一种皮肤护理液及其制备方法与应用与流程

本发明属于皮肤护理，尤其涉及一种皮肤护理液及其制备方法与应用。

背景技术：

1、妊娠纹的形成主要受妊娠期荷尔蒙的影响，加之腹部膨隆至使皮下弹力纤维与胶原纤维损伤或断裂，腹部皮肤变薄，出现一些宽窄不同、长短不一的粉红色或紫红色的波浪状花纹。分娩后，这些花纹会逐渐消失，留下白色或银白色的有光泽的瘢痕线纹，即妊娠纹。妊娠纹主要出现在腹壁上，也可能出现在大腿内外侧、臀部、胸部、后腰部及手臂等处。初产妇的妊娠纹最为明显，一旦出现妊娠纹就不易消失，严重影响了妇女产后的体态和身心健康。

2、妊娠纹初期表现为“红色纹”阶段(淡红或紫红色)，该阶段相对容易修复，一般出现在产后6个月以内，部分患者甚至能够自愈；多数患者，其妊娠纹在产后6～12月内，一般情况下会逐渐进展为“暗红色+褐色纹”形态，此时肌肤自愈能力显著减弱；随即会进一步恶化，逐渐变白进入“难治愈型”阶段，10年以上难治愈妊娠纹，均为“银色纹+白凹纹”形态，多数情况会伴随患者终身无法去除，目前市面尚无有效产品或技术加以治疗。

3、妊娠纹主要因真皮层纤维蛋白断裂及后续色素沉着形成断裂纹，因此促进真皮层细胞的再生是修复之关键。传统化学产品多以润滑、保湿、滋润为主，无细胞修复功能；部分含有修复因子的产品因成分单一、含量低、易失活、分子量大难吸收等缺点难以达到预期功效。

4、脐带组织内含有丰富的间充质干细胞(msc)，取材方便，免疫原性低，目前已证明msc可以通过旁分泌机制或以囊泡包裹形式分泌大量细胞因子作用于受损部位，进而促进组织修复，也被用于皮肤损伤的修复及美容护肤。

5、胞外囊泡是一种由不同细胞在正常或病理状态下分泌的微小囊泡，直径在30～150nm，具有脂质双层膜结构。胞外囊泡主要参与细胞通讯和维持组织稳态等生物学功能，干细胞来源的外囊泡在组织再生方面具有良好的临床应用前景，并且具有良好的生物兼容性，为其在医美领域的应用奠定了重要的生物学理论基础。

6、有研究表明脐带提取的胞外囊泡通过膜融合或者内吞作用后将生物活性物质转运至靶细胞，介导细胞间通讯并影响靶细胞功能，还具有抑制炎症反应、免疫调节、血管生成、参与组织修复的功能，具有稳定、安全、保存方便等特性。

技术实现思路

1、本发明的首要目的在于提供一种皮肤护理液。

2、本发明的再一目的在于提供上述皮肤护理液的制备方法。

3、本发明的另一目的在于提供上述皮肤护理液的应用。

4、本发明是这样实现的，一种皮肤护理液，该皮肤护理液包括脐带间充质干细胞来源的胞外囊泡浓缩液a以及基底液b；所述胞外囊泡浓缩液a中干细胞囊泡的浓度为1×109～10/ml，所述胞外囊泡浓缩液a、基底液b的体积比为0.1～50：1；

5、所述基底液b包括以下按体积份计：

6、

7、

8、本发明进一步公开了上述皮肤护理液的制备方法，该方法包括以下步骤：

9、(1)培养脐带间充质干细胞；

10、(2)从脐带间充质干细胞培养物中提取胞外囊泡浓缩液a，4℃保存；

11、(3)配制基底液b；

12、(4)在使用时，将所述胞外囊泡浓缩液a作为皮肤护理液或与基底液b混合搭配为皮肤护理液。

13、优选地，在步骤(1)中，所述脐带间充质干细胞的培养过程为：

14、采集足月剖宫产新生儿脐带剪成2～3cm小段，清洗后剥剪至1mm2小块，均匀铺于培养瓶中，置于37℃、5％co2浓度的培养箱中培养，8～24h内加入15ml完全培养基覆盖组织块，培养至第五天半换液，此后每隔2～3天换液；

15、细胞融合度达到70～80％时，吸出组织块加到一个新的培养瓶中，补加培养基到15ml，1～2天后观察新的细胞从组织块周围爬出，融合度达到70％～80％时进行传代，记为p1；

16、持续传代操作，获得二次贴壁细胞的p2代到p5代作为备用的脐带间充质干细胞。

17、优选地，步骤(2)中的胞外囊泡浓缩液a以及步骤(3)基底液b中的干细胞提取物的制备包括以下步骤：

18、将生长状态良好的5×106脐带间充质干细胞接种至细胞培养皿中，加入无血清的商品化干细胞培养基，细胞的融合度达到80％～90％时，收集培养上清液1；

19、将上清液1在4℃、以2000g离心8～10min去除完整细胞和死细胞碎片，获得上清液2；

20、将上清液2在4℃、以10000g离心10min，用0.22μm滤器过滤，得到滤出液1；

21、将滤出液1使用100kd超滤柱进行浓缩，得到含干细胞外囊泡浓度为1×109～10/ml的胞外囊泡浓缩液a，同时获得非浓缩状态的滤出液2；

22、将滤出液2使用10kd超滤柱再次进行浓缩，得到干细胞提取物。

23、本发明进一步公开了上述皮肤护理液在制备修复妊娠纹的护肤品中的应用。

24、本发明进一步公开了上述皮肤护理液在制备皮肤ii度烧伤及疤痕修复药物中的应用。

25、本发明克服现有技术的不足，提供一种皮肤护理液及其制备方法与应用。本发明皮肤护理液包括脐带间充质干细胞来源的胞外囊泡浓缩液a、基底液b；其中，胞外囊泡浓缩液a中，包括但不限于干细胞囊泡，囊泡内含活性因子，具有促进真皮层细胞生长、修复真皮层细胞损伤等作用；基底液b的各组分主要是保湿、消炎、滋润、促进有效活性成分穿透表皮到达皮下部位的作用，同时也包含部分干细胞来源的游离活性因子成分，即干细胞提取物，而基底液b的保湿、滋润作用又可以促进干细胞囊泡在皮肤表层及真皮层的均匀分布，有利于皮肤的吸收、利用。

26、在本发明中，基底液b中各组分的主要具体功能表现为：甘油三醇的作用是：保湿，润滑；氮酮的作用是：保湿滋润、抗氧化、舒缓镇静、促吸收、抗菌消炎；维生素e的作用是：抗氧化、修复再生、抗炎镇静、促吸收、提亮肤色；卵磷脂的作用是：促进成分渗透、保湿、锁水、滋润、修复皮肤屏障；胆固醇的作用是：保湿滋润、柔软光滑肌肤、抗炎、增强皮肤弹性、促进成分渗透和抗氧化；玻尿酸的作用是：保湿补水、增加皮肤弹性、减少细纹和皱纹、改善肤色和肤质以及修复受损皮肤；吐温的作用是：乳化稳定、增稠和调节质地、渗透促进、调节表面张力；山茶油的作用是：保湿滋润、抗氧化、抗炎镇静、修复再生、抗菌；

27、本发明所得皮肤护理液用于制备修复腹部皮肤的妊娠纹的护肤品，该产品也可用于制备皮肤ii度烧伤及疤痕修复的药物。

28、相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：

29、(1)本发明通过超滤得到脐带间充质干细胞来源的胞外囊泡浓缩液a，最大限度保留了促进细胞生长的营养成分、rna(核糖核酸)、酶和活性因子等活性物质，去除活细胞、大分子的蛋白、细胞碎片等难吸收成分；基底液b中含有干细胞来源的非囊泡游离活性因子浓缩组分及各类辅助成分；该胞外囊泡浓缩液a与基底液b进行科学配比使用，具有多重功效，包括消炎、保湿、润滑等，达到愈伤、修复、滋润的多重功效，并能有效促进难治性的妊娠纹修复；

30、(2)本发明皮肤护理液还能够有效实现ii度烧伤创面修复，及创面部位的疤痕组织、皱纹和皮肤问题的修复，效果显著。