一种蒿甲醚-环糊精包合物的制备及其在洗发乳中的应用

本发明涉及药物领域，具体涉及一种具有水溶性的蒿甲醚-环糊精包合物的制备方法及其在洗发剂中的应用。

背景技术：

1、蒿甲醚是青蒿类单体化合物，该原料药在水溶液中溶解度较低，且药物释放速度相对缓慢，而负载环糊精纳米的蒿甲醚，可明显提高药物释放速度，国内有学者研究环糊精纳米海绵的蒿甲醚，在5分钟蒿甲醚的累积释放可达到85%，有明显的快速释放作用（环糊精纳米海绵及其蒿甲醚载药系统的研究，研究生 徐江慧，导师 张继稳 ，安徽中医药大学，2017届硕士研究生学位论文）。但环糊精纳米海绵-蒿甲醚包合物，因环糊精纳米海绵是多个环糊精分子的聚合物，其分子量比单个环糊精分子大，不利于透皮吸收，所以探索研究分子量相对较小的环糊精-蒿甲醚包合物，既容易透皮吸收，又可以稳定地释放药物，这些特性对于洗发剂的开发有极其重要意义。对治疗头皮脂溢性皮炎及躯干的花斑癣等糠秕孢子菌感染性疾病既有抗菌作用，又有抗炎作用。

2、蒿甲醚除了有抗疟原虫外，还具有抗炎作用。国内外多项实验研究表明，青蒿素及其衍生物可通过阻断nf-κb的上游若干信号转导通路，从而抑制下游促炎因子的释放[1]，包括il-2、il-6、ifnγ等细胞因子[2-5]，临床已经用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、玫瑰痤疮等免疫相关性疾病。

3、申请人长期致力于青蒿素及其衍生物研究，近年本团队研究发现，（1）蒿甲醚可以抑制毛囊蠕形螨活性[6]，且蒿甲醚乳剂外用治疗玫瑰痤疮有效且复发率低[7]，（2）蒿甲醚对丙酸痤疮杆菌有显著的抑制作用[8]且治疗痤疮有良效[9]。（3）近年研究发现脂溢性皮炎与糠秕孢子菌、丙酸痤疮杆菌及毛囊蠕形螨感染相关[10]。我们在试制蒿甲醚洗发剂时发现，蒿甲醚水溶性脂溶性均较低，配制有效浓度的洗发乳工艺较难。为此我们进行蒿甲醚-环糊精包合物研究，以便提高其溶解度，用于洗发乳的炎研发。

4、环糊精是一类由葡萄糖单元组成，各单元依靠糖苷键相连，形成的“筒状”结构。分子的羟基，位于桶状结构的外边，有亲水性；而氢原子位于圆筒样结构腔内，具有腔内疏水特性，可容纳合适分子量的疏水性化合物，形成包合物。该包合物提高了在水溶液中的溶解度。将含有6,7,8个葡萄糖单元的环糊精分别称为α环糊精、β环糊精、γ环糊精。一般认为β环糊精腔内可以容纳小于400dol的分子，而蒿甲醚分子量为298.37，可用于该包合物制作。

技术实现思路

1、为了克服蒿甲醚在洗发乳中水溶性低的不足，本发明首先需提供一种具有水溶性的蒿甲醚-环糊精包合物的制备方法。

2、本发明的另一个目的是在于提供的蒿甲醚-环糊精包合物，能提供蒿甲醚的水溶性与配伍性，用于制备洗发乳剂。

3、本发明提供的水溶性的蒿甲醚-环糊精包合物，是由蒿甲醚、环糊精及络合物组成。

4、本发明提供的具有水溶性的茶碱-环糊精包合物，按照质量百分比计，包括如下组分：蒿甲醚15-20%，环糊精60-70%，含乙二胺四乙酸15-20%。

5、优选地，在所述具有水溶性的蒿甲醚-环糊精包合物组合物，蒿甲醚与环糊精的摩尔比为1:1。

6、环糊精优选β-环糊精。

7、络合剂可选乙二胺四乙酸（edta）、聚丙烯酸钠（paas）、聚乙烯吡咯烷酮（pvp）中的一种或以上，优选为乙二胺四乙酸（edta。

8、蒿甲醚-环糊精包合物的颗粒直径为30-180nm。

9、本发明提供的制备蒿甲醚-环糊精包合物，含下列步骤。

10、（1）将蒿甲醚加入无水乙醇中，混匀并充分溶解，配制成蒿甲醚乙醇溶液。

11、（2）将环糊精及络合剂加入去离子水中，混合均匀，得到环糊精络合物水溶液，然后边搅拌边加入蒿甲醚乙醇溶液，充分搅匀，得到混合液。

12、（3）将混合液蒸发，除去乙醇，得到蒿甲醚-环糊精包合物，然后冷冻干燥，得到水溶性的蒿甲醚-环糊精包合物。

13、所述的蒿甲醚乙醇溶液中，蒿甲醚的浓度为25-75mm，优选蒿甲醚浓度为50mm。

14、所述的环糊精水溶液，环糊精的浓度为25-200mm，优选环其浓度为50mm。

15、所述的环糊精水溶液中，络合物的浓度为20-50mm，优选其50mm。

16、所述的环糊精水溶液与蒿甲醚乙醇溶液的体积比为1:1。

17、所述的搅拌的温度为35-550c,搅拌的时间为12-48小时，搅拌速率为200-800r/min。优选地混合温度为370c，搅拌混合时间为24小时，搅拌混合的速率为700r/min。

18、相比现有技术，本发明优点如下：本发明具有水溶性的蒿甲醚-环糊精包合物，与蒿甲醚相比提高了在水溶液中的溶解度，同时具备良好的稳定性。

19、本发明的具有水溶性的蒿甲醚和环糊精包合物，可以与多种洗发剂原料进行复配，显示出具有良好的配伍性。

20、本发明利用蒿甲醚-环糊精包合物技术，提供了制备所述蒿甲醚-环糊精包合物的方法，该方法制备工艺简单，且用时较短，利于工业生产。

21、蒿甲醚-环糊精包合物的对糠秕孢子菌标准菌株的抑菌作用。

22、 实验药物 蒿甲醚购于华武制药；酮康唑购于上海麦克林生化科技股份有限公司。

23、实验菌株 马拉色菌标准株(malassezia furfur),菌种编号:bncc 337308,购买于北京北纳创联生物技术研究院（中国普通微生物菌种保存分中心）。

24、实验试剂 麦芽浸粉购于北京奥博星生物技术有限公司；牛胆汁粉、甘油单油酸酯、吐温40、琼脂、麦芽糖、酵母浸膏、葡萄糖均购于上海麦克林生化科技股份有限公司。二甲基亚砜购于安徽省明光市明科实验器材经营部。

25、实验仪器 utp-313电子天平（上海花潮电器有限公司）；dnp-9082电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）；bsc-1100ⅱb2-x生物安全柜（济南鑫贝西生物技术有限公司）；xfs-280cb手提式压力蒸汽灭菌器（浙江新丰医疗器械有限公司）；zc-mcf麦氏比浊仪（北京哲成科技有限公司）。

26、马拉色菌固体培养基配方 麦芽浸粉40g，牛胆汁粉20g，甘油单油酸酯2.5g，吐温40 10g，琼脂15g，蒸馏水1.0l；马拉色菌液体培养基:麦芽糖20g，酵母浸膏2g，葡萄糖20g，橄榄油20g，蒸馏水1.0l。

27、培养基制备与菌株活化 按以上比例称取各成分，待其充分融解后121℃灭菌15min,制成马拉色菌固体培养基。糠秕马拉色菌标准菌株活化 吸取适量无菌生理盐水溶解菌粉,均匀涂布于固体培养基上，置于30℃培养箱。

28、菌悬液的制备 将糠秕马拉色菌标准株接种于固体培养基上,每72h传代培养1次，传代2次，制成菌悬液，用麦氏比浊仪调整为0.5个麦氏单位，再用液态培养基稀释10倍，此时菌含量为(1.0~2.0)x106cfu/ml。

29、药液制备 用dmso溶解稀释蒿甲醚至10000μg/m,用dmso溶解稀释酮康唑至250μg/ml，再用纯水将其稀释十倍，然后倍比稀释。

30、抑菌活性的测定 于马拉色菌固体培养基平板表面接种0.1 ml稀释好的菌悬液并涂布均匀，用直径6mm无菌打孔器打孔；将蒿甲醚、酮康唑稀释成不同浓度的药液分别加入到不同孔内，加满为止，放入30℃恒温培养箱中培养48h。

31、固体培养结果判读 用数显游标卡尺测量抑菌圈直径，分别计算出每种药液不同浓度的抑菌圈直径平均值与标准差。室内质控：阳性对照接种菌悬液,不含药液；阴性对照不接种菌悬液。

32、微量药敏板制备与接种 取96孔微量板第2孔至第11孔加培养基100μl，第1孔加入200μl药液，按照倍比稀释的方法，从每一行第1孔吸出100μl药液加入相应的第2孔，混合均匀后，从第2孔吸出100μl药液加入相应的第3 孔，以此类推，至第10孔混合均匀后，将吸出的100μl药液舍弃。每孔第 1 列至第 11 列加制备好的菌液100μl。第11孔为加液体培养基和菌悬液的阳性对照,第12孔为仅含液体培养基的阴性对照。最后在每孔中加入马拉色菌菌悬液各100μl。第一排为蒿甲醚组、第2排为酮康唑组。蒿甲醚浓度分别是10000、5000、2500、1250、625、312.5、156、78、39、19.5μg/ml，酮康唑浓度为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.91、1.95μg/ml。dmso终浓度<1%，经过对照实验，此浓度不能抑制马拉色菌生长。上述实验板放入30℃恒温箱培养48小时。

33、微量药敏板结果判读 48h后观察菌落生长情况，以阳性对照孔生长良好为准，取无肉眼可见菌生长的最低药物浓度孔位作为该试验的mic。质控孔不含药液,加100μl菌悬液作为阳性对照孔。以不含菌悬液的100ul药液作为阴性对照孔。

34、蒿甲醚及酮康唑对马拉色菌以抑菌圈直径和mic表示，数据采用excel进行统计分析，计量资料采用x+s表示。

35、琼脂平板扩散法(打孔法)实验结果

36、图1为用琼脂平板扩散法（打孔法）分别测定了不同浓度的蒿甲醚及酮康唑对马拉色菌的抑菌作用的部分照片。先后测量了上述药物的抑菌直径，重复3次实验，结果见表1。

37、表1 三种青蒿类药物对糠秕马拉色菌的抑菌直径结果（x±s）mm

38、微量液基稀释法实验结果

39、蒿甲醚在96孔板药敏情况见表2，肉眼及放大镜观察，孔液体表面清澈无菌生长用“-”表示，有菌生长用“+”表示。阳性对照孔未加药液，阴性对照孔未加菌液。青蒿提取物mic为10000μg（10mg）/ml，青蒿琥酯mic为625μg/ml，蒿甲醚mic为625μg/ml，对照组酮康唑的mic为31.25μg/ml，详见表2。表2 三种青蒿药物对糠秕马拉色菌的最小抑菌浓度

40、表2 三种青蒿药物对糠秕马拉色菌的最小抑菌浓度

41、结论：本研究通过琼脂平板扩散法及微量液基稀释法，证实了蒿甲醚在体外对马拉色菌都有不同程度的抑制作用，其抑菌效果与药物浓度呈正相关，蒿甲醚的mic均为625μg/ml，明显低于上述文献报道的石膏样小孢子菌、玫瑰毛癣菌、红色毛癣菌等。为蒿甲醚洗发香波治疗头皮脂溢性皮炎提供了用药浓度依据，蒿甲醚在抗真菌的同时，还有抗炎止痒作用，使其优于其他抗真菌药物。

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