二群体的合成纳米载体，这些第一群体的合成纳米载体与免疫抑制剂偶联，这些第二群体的合成纳米载体与在受试者中产生或预期如此产生所不希望的体液免疫应答的一种抗原的mhc ii类限制性表位偶联。

30、在一个实施例中，该第一群体和第二群体是相同的群体。在另一个实施例中，该第一群体和第二群体是不同的群体。

31、在另一个实施例中，该方法进一步包括确保该第二群体的合成纳米载体基本上不包含产生所不希望的体液免疫应答的抗原的b细胞表位。在另一个实施例中，该方法进一步包括制造一种包含该第一群体和第二群体的合成纳米载体的剂型。在另一个实施例中，该方法进一步包括制造一种组合物，该组合物包含该第一群体和第二群体的合成纳米载体或可供受试者给予的该剂型。在另一个实施例中，该方法进一步包括评定使用一种组合物或其剂型时的所不希望的体液免疫应答(例如，在受试者中)的水平，该组合物包含该第一群体和第二群体的合成纳米载体。在另一个实施例中，该评定包括确定cd4+t细胞增殖和/或活性的水平和/或抗原特异性抗体产生的水平和/或抗原特异性的b细胞增殖和/或活性的水平。

32、在另一个实施例中，产生的该第一群体和第二群体的合成纳米载体是如在此提供的任何这些组合物和方法中所定义的。

33、在另一方面，提供了一种用于生产一种组合物或剂型的工艺，该工艺包括以下步骤：(i)将第一群体的合成纳米载体与免疫抑制剂偶联，和(ii)将第二群体的合成纳米载体与产生所不希望的体液免疫应答的一种抗原的mhc ii类限制性表位偶联。在一个实施例中，该工艺包括在此提供的任何方法中所定义的步骤。

34、在另一方面，提供了一种通过在此提供的任何方法或工艺可获得的组合物或剂型。

35、在另一方面，在此提供的任何组合物或剂型可以用于治疗或预防。

36、在另一方面，在此提供的任何这些组合物或剂型可以用于降低在受试者中针对一种抗原的所不希望的体液免疫应答、治疗或预防过敏症、自身免疫性疾病、炎性疾病、器官或组织排斥或移植物抗宿主病的方法中或用于在此提供的任何方法中。

37、在另一方面，提供了在此提供的任何这些组合物或剂型用于制造一种药剂的用途，该药剂用于降低在受试者中针对一种抗原的所不希望的体液免疫应答、治疗或预防过敏症、自身免疫性疾病、炎性疾病、器官或组织排斥或移植物抗宿主病的方法中或用于在此提供的任何方法中。

38、在另一方面，提供了一种包含在此提供的任何这些组合物的剂型。

39、在此提供的任何这些组合物和方法的一个实施例中，作为包含以上提到的这些表位的蛋白质的抗原可以与这些合成纳米载体偶联。在另一个实施例中，包含以上提到的这些表位、但包含位于这一个或多个表位的一端或两端侧面的另外氨基酸的多肽或肽可以与这些合成纳米载体偶联。在另一个实施例中，这些表位本身与这些合成纳米载体偶联。