蛋白酶3（PR3）嵌合自身抗体受体T细胞及相关方法和用途与流程

本公开文本提供了一种细胞或蛋白质治疗剂，其包含蛋白酶3(pr3)抗体结合结构域，如野生型pr3或突变型pr3蛋白。本公开文本还提供了包含细胞外pr3抗体结合结构域的嵌合自身抗体受体(caar)。本公开文本提供的caar包括这样的caar，其中细胞外pr3抗体结合结构域是能够被抗pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(anca)特异性结合的野生型或突变型pr3蛋白或其片段。本公开文本还提供了编码所提供的caar的多核苷酸、含有所提供的caar的基因工程化细胞如t细胞、以及相关方法及其在过继细胞疗法中的用途。

背景技术：

1、抗嗜中性粒细胞胞质抗体相关血管炎(aav)是一种以炎症和小血管损伤为特征的罕见的自身免疫性疾病。在嗜中性粒细胞的初级颗粒中发现的嗜中性粒细胞丝氨酸蛋白酶蛋白酶3(pr3)是aav中的主要自身抗原。由自身反应性b细胞产生的针对pr3的自身抗体(anca)通过激活损伤血管的引发的嗜中性粒细胞在aav的发展中至关重要。需要改进的方法来靶向和杀伤引起疾病的b细胞。提供了满足此类需求的实施方案。

技术实现思路

1、本文提供了一种嵌合自身抗体受体(caar)，所述嵌合自身抗体受体包含：(a)细胞外蛋白酶3(pr3)抗体结合结构域；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区。在一些实施方案中，所述caar进一步包含所述细胞外pr3抗体结合结构域与所述跨膜结构域之间的间隔子。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域来自人pr3蛋白或是其突变体。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域是成熟pr3蛋白。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:1所示的氨基酸序列或与seq id no:1展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域是野生型人pr3。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq id no:1中。

2、在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域是突变型pr3蛋白，所述突变型pr3蛋白包含在选自以下的位置处的氨基酸取代：参考seq id no:1所示的位置的g4、h44、d91、d175和s176。在一些实施方案中，所述氨基酸取代选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c，或是其保守取代。在一些实施方案中，所述氨基酸取代选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是选自g4p、h44a、d91n、d175n、s176a和s176c的氨基酸取代的保守氨基酸取代。

3、在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域是与野生型pr3蛋白(例如，seq id no:1所示的pr3蛋白)相比酶活性降低的突变型pr3蛋白。

4、所提供的实施方案包括嵌合自身抗体受体(caar)，所述嵌合自身抗体受体包含：(a)细胞外蛋白酶3(pr3)抗体结合结构域，其中所述pr3抗体结合结构域是与具有seq idno:1所示的序列的野生型pr3蛋白相比酶活性降低的突变型pr3蛋白；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区。

5、在一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在催化三联体中或附近的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述氨基酸取代在选自以下的活性位点残基中：参考seq id no:1所示的编号的h44、d91和s176。在一些实施方案中，所述氨基酸取代选自h44a、d91n、s176a和s176c。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在参考seq id no:1中的位置编号的位置h44处的氨基酸取代。

6、在一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在干扰底物结合口袋形成的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述位置是g4。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含在参考seq id no:1中的位置编号的位置g4处的氨基酸取代。在任何实施方案的一些实施方案中，与seq id no:1所示的野生型pr3相比，所述突变型pr3蛋白包含1、2、3、4或5个氨基酸取代。在任何实施方案的一些实施方案中，与seq id no:1相比，所述突变型pr3蛋白包含单个氨基酸取代。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代g4p。

7、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)pr3抗体结合结构域；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区，其中所述pr3抗体结合结构域是包含所述氨基酸取代g4p的突变型pr3蛋白。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:9所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含与seq id no:9展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq idno:9中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代h44a。

8、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)pr3抗体结合结构域；(b)跨膜区；和(c)细胞内信号传导区，其中所述pr3抗体结合结构域是包含所述氨基酸取代h44a的突变型pr3蛋白。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:10所示的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含与seq idno:10展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:10所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域的氨基酸序列由seq id no:10所示的序列组成。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代d91n。在任何实施方案的一些实施方案中，所述抗体结合结构域包含seq id no:4所示的氨基酸序列或与seq id no:4展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq idno:4中。

9、在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代d175n。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:7所示的氨基酸序列或与seq id no:7展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq id no:7中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述突变型pr3蛋白包含所述氨基酸取代s176a或s176c。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:2所示的氨基酸序列或与seq id no:2展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq idno:2中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含seq id no:8所示的氨基酸序列或与seq id no:8展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域示于seq id no:8中。

10、在任何实施方案的一些实施方案中，跨膜区是或包含来自cd4、cd28或cd8的跨膜结构域。在任何实施方案的一些实施方案中，所述跨膜区是或包含来自cd28的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜区包含人cd28。在任何实施方案的一些实施方案中，所述跨膜区是或包含seq id no:26或与seq id no:26具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述跨膜区示于seq id no:26中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述跨膜区是或包含来自cd8a的跨膜结构域。在任何实施方案的一些实施方案中，所述跨膜结构域是人cd8a。在任何实施方案的一些实施方案中，所述跨膜区是或包含seq id no:98或与seqid no:98具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述跨膜区示于seq id no:98中。

11、在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞内信号传导区包含能够在t细胞中诱导初级激活信号的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是来自t细胞受体(tcr)组分的结构域和/或包含免疫受体酪氨酸激活基序(itam)。在任何实施方案的一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是cd3-ζ(cd3ζ)链的胞质信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是人cd3ζ链。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含seq id no:28所示的序列，或与seq idno:28具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域示于seq id no:28中。

12、在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞内信号传导区进一步包含共刺激信号传导区。在一些实施方案中，所述共刺激信号传导区位于所述跨膜区与所述细胞内信号传导结构域之间。在任何实施方案的一些实施方案中，所述共刺激信号传导区包含t细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在任何实施方案的一些实施方案中，所述共刺激信号传导区包含cd28、4-1bb或icos的细胞内信号传导结构域。在任何实施方案的一些实施方案中，所述共刺激信号传导区包含4-1bb的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述共刺激信号传导区包含人4-1bb。在任何实施方案的一些实施方案中，所述共刺激信号传导区包含seq id no:27所示的序列，或与seq id no:27具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述共刺激信号传导区示于seq id no:27中。

13、在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含免疫球蛋白的至少一部分或其变体。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含免疫球蛋白的铰链区或其变体。在一些实施方案中，免疫球蛋白的所述铰链区是igg4铰链区。在一些实施方案中，所述铰链区是人igg4铰链区或其变体。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含与野生型igg4铰链区相比含有氨基酸cpsc至cppc的取代的变体igg4铰链区。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子的长度小于或小于约15个氨基酸。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子的长度在12与15个氨基酸之间。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含seq id no:22或seq id no:23所示的序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子示于seq id no:22中。

14、在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子的长度在100与150个氨基酸之间。在一些实施方案中，所述间隔子的长度在110与130个氨基酸之间。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含免疫球蛋白的铰链区和免疫球蛋白的ch3区。在一些实施方案中，所述间隔子包含igg4铰链区或其变体和igg4 ch3区。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含seq id no:24或seq id no:96所示的序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子示于seq id no:24中。

15、在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子的长度在200与250个氨基酸之间。在一些实施方案中，所述间隔子的长度在220与240个氨基酸之间。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含免疫球蛋白的铰链区、免疫球蛋白的ch2区或两种不同免疫球蛋白的嵌合ch2区以及免疫球蛋白的ch3区。在一些实施方案中，所述间隔子包含igg4铰链区或其变体、含有igg4 ch2的一部分和igg2 ch2的一部分的嵌合ch2区(igg2/4ch2区)以及igg4 ch3区。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含seq id no:25或seqid no:97所示的序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子示于seq id no:25中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子包含氨基酸ggggs(seq id no:99)。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子示于seq id no:99中。在任何实施方案的一些实施方案中，所述间隔子示于seq id no:100中。

16、在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar包含与seq id no:29、30、31、38、39、40、53、54、55、56、57、58、104、110或111中任一个所示的序列展现出至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述caar包含seq id no:29、30、31、38、39、40、53、54、55、56、57、58、104、110或111中任一个所示的序列。本文提供了一种caar，所述caar包含seq id no:29所示的氨基酸序列或与seq id no:29展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。本文提供了一种caar，所述caar包含seq id no:30所示的氨基酸序列或与seq idno:30展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。本文提供了一种caar，所述caar包含seqid no:38所示的氨基酸序列或与seq id no:38展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。本文提供了一种caar，所述caar包含seq id no:55所示的氨基酸序列或与seq id no:55展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。本文提供了一种caar，所述caar包含seq id no:56所示的氨基酸序列或与seq id no:56展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。本文提供了一种caar，所述caar包含seq id no:57所示的氨基酸序列或与seq id no:57展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。本文提供了一种caar，所述caar包含seq id no:58所示的氨基酸序列或与seq id no:58展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。

17、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)含有seq id no:9所示的序列的pr3抗体结合结构域；(b)含有seq id no:25所示的序列的间隔子；(c)含有seq id no:26所示的序列的跨膜区；(d)含有seq id no:27所示的序列的共刺激信号传导区；和(e)含有seq idno:28所示的序列的细胞内信号传导区。本文提供了一种caar，所述caar包含与seq id no:55展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的g4p突变。在一些实施方案中，所述caar包含seq id no:55所示的氨基酸序列。

18、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)含有seq id no:10所示的序列的pr3抗体结合结构域；(b)含有seq id no:24所示的序列的间隔子；(c)含有seq id no:26所示的序列的跨膜区；(d)含有seq id no:27所示的序列的共刺激信号传导区；和(e)含有seq idno:28所示的序列的细胞内信号传导区。本文提供了一种caar，所述caar包含与seq id no:57展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的g4p突变。在一些实施方案中，所述caar包含seq id no:57所示的氨基酸序列。

19、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)含有seq id no:9所示的序列的pr3抗体结合结构域；(b)含有seq id no:100所示的序列的间隔子；(c)含有seq id no:26所示的序列的跨膜区；(d)含有seq id no:27所示的序列的共刺激信号传导区；和(e)含有seq idno:28所示的序列的细胞内信号传导区。本文提供了一种caar，所述caar包含与seq id no:104展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的g4p突变。在一些实施方案中，所述caar包含seq id no:104所示的氨基酸序列。

20、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)含有seq id no:9所示的序列的pr3抗体结合结构域；(b)含有seq id no:22所示的序列的间隔子；(c)含有seq id no:98所示的序列的跨膜区；(d)含有seq id no:27所示的序列的共刺激信号传导区；和(e)含有seq idno:28所示的序列的细胞内信号传导区。本文提供了一种caar，所述caar包含与seq id no:110展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq id no:1中的位置编号的g4p突变。在一些实施方案中，所述caar包含seq id no:110所示的氨基酸序列。

21、本文提供了一种caar，所述caar包含：(a)含有seq id no:10所示的序列的pr3抗体结合结构域；(b)含有seq id no:100所示的序列的间隔子；(c)含有seq id no:98所示的序列的跨膜区；(d)含有seq id no:27所示的序列的共刺激信号传导区；和(e)含有seq idno:28所示的序列的细胞内信号传导区。本文提供了一种caar，所述caar包含与seq id no:111或119展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含参考seq idno:1中的位置编号的h44a突变。在一些实施方案中，所述caar包含seq id no:111或119所示的氨基酸序列。

22、在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar能够被抗pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(pr3-anca)特异性结合。在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3抗体结合结构域包含由抗pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(pr3-anca)识别的至少2、3、4、5、6或7个表位。在一些实施方案中，所述表位选自anca2(aqphsrpymas，seq id no:90)、anca3(pgshfcgg，seqid no:91)、anca4(vvlgahnvrtq，seq id no:92)、anca5(flnnydae，seq id no:93)、anca6(pvphgtqc，seq id no:94)和anca7(cfgdsggp，seq id no:95)。

23、在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar对pr3反应性b细胞具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，在内源性nur77基因座处敲入了td-tomato并且用所述caar转导的jurkat报告细胞展现出小于或小于约25％、小于或小于约20％、小于或小于约15％、小于或小于约10％、小于或小于约9％、小于或小于约8％、小于或小于约7％、小于或小于约5％、小于或小于约4％、小于或小于约3％、小于或小于约2％或者小于或小于约1％强直信号传导，如通过流式细胞术通过td-tomato的荧光所测量的，并且被测定为在所转导的jurkat报告细胞中表达td-tomato的细胞的总百分比。在任何实施方案的一些实施方案中，用所述caar转导的细胞在暴露于抗人pr3抗体之后显示抗原特异性激活。在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar包含与seq id no:55、57、104、110和111中任一个所示的序列展现出至少85％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar包含seq id no:55、57、104、110和111中任一个所示的序列。

24、在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar能够杀伤表达抗pr3抗体的细胞靶标的至少65％。在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar能够杀伤表达不同抗pr3抗体的至少三种细胞靶标中的每一种的至少65％，其中所述至少三种不同抗体中的每一种结合不同的pr3表位。在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar包含与seq id no:55、57、104、110和111中任一个所示的序列展现出至少85％序列同一性的氨基酸序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述caar包含seq id no:55、57、104、110和111中任一个所示的序列。

25、在任何实施方案的一些实施方案中，多核苷酸包含编码所述caar的核酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸通过剪接位点消除来优化。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多核苷酸经密码子优化以在人细胞中表达。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多核苷酸包含与seq id no:59、60、61、68、69、70、83、84、85、86、87、88、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158或159中任一个所示的序列展现出至少85％序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含seq id no:59、60、61、68、69、70、83、84、85、86、87、88、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158或159中任一个所示的序列。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多核苷酸包含与seq id no:59、60、68、85、86、87、88、145、151或152中任一个所示的序列展现出至少90％序列同一性的核酸序列。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含seq id no:59、60、68、85、86、87或88中任一个所示的序列。

26、在任何实施方案的一些实施方案中，载体包含所述多核苷酸。在一些实施方案中，所述载体是病毒载体。在一些实施方案中，所述病毒载体是逆转录病毒载体(例如，慢病毒载体)。在任何实施方案的一些实施方案中，细胞包含所述caar。在任何实施方案的一些实施方案中，细胞包含所述多核苷酸或所述载体。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是淋巴细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是nk细胞或t细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是t细胞，并且所述t细胞是cd4+ t细胞或cd8+ t细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是获自受试者的原代细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是诱导多能干细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是已从诱导多能干细胞分化的。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞是同种异体细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞被工程化为免疫降低的。

27、在任何实施方案的一些实施方案中，所述细胞对pr3反应性b细胞展现出细胞毒性活性。在一些实施方案中，所述细胞毒性活性针对多个pr3反应性b细胞，其中所述多个pr3反应性b细胞对两个或更多个不同的pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(pr3-anca)表位具有特异性。在一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对至少2、3、4、5、6或7个不同的pr3anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对至少4个不同的pr3 anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对至少5个不同的pr3 anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对至少6个不同的pr3 anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述anca表位选自anca2(aqphsrpymas，seq id no:90)、anca3(pgshfcgg，seq id no:91)、anca4(vvlgahnvrtq，seq id no:92)、anca5(flnnydae，seq idno:93)、anca6(pvphgtqc，seq id no:94)和anca7(cfgdsggp，seq id no:95)。

28、在任何实施方案的一些实施方案中，组合物包含所述细胞。在一些实施方案中，所述组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂。在任何实施方案的一些实施方案中，所述组合物包含cd4+和cd8+ t细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，cd4+与cd8+ t细胞的比率是从为或约1:3至3:1。在一些实施方案中，cd4+与cd8+ t细胞的比率是为或约1:2至2:1。在一些实施方案中，cd4+与cd8+的比率是为或约1:1。在任何实施方案的一些实施方案中，所述组合物中大于或大于约90％、大于或大于约95％或者大于或大于约98％的细胞是cd3+t细胞。在任何实施方案的一些实施方案中，所述组合物中的至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的细胞表达所述caar。在任何实施方案的一些实施方案中，在所述组合物中的表达所述caar的多个细胞中，所述多个细胞中小于或小于约10％、小于或小于约9％、小于或小于约8％、小于或小于约7％、小于或小于约5％、小于或小于约4％、小于或小于约3％、小于或小于约2％或者小于或小于约1％的细胞展现出强直信号传导和/或抗原非依赖性活性或信号传导。在任何实施方案的一些实施方案中，杀伤pr3反应性b细胞的方法包括使pr3反应性b细胞与所述细胞或所述组合物接触。在一些实施方案中，所述方法是在体外或离体进行的。在一些实施方案中，所述方法是在受试者体内进行的。

29、在任何实施方案的一些实施方案中，所述pr3反应性b细胞包含多个pr3反应性b细胞，其中所述多个pr3反应性b细胞对两个或更多个不同的pr3抗嗜中性粒细胞胞质抗体(pr3-anca)表位具有特异性。在一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对2、3、4、5、6或7个不同的pr3 anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对至少4个不同的pr3 anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对至少5个不同的pr3 anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述多个pr3反应性b细胞对至少6个不同的pr3 anca表位具有特异性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述anca表位选自anca2(aqphsrpymas，seq id no:90)、anca3(pgshfcgg，seq id no:91)、anca4(vvlgahnvrtq，seq id no:92)、anca5(flnnydae，seq id no:93)、anca6(pvphgtqc，seq id no:94)和anca7(cfgdsggp，seq idno:95)。

30、在任何实施方案的一些实施方案中，在多个pr3反应性b细胞中，所述方法导致杀伤大于或大于约80％、大于或大于约90％、大于或大于约95％的pr3反应性b细胞。在一些实施方案中，所述pr3反应性b细胞是igg+。在任何实施方案的一些实施方案中，所述方法包括向需要治疗的受试者施用所述细胞或所述组合物。在一些实施方案中，所述疾病或障碍是自身免疫性病症。在任何实施方案的一些实施方案中，所述疾病或障碍是抗嗜中性粒细胞胞质抗体(anca)相关血管炎(aav)。在一些实施方案中，所述aav是pr3-aav。在任何实施方案的一些实施方案中，所述疾病或障碍选自肉芽肿性多血管炎(gpa)、显微镜下多血管炎(mpa)或嗜酸性肉芽肿性多血管炎(egpa)。在任何实施方案的一些实施方案中，所述受试者对pr3-anca呈阳性。在任何实施方案的一些实施方案中，所述方法包括测试所述受试者的pr3-anca。在一些实施方案中，所述方法包括验证所述受试者被测试为pr3-anca阳性。

31、在任何实施方案的一些实施方案中，所述受试者已经用针对aav的先前疗法(例如，一种或多种先前疗法)治疗。在一些实施方案中，所述受试者在用所述先前疗法治疗后未能实现缓解或已复发。在任何实施方案的一些实施方案中，所述先前疗法包括糖皮质激素、环磷酰胺(cyc)、利妥昔单抗(rtx)、血浆交换、阿伐可泮(avacopan)、甲氨蝶呤(mtx)、吗替麦考酚酯(mmf)、硫唑嘌呤(aza)、来氟米特(lef)、贝利木单抗、美泊利单抗和奥马珠单抗中的一种或多种。在一些实施方案中，所述糖皮质激素是泼尼松龙、甲泼尼龙、泼尼松、地塞米松中的一种或多种。

32、在任何实施方案的一些实施方案中，所述先前疗法包括缓解诱导疗法(例如，缓解诱导剂)。在一些实施方案中，所述缓解诱导疗法包括利妥昔单抗、环磷酰胺和糖皮质激素中的一种或多种。在一些实施方案中，所述糖皮质激素是泼尼松龙、甲泼尼龙、泼尼松和地塞米松中的一种或多种。在一些实施方案中，所述糖皮质激素是泼尼松龙。

33、在任何实施方案的一些实施方案中，所述先前疗法包括缓解维持疗法。在一些实施方案中，所述缓解维持疗法包括利妥昔单抗、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、吗替麦考酚酯、来氟米特、美泊利单抗和奥马珠单抗中的一种或多种。在任何实施方案的一些实施方案中，治疗患有pr3-anca血管炎的受试者的方法包括(i)向所述受试者施用缓解诱导疗法以及(ii)向所述受试者施用所述细胞或所述组合物。在一些实施方案中，所述缓解诱导疗法包括环磷酰胺。在一些实施方案中，在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之前，向所述受试者施用环磷酰胺。在一些实施方案中，在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之前至少1周、2周、3周或4周，向所述受试者施用环磷酰胺的疗程。在任何实施方案的一些实施方案中，所述缓解诱导疗法进一步包括糖皮质激素。在任何实施方案的一些实施方案中，所述糖皮质激素是泼尼松龙。

34、在任何实施方案的一些实施方案中，治疗患有pr3-anca血管炎的受试者的方法包括(i)向所述受试者施用环磷酰胺以及(ii)向所述受试者施用所述细胞或所述组合物。在任何实施方案的一些实施方案中，所述方法包括在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之前，向所述受试者施用环磷酰胺。在一些实施方案中，在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之前至少1周、2周、3周或4周，向所述受试者施用环磷酰胺的疗程。在任何实施方案的一些实施方案中，根据已经确定足以降低患有pr3-anca血管炎的患者的anca滴度的给药时间表施用环磷酰胺的所述疗程。在任何实施方案的一些实施方案中，在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之前，以2mg/kg/天的口服剂量施用环磷酰胺至少1周、2周、3周或4周。在任何实施方案的一些实施方案中，在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之前，以15mg/kg的iv剂量每2周施用环磷酰胺，多达3个剂量。在任何实施方案的一些实施方案中，在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之后，所述受试者不用环磷酰胺治疗。

35、在任何实施方案的一些实施方案中，所述方法包括在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之前，向所述受试者施用糖皮质激素。在任何实施方案的一些实施方案中，所述方法包括在向所述受试者施用所述细胞或所述组合物之后，向所述受试者施用糖皮质激素。在任何实施方案的一些实施方案中，治疗患有pr3-anca血管炎的受试者的方法包括(i)向所述受试者施用预调理疗法，所述预调理疗法已显示出有效耗尽anca，以及随后(ii)向所述受试者施用所述细胞或所述组合物。在一些实施方案中，所述预调理疗法包括环磷酰胺。