一种微藻的提取物应用于医疗的方法与流程

本发明属于生物，特别涉及一种微藻的提取物、组合物及应用于医疗的方法。

背景技术：

1、脂溢性皮炎是在皮脂溢出基础上所发生的一种慢性丘疹磷屑性炎症性疾病，典型的表现为黄红色斑片或丘疹，上覆有油腻性鳞屑或者痂皮，并伴有不同程度的瘙痒，常见于皮脂腺较多的区域和皱褶部位。一般脂溢性皮炎可分为婴儿脂溢性皮炎和成人脂溢性皮炎，婴儿脂溢性皮炎常发生在生后第1个月，皮损多在头皮、额部、眉间及双颊部，为溢出性红色斑片，上有黄痂；而成人一般脂溢性皮炎表现：油性也有是干性或者混合性、瘙痒，脱屑等皮肤表面症状表现，红斑较明显。

2、脂溢性皮炎的病因仍不明确，但其发病与诸多因素有关。大量的研究表明，脂溢性皮炎的发病与马拉色菌感染、活跃的皮脂腺、免疫异常、遗传等因素有着密不可分的关系。该病反复发作，给患者的生活造成困扰，极大地影响了患者的生活质量，甚至影响也理健康。

3、长期以来，因该病顽固难治，仍被列为当今世界皮肤科领域的重要科研课题，也是全世界皮肤科重点防治疾病之一，如何缓解病者的痛苦或者根治脂溢性皮炎已是世界医学领域的一大难题。目前西医在脂溢性皮炎治疗上，局部治疗以去脂、杀菌、消炎和止痒为原则，多以抗真菌药、皮质类固醇激素及维甲酸类药物为主，口服治疗可采用b族维生素、四环素类抗生素以及抗组胺药等，但治疗效果欠佳，且容易反复发作、无法根除。那么，如何找到一种可有效治疗脂溢性皮炎的药物使我们目前急需解决的问题。

4、微藻是单细胞生物，其生活在海洋和新鲜水域中，并且能够进行光合作用。微藻产生大气层中约一半的氧气。常见的微藻类型有硅藻、绿藻和金藻。微藻通过利用阳光和无机物（例如，二氧化碳、水、氮、磷）产生碳水化合物、蛋白质和脂肪酸等有机物。最近，对可持续世界和绿色技术的兴趣不断增加。通过这种方法，微藻产生的生物活性物质被用于化妆品、食品和药品等部门的不同用途。藻类被作为一种可靠的天然有机活性成分应用于各种化妆品、食品和药品中，以提高这些产品的价值。用于此目的的生物活性物质是微藻产生的多糖、蛋白质和色素等成分。这些组分用作抗氧化剂、抗炎剂、抗老化剂、抗皱剂、保湿剂、光防护剂、减薄剂、抗黑色素剂和胶原蛋白增强剂，并改善皮肤的健康状况和外观。

5、因此，如何找到一种可有效治疗脂溢性皮炎的微藻提取物具有巨大的临床应用前景。

技术实现思路

1、本发明的目的就在于提供一种可有效治疗脂溢性皮炎的微藻提取物。

2、本发明的目的是通过如下方案实现的：

3、在本发明中，微藻可以是任何种类的微藻，例如红藻紫菜、小球藻、荚膜小球藻属、角毛藻、螺旋藻等。

4、在本发明中，微藻优选角毛藻。

5、角毛藻，硅藻门，盒形藻科。细胞呈扁椭圆形,壳面椭圆形。长轴带面为四角形，短轴带面为长方形。细胞具有长角毛,并常借助于角毛交接成链。海产，我国沿海均有分布，种类达10多种，均为赤潮种类。海洋经济虾蟹贝类育苗常需要大量培养角毛藻，以供幼体或轮虫生长食用。角毛藻是海洋浮游硅藻的重要类群，也是我国沿海许多港湾的优势硅藻种群。相对于其它藻类而言，角毛藻生长快速，尤其是在春夏季节，常常成为浮游植物的优势类群。角毛藻的角毛上有倒刺，会刺伤鱼鳃，对养殖鱼类造成伤害。但大部分角毛藻是海洋浮游植物群落中的有益类群，是许多海洋动物的饵料生物，因此，其种类组成和细胞丰度对海洋生态系统中的其它生物以及海洋环境有着直接或间接的重要影响，具有重要的研究价值。

6、本发明的微藻提取物为角毛藻提取物。微藻提取物中的抗菌活性物质大多没有坚定清楚，目前从角毛藻中筛选或分离出的抗菌活性物质包括酯类、酚类、萜类、多糖类、卤化物和含硫化合物等；其中有机溶剂提取物相比水提物对细菌有更强的抑制效果。因此，本发明的角毛藻提取物主要指角毛藻有机溶剂提取物，其中富含酚类和萜类活性物质。

7、在本发明中，角毛藻提取物可以根据本领域常规的制备方法制备，例如搅拌、研磨、浸渍、蒸煮、超声提取、微波萃取、减压抽滤、渗滤等，也可以组合使用上述方法制备。

8、本发明提供了一种角毛藻提取物的制备方法，包括如下步骤：

9、(1)将角毛藻粉碎、烘干，得到角毛藻粉；

10、(2)用异丙醇和乙酸乙酯的混合溶剂处理角毛藻粉，进行浸提，得到浸提液；

11、(3)所述浸提液经减压浓缩除去异丙醇，依次进行超声、透析处理，得到透析液；

12、(4)所述透析液经浓缩干燥，得到角毛藻提取物。

13、在本发明中，步骤（1）粉碎的粒度为80-120目。

14、在本发明中，步骤（1）粉碎的粒度优选为100目。

15、在本发明中，步骤（1）烘干的温度为60-90℃。

16、在本发明中，步骤（1）烘干的温度为70-80℃。

17、在本发明中，步骤（1）烘干时间为2-3h。

18、在本发明中，步骤（1）烘干时间为2.5h。

19、在本发明中，步骤（2）异丙醇和乙酸乙酯的体积比为1-3:1。

20、在本发明中，步骤（2）异丙醇和乙酸乙酯的体积比为2:1。

21、在本发明中，步骤（2）角毛藻与混合溶剂的质量体积比为1:3-8（g/ml）。

22、在本发明中，步骤（2）角毛藻与混合溶剂的质量体积比为1:5（g/ml）。

23、在本发明中，步骤（2）浸提的温度为90-120℃。

24、在本发明中，步骤（2）浸提的温度为95-100℃。

25、在本发明中，步骤（2）浸提时间为6-8h。

26、在本发明中，步骤（2）浸提时间为7h。

27、在本发明中，步骤（2）浸提液采用离心分离得到。

28、在本发明中，离心分离的转速为900-1200rpm。

29、在本发明中，离心分离的转速优选为1000rpm。

30、在本发明中，离心分离的时间为40-60min。

31、在本发明中，离心分离的时间优选为50min。

32、在本发明中，步骤（3）减压浓缩在旋转蒸发仪中进行。

33、在本发明中，步骤（3）旋转蒸发仪的水浴温度为60-90℃。

34、在本发明中，步骤（3）旋转蒸发仪的水浴温度为70-80℃。

35、在本发明中，步骤（3）超声使用的超声功率为350-500w。

36、在本发明中，步骤（3）超声使用的超声功率为400w。

37、在本发明中，步骤（3）超声时间为10-30min。

38、在本发明中，步骤（3）超声时间为20min。

39、在本发明中，步骤（3）透析使用的透析袋的截留分子量为2-20kda。

40、在本发明中，步骤（3）透析使用的透析袋的截留分子量优选为15kda。

41、在本发明中，步骤（4）浓缩干燥的温度为65-75℃。

42、在本发明中，步骤（4）浓缩干燥的温度为70-75℃。

43、在本发明中，步骤（4）浓缩干燥时间为2-3h。

44、在本发明中，步骤（4）浓缩干燥时间为2.5h。

45、本发明还提供一种角毛藻提取物的组合物。

46、在本发明中，按照各组分的质量比计算，角毛藻提取物：油茶籽提取物：山茶叶提取物=1.5-2.0:0.5-1.0:0.5-1.2；优选1.7:0.8:0.9。

47、油茶籽含有皮肤需要的脂肪酸、甘油三酯及微量元素、矿物质等。经常使用可以促进皮肤的新陈代谢，使皮肤恢复弹性。同时还可以祛除皮肤的废物，如氧自由基等，所以经常使用可以改善肤质。本发明中使用油茶籽改善头皮环境。

48、在本发明中，油茶籽提取物可由商业渠道购入或通过制备方法制备。

49、作为本发明推荐的一个实施例，可使用晾干的油茶籽果实压榨研磨后的粉末，其中茶皂苷含量的重量比60％-97％，油茶籽提取物可以作为组合物中的主表面活性剂。

50、山茶叶提取物对皮肤的作用与功效是抗炎、抗过敏，可以用于治疗皮肤疾病，属于天然抗炎物质，可以抑制炎症因子的释放，降低毛细血管的通透性，从而减轻炎症反应，达到抗炎的目的。同时还可以修复皮肤屏障，加强皮肤的保湿功能，有助于皮肤的修复。

51、在本发明中，山茶叶提取物可由商业渠道购入或通过制备方法制备。

52、作为本发明推荐的一个实施例，将新鲜山茶叶洗净，在室温下阴干，研碎成山茶叶粉末，并过200目筛，然后将过筛后的山茶叶粉末按固液比1g∶10ml的比例与水混合，在30℃下震荡浸提12h后减压浓缩、干燥成干粉，得到山茶叶提取物。

53、本发明的组合物还包括乳化剂。

54、在本发明中，乳化剂为硬脂酰谷氨酸钠、植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-3蜂蜡酸酯、氢化卵磷脂、聚甘油-6二硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、山梨坦倍半油酸酯、山梨坦异硬脂酸酯、山嵛醇聚醚-10、c12-20烷基葡糖苷、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯-60、山梨坦油酸酯中的一种或几种的任意组合。

55、在本发明中，乳化剂优选为单硬脂酸甘油酯。

56、本发明的组合物还包括助乳剂。

57、在本发明中，助乳剂为乙醇、乙二醇、聚乙二醇、正丁醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯、椰子油、山梨醇、甲基葡糖苷、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、硬脂酸或硬脂醇中的一种或几种的任意组合。

58、在本发明中，所述组合物还进一步包括助乳剂聚甘油酯(六聚甘油油酸酯)。

59、在本发明中，组合物还包括表面活性剂。

60、在本发明中，表面活性剂包括具有如下式i所述结构的化合物，

61、r-o-(po)m-(eo)n-h

62、式i,

63、其中，r表示c8-c18的饱和直链烃基，该饱和直链烃基中，正辛基的含有比例为20～80mol％，正癸基的含有比例为0-10mol％，碳原子数为c12-c18的饱和直链烃基的含有比例为20～80mol％，po为丙烯氧基，eo为乙烯氧基，(po)m和(eo)n按照此顺序嵌段结合，m为丙烯氧基的平均加成摩尔数为0.1-5的数，n为乙烯氧基的平均加成摩尔数为0.5-20的数；

64、优选地，r表示c8/c12/c14＝55/38/7(摩尔比)，m＝2.5，n＝5。

65、在本发明中，式i的制备方法包括:将c8饱和直链烃基、c12饱和直链烃基和c14饱和直链烃基的混和物在高温高压下添加碱发生脱水反应，然后进行氮气置换。置换氮气之后，升温加入环氧丙烷反应，反应结束后加酸，继续搅拌即可得到。

66、在本发明中，所述的碱为有机碱或无机碱。

67、无机碱为碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾。有机碱为三乙胺或二异丙基乙二胺。

68、在本发明中，碱优选为氢氧化钠。

69、在本发明中，酸为醋酸、盐酸、硫酸或本领域其他常用的酸。

70、在本发明中，酸优选醋酸。

71、在本发明中，式i制备方法优选包括：将c8饱和直链烃基、c12饱和直链烃基和c14饱和直链烃基的混和物在100℃、1.2kpa下添加氢氧化钠发生脱水反应，然后进行氮气置换。置换氮气之后，升温至130℃加入环氧丙烷反应，反应结束后冷却至80℃，加醋酸，继续搅拌即可得到。

72、在本发明中，表面活性剂为式i化合物和其他表面活性剂的组合。

73、其他表面活性剂可以为月桂醇聚醚硫酸酯钠、月桂醇聚醚、椰油酰水解燕麦蛋白钾、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基硫酸钠铵、椰子油脂肪酸单乙醇酰胺、丙烯酰胺丙基三甲基氯化铵/丙烯酰胺共聚物、椰油酰胺丙基甜菜碱、月桂醇硫酸酯铵、月桂酰两性基乙酸钠中的一种或几种的任意组合。

74、在本发明中，表面活性剂可以为式i与其他表面活性剂1:1的组合。

75、例如，可以为式i和月桂醇聚醚的组合物。

76、例如，可以为式i和十二烷基硫酸钠铵的组合物。

77、本发明的组合物还包括抗氧化剂。

78、在本发明中，抗氧化剂为对羟基苯乙酮、2,6-二叔丁基羟基甲苯、茶多酚、没食子酸酯、抗坏血酸、维生素e、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯中的一种或几种的任意组合。

79、在本发明中，所述组合物还包括抗氧化剂维生素e。

80、本发明还包括增稠剂。

81、在本发明中，增稠剂为蜂蜡、小烛树蜡、向日葵籽蜡、巴西棕榈蜡、米糠蜡、葵花蜡、茉莉花蜡、糊精棕榈酸酯、糊精异硬脂酸酯、气相二氧化硅、鲸蜡硬脂醇、乙二醇二硬脂酸酯、氯化钠和卡波姆中的一种或几种的任意组合。

82、在本发明中，增稠剂优选氯化钠。

83、本发明还包括ph调节剂。

84、在本发明中，ph调节剂为磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙醇胺、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、氢氧化钾、苹果酸、乳酸、柠檬酸钠和柠檬酸中的一种或几种的任意组合。

85、在本发明在，ph调节剂优选柠檬酸。

86、本发明还包括络合剂。

87、在本发明中，络合剂为单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨三乙酸钠、聚丙烯酸钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五羧酸盐和乙二胺四乙酸四钠中的一种或几种的任意组合。

88、在本发明中，络合剂为乙二胺四乙酸。

89、本发明还包括保湿剂。

90、在本发明中，保湿剂表现为保护皮肤、减少损伤等作用，保湿剂主要作用在于延缓水分丢失、增加真皮表皮水分渗透、为头部皮肤提供暂时性保护、减少损伤、促进修复过程。

91、在本发明中，保湿剂为海藻酸钠、神经酰胺、角鲨烷、尿囊素、尿素、甜菜碱、海藻糖、多糖、β-葡聚糖、透明质酸钠、银耳提取物、多元醇中的一种或几种的任意组合。

92、在本发明中，保湿剂优选甜菜碱。

93、本发明还包括润肤剂。

94、在本发明中，润肤剂的功能是在角质层内起润滑作用，填充皮肤表面的空间,代替在角质层内损失的脂质，减少鳞片状皮肤，改善头部皮肤状态。

95、在本发明中，润肤剂为卵磷脂、霍霍巴油、肉豆蔻酸豆酯、辛酸辛酯、油醇油酸酯、月桂酸己酯、棕榈酸异丙酯、月桂醇、油醇、辛基十二醇、己基癸醇、eg-6 辛酸/癸酸甘油三酯，peg-60玉米油甘油混合酯和peg-7橄榄油酸酯中的一种或几种的任意组合。

96、在本发明中，润肤剂优选卵磷脂。

97、在本发明中，卵磷脂从大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂中提纯得到，所述卵磷脂中磷脂酰胆碱的含量为50-99％。

98、在本发明中，所述组合物还进一步包括式i、单硬脂酸甘油酯、聚甘油酯、维生素e、乙二胺四乙酸、柠檬酸、甜菜碱、卵磷脂和氯化钠。

99、在本发明中，所述组合物包括：4-10%角毛藻提取物、1-5%油茶籽提取物、1-5%山茶叶提取物、0.1-1%式i、0.3-1.5%单硬脂酸甘油酯、0.1-2.0%聚甘油酯、0.1-0.8%维生素e、0.01-0.15%乙二胺四乙酸、0.01-0.5%柠檬酸、0.5-5%甜菜碱、0.01-0.15%卵磷脂、0.01-1.50%氯化钠。

100、在本发明中，所述百分比（%）是以组分占组合物总重量计算。

101、优选地，所述组合物包括6%角毛藻提取物、2.8%油茶籽提取物、3.2%山茶叶提取物、0.5%式i、0.8%单硬脂酸甘油酯、1.4%聚甘油酯、0.6%维生素e、0.11%乙二胺四乙酸、0.3%柠檬酸、3.9%甜菜碱、0.09%卵磷脂、1.2%氯化钠。

102、在本发明中，溶剂为去离子水。

103、本发明中，所述组合物余量使用去离子水加至100%。

104、本发明另一方面还提供一种微藻提取物的制备方法，具体包括以下步骤：

105、(1)制备角毛藻提取物：

106、(2)将油茶籽提取物、山茶叶提取物、式i分别加入去离子水中，加热搅拌均匀得混合溶液；

107、(3)往混合溶液中加入角毛藻提取物、聚甘油酯、维生素e、氯化钠并搅拌，得到中间混合液；

108、(4)最后加入单硬脂酸甘油酯、甜菜碱、卵磷脂、乙二胺四乙酸，柠檬酸调节混合液的ph值并搅拌。

109、在本发明中，步骤（1）优选上文所述的角毛藻提取物制备方法。

110、可以理解的是，本领域技术人员还可以通过其他常规手段制备，或者直接以角毛藻粉末进行后续步骤，制备组合物。

111、在本发明中，步骤（2）加热温度为40-70℃。

112、在本发明中，步骤（2）加热温度优选为50-60℃。

113、在本发明中，步骤（3）保温温度为50-60℃。

114、在本发明中，步骤（3）的保温温度优选为55℃。

115、在本发明中，步骤（4）加保温温度为50-60℃。

116、在本发明中，步骤（4）的保温温度优选为50℃。

117、在本发明中，步骤（4）的搅拌时间为2-4h。

118、在本发明中，步骤（4）的搅拌时间为3h。

119、在本发明中，步骤（4）调节ph至7-8.5。

120、在本发明中，步骤（4）调节ph至8。

121、本发明还提供一种微藻提取物或其组合物在制备预防或治疗皮肤真菌感染的药剂中的用途。

122、本发明还提供一种微藻提取物或其组合物在制备预防或治疗脂溢性皮炎的药剂中的用途。

123、本发明的有益效果：

124、(1)本发明添加了微藻提取物，为头发提供丰富的营养物质，滋润头发，使头发变得更加柔顺具有抗菌、缓和头皮紧张状态等性能，从而减少皮肤刺激，养护皮肤，达到养发护发的作用；

125、(2)本发明添加了山茶叶提取物，抑制病原微生物的生长，防止皮肤瘙痒；

126、(3)本发明添加了油茶籽提取物，经常使用可以改善皮肤环境，协同调节皮肤水油平衡，控油功效明显；

127、(4)本发明提供的微藻提取物组合物，制备方法简单，成本较低，选适合工业化放大生产，并且制备出来的微藻提取物组合物可有效治疗脂溢性皮炎，具有良好的应用前景。