多肽的新用途的制作方法

本发明属于多肽，具体涉及多肽的新用途。

背景技术：

1、皮肤是人体最大和最重要的器官，覆盖于整个人体的表面，其也会像人体的其他器官一样逐渐老化，功能减弱或丧失，从而导致一系列皮肤问题的产生。影响皮肤老化的因素主要有两大类：内源性因素和外源性因素。内源性因素包括遗传因素、氧自由基、非酶糖基化反应等；外源性因素包括日晒、环境污染、不良习惯等。

2、随着年龄的增长，受内外界环境等多方面因素的影响，皮肤表皮层和真皮层的表达水平发生变化，如经历长时间的暴晒或受紫外线辐射后，表皮层角质形成细胞的增殖速度和分化发生改变，参与基底层细胞黏附的分子表达下降，皮肤屏障功能减弱；真皮层细胞外基质的构成也随老化的进程发生退行性改变，胶原蛋白大量流失，成纤维细胞活性减弱，合成的胶原蛋白也逐渐减少，导致皮肤真皮层网状结构疏松，出现塌陷，皮肤组织的保湿度、强韧度和弹性降低，皮肤出现干燥、皱纹、松弛等问题。此外，失控的氧自由基在皮肤老化过程中也扮演着重要角色。在有害刺激因素作用下，活性氧产生过多或发生代谢障碍并超过内源性抗氧化防御系统的清除能力时，氧自由基在体内增多并参与氧化生物大分子的形成，直接或间接损伤dna、蛋白质和脂质，最终导致细胞的氧化损伤。过量的氧自由基还会攻击成纤维细胞，导致胶原代谢异常，胶原合成减少，出现异常交联；弹性纤维也在氧自由基的攻击下发生变形、卷曲，从而进一步影响真皮结构，使得原本年轻嫩滑的皮肤粗糙松弛，加速皮肤老化。

3、目前人们面临的皮肤问题越来越多，出现的频率越来越高，皮肤护理的需求也随之大增。因此，有必要对结构新颖的活性物及新的功效用途进行更多的研究和探索，从而开发更多安全高效的活性物质从源头上改善皮肤松弛、衰老、受损等问题，以满足消费者需求。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种多肽或其盐在制备用于护理皮肤或黏膜的组合物中的用途，所述护理皮肤或黏膜包括修护皮肤或黏膜、促进皮肤或黏膜的再生或愈合、提高细胞活性、促进细胞增殖、提高细胞的黏附能力、降低活性氧含量、促进胶原蛋白生成、增加皮肤弹性或提高皮肤紧致度中的一种或多种。

2、本发明所述肽或其盐具有以下式（i），

3、r1-val-lys-val-leu-gln-trp-r2（i）

4、式（i）中，

5、r1选自：h或r3-co-，其中r3选自：取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的烯基；

6、r2选自：-nr4r5或-or4，其中各个r4和r5彼此独立地选自：h、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的烯基；

7、所述烷基是指具有1-24个碳原子（可选具有1-16个碳原子；可选具有1-14个碳原子；可选具有1-12个碳原子；可选具有1、2、3、4、5、或6个的碳原子）的饱和脂肪族直链或支链的烷基；可选选自：甲基、乙基、异丙基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、2-乙基己基、2-甲基丁基、或5-甲基己基；

8、所述烯基是指具有2-24个碳原子（可选具有2-16个碳原子；可选具有2-14个碳原子；可选具有2-12个碳原子；可选具有2、3、4、5、或6个碳原子）的直链或支链烯基；所述烯基具有一个或多个碳-碳双键，可选具有1、2或3个共轭或非共轭的碳-碳双键；所述烯基是通过一个单键而结合至分子的其余部分；可选选自：乙烯基、油烯基、或亚油烯基；

9、可选地，所述“取代的烷基”、“取代的烯基”中的取代基选自c1-c4烷基；羟基；c1-c4烷氧基；氨基；c1-c4氨基烷基；c1-c4羰氧基；c1-c4氧基羰基；卤素（如氟、氯、溴、以及碘）；氰基；硝基；叠氮化物；c1-c4烷基磺酰基；硫醇；c1-c4烷硫基；c6-c30芳氧基如苯氧基；-nrb(c=nrb)nrbrc，其中rb和rc是独立地选自：h、c1-c4烷基、c2-c4烯基、c2-c4炔基、c3-c10环烷基、c6-c18芳基、c7-c17芳烷基、具有三至十元的杂环基、或氨基的保护基。

10、可选地，r1选自：h、乙酰基、叔-丁酰基、己酰基、2-甲基己酰基、辛酰基、癸酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、油酰基或亚油酰基；r4、r5彼此独立地选自：h、甲基、乙基、己基、十二烷基或十六烷基；

11、可选地，r1选自h、乙酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基或棕榈酰基；r4是h并且r5选自：h、甲基、乙基、己基、十二烷基或十六烷基；

12、可选地，r1是h或乙酰基；r2是-oh或-nh2。

13、可选地，所述肽选自肽（1）-（4）：

14、（1）h-val-lys-val-leu-gln-trp-oh；

15、（2）h-val-lys-val-leu-gln-trp-nh2；

16、（3）ac-val-lys-val-leu-gln-trp-oh；

17、（4）ac-val-lys-val-leu-gln-trp-nh2。

18、可选地，所述肽选自肽（3）和肽（4），具体地，

19、（3）ac-val-lys-val-leu-gln-trp-oh；

20、（4）ac-val-lys-val-leu-gln-trp-nh2。

21、本发明的式（i）所示的肽可以作为立体异构体或立体异构体的混合物存在；例如，其所包含的这些氨基酸可以具有l-、d-的构型、或彼此独立地是外消旋的。因此，有可能获得同分异构混合物以及外消旋混合物或非对映混合物、或纯的非对映异构体或对映异构体，这取决于不对称碳的数量和存在什么同分异构体或同分异构混合物。本发明的式（i）所示的肽的优选的结构是纯的同分异构体，即，对映异构体或非对映异构体。天然存在的l-异构体可以是优选的。

22、本发明还包括式（i）所示的肽的所有合适的同位素变体。本发明的这些肽的同位素变体此处理解为是指这样的化合物：其中在本发明的肽内至少一个原子被替换为相同原子序数的另一个原子，但所述另一原子的原子质量不同于自然界中通常或主要存在的原子质量。可掺入本发明的肽中的同位素的实例是：氢、碳、氮或氧的那些，例如2h(氘)、3h(氚)、13c、14c、15n、17o或18o。本发明的肽的特定的同位素变体（特别是其中已经掺入一种或多种放射性同位素的那些）可能有利于，例如检查在体内的作用机理或活性化合物的分布；由于相对简单的可制备性和可检测性，尤其是用3h或14c同位素标记的化合物适用于该目的。另外，由于化合物的更强的代谢稳定性，同位素（例如氘）的掺入可以产生特定的治疗益处，例如体内半衰期的延长或所需活性剂量的降低；因此，在某些情况下，本发明的肽的这种改性还可构成本发明的优选实施方案。通过本领域技术人员已知的方法，例如通过在下文中进一步描述的方法和在实施例中所述的方法，通过使用各自的试剂和/或起始物质的相应的同位素改性物，可制备本发明的肽的同位素变体。

23、可选地，所述组合物包含质量百分浓度为0.0001%-5%的式（i）所示的肽或其盐；

24、或，所述组合物包含质量百分浓度为0.0005%-1%的式（i）所示的肽或其盐；

25、或，所述组合物包含质量百分浓度为0.001%-0.1%的式（i）所示的肽或其盐；

26、或，所述组合物包含质量百分浓度为0.005%-0.01%的式（i）所示的肽或其盐。

27、术语“盐”指被认可的在动物，并且更确切地说在人类中使用的一种盐，所述式（i）所示的肽的盐包括式（i）所示的肽的金属盐，所述金属包括，但不局限于：锂、钠、钾、钙、镁、锰、铜、锌或铝等；所述式（i）所示的肽的盐包括式（i）所示的肽与有机碱形成的盐，所述有机碱包括，但不局限于：乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸或哌嗪等；所述式（i）所示的肽的盐包括式（i）所示的肽与无机酸或有机酸形成的盐，所述有机酸包括，但不局限于：乙酸、柠檬酸、乳酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、延胡索酸、苯甲酸、天冬氨酸、谷氨酸、琥珀酸、油酸、三氟乙酸、草酸、扑酸（pamoate）或葡萄糖酸等；所述无机酸包括，但不局限于：盐酸、硫酸、硼酸或碳酸。

28、本发明式（i）所示的肽或其盐的合成可以根据现有技术中已知的常规方法来进行，例如固相合成法、液相合成法或固相与液相结合的方法，还可以通过以产生所希望的序列为目标的生物技术方法、或通过具有动物、真菌、或植物来源的蛋白质的控制水解来制备。

29、例如，一种获得式（i）所示的肽的方法包括以下步骤：

30、-将具有受保护的n-末端和自由的c-末端的氨基酸与具有自由的n-末端和受保护的或与固体载体结合的c-末端的氨基酸偶联；

31、-消除保护n-末端的基团；

32、-重复该偶联顺序和消除保护n-末端的基团，直到获得所希望的肽序列；

33、-消除保护c-末端的基团或从该固体载体裂解。

34、优选地，c-末端与一种固体载体结合并且该方法是在固相上进行，包括将具有受保护的n-末端和自由的c-末端的氨基酸与具有自由的n-末端和与一种聚合物载体结合的c-末端的氨基酸偶联；消除保护n-末端的基团；并且重复此顺序所需要的次数以便因此获得具有所希望的长度的肽，接着从最初的聚合物载体裂解所合成的肽。

35、可选地，固相合成可以通过将二肽或三肽偶联到聚合物支持体上或偶联到先前与聚合物支持体结合的二肽或氨基酸上的汇集策略（convergent strategy）来进行。

36、使用本领域已知的标准条件和方法对n-末端和c-末端脱保护和/或以非确定的次序从聚合物支持体裂解肽，随后可以修饰所述末端的官能团。可以对与聚合物支持体结合的式（i）的肽进行n-末端和c-末端的任选的修饰，或在肽已从聚合物支持体裂解后进行n-末端和c-末端的任选的修饰。

37、上述式（i）所示的肽或其盐，可以掺入到递送系统或缓释系统中，以便实现有效成分的更好渗透，上述式（i）所示的肽或其盐或上述组合物可以被施用至皮肤和/或粘膜。

38、施用频率可以变化很大，这取决于每个受试者的需要，其中建议的施用范围从每月1次至每天10次，优选从每周1次至每天4次，更优选从每周3次至每天3次，甚至更优选每天1次或2次。

39、术语“递送系统”是指与本发明的肽一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体，它们选自：水、油或表面活性剂、包括石油来源、动物来源、植物来源、或合成来源的那些，例如并且不限于花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯、醚硫酸酯、硫酸酯、甜菜碱、葡萄糖苷、麦芽糖苷、脂肪醇、壬苯醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯、聚乙二醇、右旋糖、甘油、毛地黄皂苷和类似物。本领域的普通技术人员已知在可以给予本发明的肽的不同递送系统中可以使用的稀释剂。

40、术语“缓释”以常规含义使用，指提供化合物在一段时间内逐渐释放的化合物的递送系统，且优选地但不是必须地，在整个时间段内具有相对恒定的化合物释放水平。

41、递送系统或缓释系统的实例包括，但不局限于：脂质体、油质体、醇质体、毫米胶囊、微米胶囊、纳米胶囊、纳米结构的脂质载体、海绵状物、包合物、类脂囊泡、胶束、毫米球、微米球、纳米球、脂质球、微米乳液、纳米乳液、毫米粒子、微米粒子或纳米粒子。

42、上述式（i）所示的肽或其盐，还可以吸附在固体有机聚合物或固体无机支撑体上，例如并且不局限于，滑石、膨润土、二氧化硅、淀粉、或麦芽糖糊精等。

43、可选地，所述组合物的制剂选自：霜剂、油、香膏、泡沫、洗剂、凝胶、擦剂、浆液、软膏、摩丝、粉末、杆剂、笔剂、喷雾剂、气溶胶、胶囊剂、片剂、颗粒剂、溶液剂、混悬液、乳剂、酏剂、多糖薄膜或胶冻。

44、可选地，所述组合物还包含至少一种佐剂。

45、可选地，所述佐剂包括肽类、天然植物成分、维生素c及其衍生物或类视黄醇。

46、本发明的肽根据它们的序列的性质或n-末端和/或c-末端中的任何可能的修饰，在水中具有可变的溶解度。因此本发明的肽可以通过水溶液掺入组合物中，且不溶于水的那些可溶解于常规溶剂中，所述溶剂例如并且不限于乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、甘油、丁二醇或聚乙二醇或其任何组合。

47、在本说明书中，用于氨基酸的缩写遵循iupac-iub生化命名委员会（iupac-iubcommission of biochemical nomenclature）在欧洲生物化学杂志（eur. j. biochem.1984, 138: 9-37）中所指定的规则。

48、因此，例如，val表示nh2-ch(ch(ch3)2)-cooh，val-表示nh2-ch(ch(ch3)2)-co-，-val表示-nh-ch(ch(ch3)2)-cooh，并且-val-表示-nh-ch(ch(ch3)2)-co-。因此，表示肽键的连字符消除了当位于该符号的右侧时的氨基酸（在此用常规非离子化形式来表示）1-羧基中的oh，并且消除了当位于该符号的左侧时的氨基酸2-氨基中的h；两种修饰可以应用于同一个符号（见表1）。

49、表1 氨基酸残基的结构以及它们的单字母和三字母缩写符号

50、

51、缩写“ac-”在本发明中用来表示乙酰基（ch3-co-）；val：缬氨酸；lys：赖氨酸；leu：亮氨酸；gln：谷氨酰胺；trp：色氨酸。

52、本发明具有以下优点和效果：

53、1、本发明的肽通过人工设计得到，合成方便，且对人体安全无刺激。

54、2、本发明的肽能够修护皮肤或黏膜，促进皮肤或黏膜的再生或愈合，提高细胞活性，促进细胞增殖，提高细胞的黏附能力，降低活性氧含量，促进胶原蛋白生成，增加皮肤弹性，提高皮肤紧致度，可以广泛应用于皮肤护理的产品中。