一种精确靶向循环中的肿瘤细胞的药物的制作方法

本发明涉及肿瘤药物领域，尤其涉及一种精确靶向循环中的肿瘤细胞的药物。

背景技术：

1、转移是肿瘤细胞向体内远处播散的动态过程，也是癌症死亡的主要原因。而在手术切除癌灶的过程中，也有可能造成肿瘤细胞向循环中脱落与播散，增加转移风险。

2、健康组织内的稳态依赖于细胞间的粘附和细胞与细胞外基质的相互作用。除血液系统肿瘤外，大部分肿瘤细胞属于贴壁细胞，需要建立细胞-细胞间以及细胞-ecm间的黏附，以满足其生长和增殖的需求，例如，胶原蛋白提供支持和结构，帮助维持细胞的形状和连接；弹性纤维蛋白赋予组织弹性和柔韧性；蛋白多糖具有吸水能力，帮助保持细胞间隙的适应环境，还参与细胞信号传导和细胞附着。

3、癌症细胞的两个主要特征，细胞间黏附的丧失和与锚定非依赖性生长，都依赖于细胞黏附分子。为了在遥远的器官中定植，循环中的肿瘤细胞(ctcs)必克服许多障碍在循环中存活，直到它们能够在一个新的器官中停止生长。在这个过程中，ctcs会分泌大量细胞外基质，方便其黏附于新的癌灶。多个ctcs作为一个抱团的整体从原发肿瘤中迁移出来，比单个癌细胞更有效地建立转移。集体迁移也需要重建细胞外基质，以促进细胞群的移动。电镜下观察hela细胞贴壁生长如图1的a所示，可见细胞外包裹细胞外基质；将hela细胞通过尾静脉注射到小鼠体内，48小时后收集小鼠血液，分离血浆，裂解红细胞，再利用cd45磁珠抗体吸附白细胞，在磁场作用下去除白细胞，使得ctcs被富集沉淀，最后在电镜下观察ctcs的形态，如图1的b所示，可见多个hela细胞处于抱团状态，且能观察到细胞表面分泌的ecm；用细胞外基质试剂盒检测各种细胞外基质含量，如图2所示，可见细胞分泌的胶原蛋白、弹性蛋白等细胞外基质的具体含量。此外，将hela细胞放置于动力培养系统(如图3的a)，将动力系统置于37℃、5％co2培养箱中(如图3的b)，以0.1ml/s的流速运行三天后取材，通过tmt分析与贴壁细胞的差异，发现循环中的肿瘤细胞分泌更多的ecm，如图4所示(其中a是kegg富集分析得到的细胞外基质与受体相互作用图示，灰色框为相对于贴壁细胞高表达的细胞外基质，b是a中所示表达增高的细胞外基质的具体说明)。

4、此外，进入血液循环的肿瘤细胞能激活血小板，使血小板黏附分子迅速发生变构或上调，从而介导ctcs与血小板的黏附，形成血小板瘤栓。血小板瘤栓不仅能帮助肿瘤细胞抵挡血流剪切力引起的机械损伤，还能保护肿瘤细胞逃脱免疫系统的攻击，提高ctcs的生存率。

技术实现思路

1、因此，为了预防因肿瘤转移而增加的患者死亡，需要改进治疗肿瘤转移性疾病的方法；而ctcs是肿瘤治疗的主要靶点，因为它能引起远端转移。进入循环中的肿瘤细胞表面含有大量细胞外基质，并通过血小板为媒介凝结成团，可以通过这一特征对其进行精准打击。

2、循环系统中，肿瘤细胞在血管中转移的时候，肿瘤细胞需要分泌细胞外基质，并且要和血小板结合或者抱团才能生存。循环中的肿瘤细胞是悬浮状态，非循环的肿瘤细胞是贴壁状态。

3、本发明的目的在于精准杀伤循环中悬浮的肿瘤细胞，防止肿瘤转移：可以通过抗体或多肽特异性识别ctcs表面的细胞外基质(ecm)，从而使附带的化疗药、靶向药、脂肪酸类药物或放射性核素类药物能精准杀伤ctcs；也可由细胞外基质相关酶直接识别并消化ctcs表面的细胞外基质，从而防止ctcs的贴壁和聚集；或由抗血小板药物抑制因血小板激活而引起的ctcs聚集，从而达到抑制循环中的肿瘤细胞的作用。此外，本发明所用药物分子量大，无法进入组织间隙，只在循环中发挥作用，因此能精准杀伤循环中的肿瘤细胞而不损害正常组织。

4、为实现上述目的，本发明提供一种精确靶向循环中的肿瘤细胞的药物，其特征在于，所述药物是由化疗药、靶向药、脂肪酸类药物、放射性核素类药物之类的细胞毒药物与抗体或多肽组成的复合物药物，通过抗体或多肽识别靶向循环中的肿瘤细胞表面特异的细胞外基质，从而使附带的细胞毒药物能精准杀伤ctcs；

5、或是细胞外基质相关酶，直接识别并消化靶向循环中的肿瘤细胞表面的细胞外基质，从而防止靶向循环中的肿瘤细胞的贴壁和聚集；

6、或是抗血小板药物，通过抑制因血小板激活而引起的靶向循环中的肿瘤细胞聚集，从而达到抗靶向循环中的肿瘤细胞的作用。

7、进一步，所述化疗药包括烷化剂，抗代谢类，拓扑异构酶抑制剂，抗肿瘤抗生素，植物类抗肿瘤药物，激素类，杂类中的至少一种；

8、优选的，所述烷化剂为环磷酰胺、异环磷酰胺、氮芥、苯丁酸氮芥、卡莫司汀、达卡巴嗪、替莫唑胺、尼莫司汀、氮烯咪胺、美法仑、马法兰、马利兰；所述抗代谢类为氨甲蝶呤、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨、培美曲塞、替吉奥、替加氟、氟达拉滨、羟基脲；所述拓扑异构酶抑制剂为依托泊苷、多柔比星、表柔比星；所述抗肿瘤抗生素包括琨类、亚硝脲类、糖苷类、色肽类、糖肽类、蛋白质类；所述植物类抗肿瘤药物为长春新碱、喜树碱、苦参碱、三尖杉酯、秋水仙碱、小檗碱、玫瑰树碱、长春瑞滨、长春花碱、紫杉醇、紫苏醇、榄香烯、柠檬烯、青蒿素、依托泊苷、拓扑替康、多西他赛、伊利替康等；所述激素类为抗雌激素、芳香化酶抑制剂、孕激素、性激素、抗雄激素、rh-lh激动剂/拮抗剂、lh-rh类似物；所述杂类为顺铂、卡铂、草酸铂、奈达铂、奥沙利铂、门冬酰胺酶；

9、更优选的，所述琨类为阿霉素、脂质体阿霉素、表阿霉素、柔红霉素，克拉霉素、丝裂霉素、弥托蒽醌；所述亚硝脲类为链脲霉素；所述糖苷类为光辉霉素、色霉素a3；所述色肽类为放线菌素c、放线菌素d；所述糖肽类为博来霉素；所述蛋白质类为新制癌菌素、利达霉素；所述抗雌激素为三苯氧胺、氟维司群、他莫西芬、托瑞米芬、依西美坦；所述芳香化酶抑制剂为氨苯乙哌啶酮、福美司坦、来曲唑、阿那曲唑；所述孕激素为甲羟孕酮、甲地孕酮；所述性激素为雌激素、雄激素、甲基睾丸酮、丙酸睾丸酮、己烯雌酚；所述抗雄激素为氟它氨；所述rh-lh激动剂/拮抗剂为戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林。

10、进一步，所述靶向药包括akt抑制剂、alk抑制剂、bcl-2抑制剂、bcr-abl抑制剂、braf v600e抑制剂、btk抑制剂、cdk4/6抑制剂、egfr抑制剂、fgfr抑制剂、ezh2抑制剂、heg2抑制剂、hdac抑制剂、mek抑制剂、met抑制剂、mtor抑制剂、ntrk抑制剂、parp抑制剂、pdgfr抑制剂、pi3k抑制剂、蛋白酶体抑制剂、ret抑制剂、ros1抑制剂、smo抑制剂、src/ab1双重抑制剂、vegfr抑制剂、单克隆抗体中的至少一种；

11、优选的，akt抑制剂为卡帕塞替尼；alk抑制剂为克唑替尼、色瑞替尼、艾乐替尼、布加替尼、劳拉替尼；bcl-2抑制剂为维奈妥拉；bcr-abl抑制剂为伊马替尼、达沙替尼、尼洛替尼、普纳替尼；braf v600e抑制剂为维莫非尼、达拉非尼、康奈非尼；btk抑制剂为伊鲁替尼、阿卡替尼、泽布替尼、奥布替尼；cdk4/6抑制剂为帕博西林、瑞博西林、玻玛西林；egfr抑制剂为吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、达克替尼、奥希替尼、阿美替尼；fgfr抑制剂为厄达替尼、培米替尼、英非格拉替尼；ezh2抑制剂为他泽司他；heg2抑制剂为拉帕替尼、来那替尼、吡咯替尼、图卡替尼；hdac抑制剂为伏立诺他、罗米地辛、贝利司他、帕比司他、西达本胺；mek抑制剂为曲美替尼、考比替尼、比美替尼、司美替尼；met抑制剂为卡马替尼、特泊替尼、沃利替尼；mtor抑制剂为西罗莫司、替西罗莫司、依维莫司、佐他莫司；ntrk抑制剂为恩曲替尼、拉罗替尼、艾乐替尼；parp抑制剂为奥拉帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、鲁卡帕利；pdgfr抑制剂为阿伐普替尼、米哚妥林、尼达尼布、拉多替尼、瑞普替尼；pi3k抑制剂为阿培利司、艾代拉利司、厄布利塞；蛋白酶体抑制剂为硼替佐米、卡非佐米、伊沙佐米、ret抑制剂为普雷西替尼、塞尔帕替尼、ros1抑制剂为恩曲替尼；smo抑制剂为维莫德吉、索尼德吉、格拉吉布；src/ab1双重抑制剂为博舒替尼；vegfr抑制剂为索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、瑞戈非尼、凡德他尼、乐伐替尼、卡博替尼、阿昔替尼、特拉替尼、阿帕替尼、安罗替尼、呋喹替尼；单克隆抗体为利妥昔单抗、西妥昔单抗、耐昔妥珠单抗、那西妥单抗、维迪西妥单抗、司妥昔单抗、维布妥昔单抗、达妥昔单抗β、阿替利珠单抗、度伐利尤单抗、帕尼单抗、帕博利珠单抗、纳武利尤单抗、伊匹木单抗、伊尼妥单抗、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗、奥妥珠单抗、奥法木单抗、恩美曲妥珠单抗、维泊妥珠单抗、尼妥珠单抗、戈沙妥珠单抗、达雷妥尤单抗、帕妥珠单抗、普特利单抗、恩沃利单抗、雷莫西尤单抗、卡瑞利珠单抗、卡杜尼利单抗、替雷利珠单抗、替伊莫单抗、信迪利单抗、舒格利单抗、斯鲁利单抗、特瑞普利单抗、派安普利单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥加伊妥珠单抗。

12、进一步，所用脂肪酸类药物选自碳原子数为2-100的直链或带有支链、环状结构的饱和或不饱和脂肪酸，该饱和或不饱和脂肪酸包括含有双键、叁键、羟基、氨基和/或被氧代的脂肪酸为一元酸、二元酸或多元酸；

13、优选的，所述饱和/或不饱和脂肪酸为选自富马酸、辛酸、戊烯二酸、己烷酸、壬烷酸、十二烷酸、十四烷酸、十六烷酸、十八烷酸、二十烷酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十五烷酸、庚酸、癸酸、十二烯酸、十四烯酸、三十二碳六烯酸、二十八烷酸中的一种或二种以上。

14、进一步，所述放射性核素类药物包括放射性碘-131、碘-123、碘-125、锶-89、锶-90、钼-99、钒-48、钒-49、钒-52、钷-49、铍-10、铵-140、铅-212、铪-182、锿-255、铀-222、铀228、铀232、铀233、铀-235、铀238、钚-238、钚-239、钚-240、钚-241、钋-210、钋-210、镉-109、镉-113m、镓-62、镓-66、镓-67、镓-68、镓-69、镓-72、镓-73、钒-52、钴-57、钴-60、铬-51、铷-82、铼-186、铼-188、锗-68、氟-18、碳-11、碳-13、碳-14、氮-13、氧-15、汞-197、铊-201、铯-131、铯-137、钪-43、钙-47、铁-55、铁-59、铜-64、铅-153、银-105、镥-177、氙-133、锕-227、锢-113m、镥-177、钇-88、钇-90、铱-192、锑-122、镭-223、铟-111、锝-99m、锝-99m-mdp、锝-99m-hmdp、锝-99m-sestamibi、锝-99m-phytate中的至少一种。

15、进一步，所述抗体或多肽特异性识别的ctcs表面的细胞外基质选自胶原蛋白、非胶原糖蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖、氨基聚糖、整合素中的至少一种；

16、优选的，所述胶原蛋白包括纤维性胶原，网状胶原，微丝状胶原，锚丝状胶原，三螺旋区不连续的纤维相关性胶原，跨膜性胶原和尚未分类的胶原；所述非胶原糖蛋白主要为纤连蛋白和层黏连蛋白；所述蛋白聚糖为核心蛋白质与氨基聚糖共价结合的产物；所述氨基聚糖为透明质酸、4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素、硫酸角质素、硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素、肝素；所述整合素是指α1β1、α2β1、α3β1、α4β1、α4β7、α5β1、α6β1、α7β1、α8β1、α10β1、α6β4、αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6或αiiβ3中的至少一种；

17、更优选的，所述纤维性胶原为i、ii、v和xi型胶原；所述网状胶原为iv、viii和x型胶原；所述微丝状胶原为vi m型胶原；所述锚丝状胶原为vii型胶原；所述三螺旋区不连续的纤维相关性胶原为ix、xii、xiv、xvi及xix型胶原；所述跨膜性胶原为xvii型胶原；所述尚未分类的胶原为iii、xiii、xv和xviii型胶原。

18、进一步，所述细胞外基质相关酶包括基质金属蛋白酶，粘附分子酶，玻璃体蛋白酶，纤维蛋白酶、受体调节基质蛋白酶、细胞表面酶、透明质酸酶，炎性细胞产生的酶中的至少一种；

19、优选的，所述基质金属蛋白酶为mmp-1、mmp-2、mmp-3、mmp-4、mmp-5、mmp-6、mmp-7、mmp-8、mmp-9、mmp-10、mmp-11、mmp-12、mmp-13、mmp-14、mmp-15、mmp-16、mmp-17、mmp-18、mmp-19、mmp-20、mmp-21、mmp-22、mmp-23、mmp-24、mmp-25、mmp-26、mmp-27、mmp-28；所述粘附分子酶为胶原酶、弹性蛋白酶、凝血酶、颜色素酶；玻璃体蛋白酶为胶原酶a和胶原酶b；所述纤维蛋白酶为血浆纤溶酶、肝素酶、链激酶；所述受体调节基质蛋白酶为胶原酶、明胶酶、天冬氨酸蛋白酶；所述细胞表面酶为硫酸肝素酶、金属加工酶；所述透明质酸酶包括内切型透明质酸酶和纤维型透明质酸酶；所述炎性细胞产生的酶为酸性蛋白酶、酶释放酶、胶原酶；

20、更优选的，所述酸性蛋白酶为炎性细胞产生的肌凝蛋白酶；所述酶释放酶为胰蛋白酶；所述胶原酶为胰蛋白酶和粗预降解蛋白酶。

21、进一步，所述抗血小板药物包括环氧合酶抑制剂，血栓素合成酶抑制剂，磷酸二酯酶抑制剂，血小板糖蛋白iib/iiia受体抑制剂，5-羟色胺受体抑制剂，二磷酸腺苷p2y12受体拮抗药中的至少一种。

22、优选的，所述环氧合酶抑制剂为阿司匹林、吲哚布芬，血栓素合成酶抑制剂为奥扎格雷纳；所述磷酸二酯酶抑制剂为西洛他唑、双嘧达莫；所述血小板糖蛋白iib/iiia受体抑制剂为阿昔单抗、替罗非班、依替巴肽；所述5-羟色胺受体抑制剂为沙格雷酯；所述二磷酸腺苷p2y12受体拮抗药为氯吡格雷、普拉格雷、厄贝沙坦、替格瑞洛、坎格瑞洛、阿哌地特中的至少一种。

23、本发明还提供所述精确靶向循环中的肿瘤细胞的药物的制剂形式为注射剂。

24、本发明还提供所述精确靶向循环中的肿瘤细胞的药物用于制备治疗肿瘤药物的用途；优选的，肿瘤药物为注射剂形式。

25、本发明的有益效果是：术前及术后服用本药物，可以精准杀伤血液中的ctcs，从而防止肿瘤转移，提肿瘤患者的生存率。